GB 4789.15-2016相比GB 4789.15-2010,最大的區別可能就在於對平皿的培養方式。2016版的國標在5.2中要求:瓊脂凝固後,正置平板,置28℃±1℃培養箱中培養,觀察並記錄培養至第5d的結果。
其實針對這一條,需要注意兩點:
第一,是需要對平板進行觀察的,不能直接培養至第5天計數,因為黴菌的特殊性,在培養過程中會產生大量孢子,導致整個平板蔓延。因此,在培養後的第2天開始,就要對平板進行觀察,並計數典型菌落,而這樣的觀察在之後每一天都應該進行,直至培養第5天。
第二,就是正置培養。這一點是16版國標與舊版最大的區別,10版之前的國標都是倒置培養的。而進行正置培養,很多朋友可能都會遇到平板被黴菌汙染的問題,這怎麼解決呢?
汙染原因與解決措施
一、培養箱環境汙染
很hen多duo實shi驗yan室shi培pei養yang黴mei菌jun采cai用yong的de是shi專zhuan用yong的de黴mei菌jun培pei養yang箱xiang,所suo以yi培pei養yang箱xiang空kong間jian裏li會hui有you大da量liang的de黴mei菌jun孢bao子zi。而er平ping皿min的de蓋gai和he底di是shi有you一yi定ding縫feng隙xi的de,尤you其qi是shi玻bo璃li平ping皿min縫feng隙xi還hai是shi比bi較jiao大da的de,正zheng置zhi培pei養yang中zhong,孢bao子zi會hui向xiang上shang飛fei揚yang通tong過guo縫feng隙xi落luo到dao平ping板ban的de培pei養yang基ji上shang,導dao致zhi汙wu染ran。細xi心xin地di實shi驗yan猿yuan可ke能neng發fa現xian,汙wu染ran的de菌jun落luo大da部bu分fen都dou是shi在zai平ping皿min邊bian緣yuan生sheng長chang的de。用yong一yi次ci性xing塑su料liao平ping皿min來lai培pei養yang,汙wu染ran的de概gai率lv就jiu會hui小xiao很hen多duo,因yin為wei一yi次ci性xing塑su料liao平ping皿min的de蓋gai和he底di之zhi間jian的de縫feng隙xi相xiang比bi之zhi下xia是shi比bi較jiao小xiao的de。因yin此ci培pei養yang箱xiang環huan境jing中zhong的de孢bao子zi可ke能neng會hui是shi主zhu要yao汙wu染ran源yuan。
這樣一來,解決的方法就應該是對培養箱進行殺菌。可以用75%酒精和新潔爾滅兩種消毒劑對培養箱進行了全麵的消毒,消毒完最好不要馬上用,消毒完最好放個幾天在使用。
應(ying)該(gai)注(zhu)意(yi)的(de)是(shi),這(zhe)樣(yang)的(de)殺(sha)菌(jun)操(cao)作(zuo)也(ye)是(shi)需(xu)要(yao)經(jing)常(chang)進(jin)行(xing)的(de),因(yin)為(wei)黴(mei)菌(jun)的(de)孢(bao)子(zi)是(shi)十(shi)分(fen)難(nan)清(qing)除(chu)的(de),而(er)每(mei)次(ci)培(pei)養(yang)可(ke)能(neng)又(you)會(hui)引(yin)進(jin)新(xin)的(de)汙(wu)染(ran)源(yuan),可(ke)以(yi)考(kao)慮(lv)每(mei)周(zhou)進(jin)行(xing)兩(liang)次(ci),保(bao)證(zheng)培(pei)養(yang)環(huan)境(jing)無(wu)汙(wu)染(ran)源(yuan)。
二、平皿冷凝水汙染
正zheng置zhi培pei養yang過guo程cheng中zhong,若ruo是shi平ping皿min的de上shang蓋gai有you泠ling凝ning水shui,在zai培pei養yang過guo程cheng中zhong冷leng凝ning水shui滴di落luo到dao培pei養yang基ji上shang,也ye極ji容rong易yi造zao成cheng菌jun落luo蔓man延yan,平ping皿min汙wu染ran。因yin此ci在zai培pei養yang之zhi前qian,一yi定ding要yao保bao證zheng平ping皿min幹gan燥zao,可ke以yi把ba平ping皿min放fang在zai37℃的環境裏烘幹,烘幹之後再進行培養,就會避免這個原因造成的汙染。
三、操作環境和培養基的汙染
因(yin)為(wei)無(wu)菌(jun)室(shi)裏(li)可(ke)能(neng)也(ye)會(hui)因(yin)為(wei)滅(mie)菌(jun)效(xiao)果(guo)不(bu)理(li)想(xiang)造(zao)成(cheng)汙(wu)染(ran)。小(xiao)編(bian)之(zhi)前(qian)工(gong)作(zuo)的(de)實(shi)驗(yan)室(shi),操(cao)作(zuo)台(tai)使(shi)用(yong)紫(zi)外(wai)線(xian)滅(mie)菌(jun),經(jing)常(chang)就(jiu)會(hui)滅(mie)菌(jun)不(bu)徹(che)底(di)有(you)孢(bao)子(zi)汙(wu)染(ran),尤(you)其(qi)是(shi)在(zai)進(jin)行(xing)過(guo)黴(mei)菌(jun)的(de)相(xiang)關(guan)檢(jian)測(ce)之(zhi)後(hou)。所(suo)以(yi)在(zai)進(jin)行(xing)過(guo)黴(mei)菌(jun)檢(jian)測(ce)之(zhi)後(hou),適(shi)當(dang)的(de)增(zeng)長(chang)滅(mie)菌(jun)時(shi)間(jian),可(ke)能(neng)會(hui)達(da)到(dao)比(bi)較(jiao)理(li)想(xiang)的(de)效(xiao)果(guo)。另(ling)外(wai),為(wei)了(le)徹(che)底(di)解(jie)決(jue)無(wu)菌(jun)室(shi)空(kong)間(jian)孢(bao)子(zi)汙(wu)染(ran)的(de)問(wen)題(ti),可(ke)以(yi)購(gou)買(mai)安(an)裝(zhuang)臭(chou)氧(yang)發(fa)生(sheng)器(qi),通(tong)過(guo)紫(zi)外(wai)線(xian)+臭氧的雙重消毒模式,效果就十分理想了。
大家如果還是想驗證一下究竟是什麼原因造成的汙染,這裏提供一個簡單的驗證試驗:在正常檢測的環境中倒一組空白平皿,將這些平皿分為AB兩組,其中A組用封口膜將平皿封好,B組不封,均放置在培養箱中正置培養。若是A組B組均有黴菌生長,則需要考慮培養基汙染或者操作環境的汙染;若是A組不生長黴菌而B組生長,則需要考慮是培養箱內的環境汙染。通過這個小試驗,可以基本上確定汙染源,然後針對汙染源進行相應的處理。
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