大多數細胞都適合在pH值7.2-7.4範圍內生長,當然不同種類細胞對pH值的要求也不盡一致,同一種細胞在不同生長時期的最適pH值也有所不同。原代培養細胞對pH值要求較嚴,傳代培養細胞對pH值要求較寬。一般來講,細胞對偏酸環境的耐受性要強於偏堿環境。培養過程中,嚴格控製培養液的pH值,有利於細胞的生長。細胞生長越旺盛,代謝越活躍,pH值改變越迅速。代謝物的滯留使培養液變酸變黃,對細胞生長不利。因此,通常在培養液中均加入一定量的緩衝液,以保持pH值在一定範圍內的相對穩定。
平衡鹽溶液(Balanced Salt Solution,BSS)與細胞生長狀態下的pH值、滲透壓等環境狀態一致,具有維持滲透壓、控製酸堿平衡、供給細胞生存代謝所必需的能量和無機鹽成分等作用,可滿足體外實驗中,細胞生存並維持一定的代謝的基本需要。細胞在BSS中可生存幾個小時,且BSS配方簡單,成本低,因此成為配製各種組織細胞培養用液的基礎溶液,也是組織細胞體外短暫保存,分離、純化和洗滌等實驗操作的常用溶液。
磷酸鹽緩衝液(PBS) 是最常用的平衡鹽溶液(BSS)之一。由磷酸一氫鹽和磷酸二氫鹽的混合溶液組成,其中磷酸一氫鹽是呈堿性的,而磷酸二氫鹽是呈酸性的。當微生物分泌酸性物質時會與磷酸一氫鹽反應生成磷酸二氫鹽;當分泌堿性物質時則與磷酸二氫鹽反應生成磷酸一氫鹽。這樣就使整個體係維持在一個PH較穩定的範圍。由於磷酸緩衝液近中性,恰在生理性pH範圍緩衝力最強,且成本相對較低,成為生命科學領域應用最廣、最普及的無機鹽緩衝液,也是免疫學、細胞生物學和分子生物學實驗室必備的常用緩衝液之一。
0.85%生理鹽水 能(neng)保(bao)持(chi)細(xi)胞(bao)內(nei)衛(wei)的(de)滲(shen)透(tou)壓(ya)一(yi)致(zhi),避(bi)免(mian)細(xi)菌(jun)的(de)細(xi)胞(bao)壁(bi)被(bei)破(po)壞(huai)而(er)影(ying)響(xiang)細(xi)菌(jun)的(de)生(sheng)長(chang)和(he)繁(fan)殖(zhi)。避(bi)免(mian)細(xi)胞(bao)破(po)裂(lie),它(ta)可(ke)以(yi)使(shi)細(xi)胞(bao)在(zai)一(yi)個(ge)液(ye)體(ti)環(huan)境(jing)中(zhong),維(wei)持(chi)正(zheng)常(chang)生(sheng)理(li)學(xue)平(ping)衡(heng)。避(bi)免(mian)操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)微(wei)生(sheng)物(wu)失(shi)水(shui)或(huo)吸(xi)水(shui)過(guo)多(duo),導(dao)致(zhi)死(si)亡(wang)。菌(jun)落(luo)總(zong)數(shu)要(yao)求(qiu)不(bu)太(tai)高(gao),但(dan)是(shi)生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)對(dui)於(yu)滲(shen)透(tou)壓(ya)的(de)維(wei)持(chi)還(hai)是(shi)有(you)一(yi)定(ding)作(zuo)用(yong)的(de),特(te)別(bie)是(shi)對(dui)於(yu)那(na)些(xie)“半死半活”細菌的檢出很重要。但生理鹽水也不是在任何情況下都適用的,檢測鹽份較高的樣品時(如烤鰻、醬油等),不適合采用生理鹽水,這種情況下用蒸餾水更合適。磷酸鹽緩衝稀釋液是SN(出口食品行業檢驗標準)檢測菌落總數時推薦時,在GB中(zhong)倒(dao)沒(mei)明(ming)確(que)提(ti)出(chu)這(zhe)個(ge),而(er)是(shi)一(yi)般(ban)性(xing)推(tui)薦(jian)生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)。由(you)於(yu)磷(lin)酸(suan)鹽(yan)緩(huan)衝(chong)稀(xi)釋(shi)液(ye)配(pei)製(zhi)較(jiao)為(wei)複(fu)雜(za),所(suo)以(yi)在(zai)正(zheng)常(chang)情(qing)況(kuang)下(xia)檢(jian)測(ce)一(yi)般(ban)樣(yang)品(pin)用(yong)生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui),當(dang)樣(yang)品(pin)鹽(yan)份(fen)較(jiao)高(gao)時(shi)用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。
無菌水通常是滅菌後的蒸餾水。做黴菌和酵母檢驗的稀釋液,用的就是蒸餾水。GB 4789.15-1994shiyongguogaoyanzhashipeiyangji,yangpinxishizaishiyongshengliyanshui,rongyigaoluanyannongdu。suoyi,biaozhunzhidingzhejiaoxuanzelezhengliushui。shijishang,zhengliushuiwulunduiyudanxibaodeyuanheshengwuhaishizhenheshengwu,doushiyouhaide。congGB/T 4789.15-2003開(kai)始(shi),刪(shan)除(chu)了(le)這(zhe)種(zhong)培(pei)養(yang)基(ji)。但(dan)是(shi)沒(mei)有(you)改(gai)變(bian)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。在(zai)具(ju)體(ti)工(gong)作(zuo)中(zhong),還(hai)是(shi)盡(jin)量(liang)不(bu)要(yao)使(shi)用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)來(lai)稀(xi)釋(shi)樣(yang)品(pin)為(wei)好(hao)。因(yin)為(wei)通(tong)常(chang)一(yi)份(fen)樣(yang)品(pin)常(chang)常(chang)需(xu)要(yao)同(tong)時(shi)檢(jian)驗(yan)細(xi)菌(jun)和(he)真(zhen)菌(jun),不(bu)可(ke)能(neng)單(dan)獨(du)稱(cheng)量(liang),之(zhi)後(hou)分(fen)別(bie)稀(xi)釋(shi)的(de)。
蛋白腖是動植物蛋白經酶水解後的月示、腖、肽tai及ji氨an基ji酸suan等deng複fu雜za的de混hun合he物wu,吸xi濕shi性xing很hen強qiang,易yi溶rong於yu水shui,係xi兩liang性xing電dian解jie質zhi,有you一yi定ding緩huan衝chong作zuo用yong。有you學xue者zhe自zi己ji做zuo實shi驗yan時shi候hou用yong蛋dan白bai腖dong水shui代dai替ti磷lin酸suan鹽yan或huo者zhe生sheng理li鹽yan水shui稀xi釋shi,目mu的de是shi讓rang樣yang品pin中zhong菌jun種zhong在zai稀xi釋shi過guo程cheng中zhong保bao持chi活huo性xing,免mian於yu死si亡wang,但dan是shi稀xi釋shi時shi間jian一yi定ding要yao控kong製zhi在zai15分鍾之內。
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