一、矽膠基質填料
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、正相色譜 正相色譜用的固定相通常為矽膠（Silica）以及其他具有極性官能團胺基團，如（NH2，APS）和氰基團（CN，CPS）的鍵合相填料。
由於矽膠表麵的矽羥基（SiOH）或(huo)其(qi)他(ta)極(ji)性(xing)基(ji)團(tuan)極(ji)性(xing)較(jiao)強(qiang)，因(yin)此(ci)
，分(fen)離(li)的(de)次(ci)序(xu)是(shi)依(yi)據(ju)樣(yang)品(pin)中(zhong)各(ge)組(zu)分(fen)的(de)極(ji)性(xing)大(da)小(xiao)，即(ji)極(ji)性(xing)較(jiao)弱(ruo)的(de)組(zu)份(fen)最(zui)先(xian)被(bei)衝(chong)洗(xi)出(chu)色(se)譜(pu)柱(zhu)。正(zheng)相(xiang)色(se)譜(pu)使(shi)用(yong)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)極(ji)性(xing)相(xiang)對(dui)比(bi)固(gu)定(ding)相(xiang)低(di)，如(ru)正(zheng)已(yi)烷(wan)（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
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、反向色譜 反向色譜用的填料常是以矽膠為基質
，表麵鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。反向色譜所使用的流動相極性較強，通常為水、緩衝液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組分最先被衝洗出，而極性弱的組分會在色譜柱上有更強的保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）
、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
二、聚合物填料 聚合物填料多為聚苯乙烯―二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等
，其重要優點是在PH值為1―14均可使用。相對於矽膠基質的C18填料，這類填料具有更強的疏水性
；大孔的聚合物對蛋白質等樣品的分離非常有效。現有的聚合物填料的缺點是相對矽膠基質填料
，色譜柱柱效較低。
三、其它無機填料 其它HPLC的(de)無(wu)機(ji)填(tian)料(liao)色(se)譜(pu)柱(zhu)也(ye)已(yi)經(jing)商(shang)品(pin)化(hua)由(you)於(yu)其(qi)特(te)殊(shu)的(de)性(xing)質(zhi)，一(yi)般(ban)僅(jin)限(xian)於(yu)特(te)殊(shu)的(de)用(yong)途(tu)。如(ru)
，石(shi)墨(mo)化(hua)碳(tan)黑(hei)正(zheng)逐(zhu)漸(jian)成(cheng)為(wei)反(fan)向(xiang)色(se)譜(pu)柱(zhu)填(tian)料(liao)。這(zhe)種(zhong)填(tian)料(liao)的(de)分(fen)離(li)不(bu)同(tong)於(yu)矽(gui)膠(jiao)基(ji)質(zhi)烷(wan)基(ji)鍵(jian)合(he)相(xiang)，石(shi)墨(mo)化(hua)碳(tan)的(de)表(biao)麵(mian)即(ji)是(shi)保(bao)留(liu)的(de)基(ji)礎(chu)，不(bu)再(zai)需(xu)其(qi)它(ta)的(de)表(biao)麵(mian)改(gai)性(xing)。該(gai)柱(zhu)填(tian)料(liao)一(yi)般(ban)比(bi)烷(wan)基(ji)鍵(jian)合(he)相(xiang)矽(gui)膠(jiao)或(huo)多(duo)孔(kong)聚(ju)合(he)物(wu)填(tian)料(liao)的(de)保(bao)留(liu)能(neng)力(li)更(geng)強(qiang)。石(shi)墨(mo)化(hua)碳(tan)可(ke)用(yong)於(yu)分(fen)離(li)某(mou)些(xie)幾(ji)何(he)異(yi)構(gou)體(ti)
，由(you)於(yu)在(zai)HPLC流動相中不會被溶解，這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可以用於HPLC。氧化鋁微粒剛性強，可製成穩定的色譜柱柱床
，其優點是可以在PH高達12的de流liu動dong相xiang中zhong使shi用yong。但dan由you於yu氧yang化hua鋁lv與yu堿jian性xing化hua合he物wu的de作zuo用yong也ye很hen強qiang，應ying用yong範fan圍wei受shou到dao一yi定ding限xian製zhi
，所suo以yi未wei能neng廣guang泛fan應ying用yong。新xin型xing色se譜pu氧yang化hua鋯gao基ji質zhi填tian料liao也ye可ke用yong於yuHPLC。商品化的隻有聚合物塗層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應用PH1-14，溫度可達100℃。由於氧化鋯填料是最近幾年才開始研究
，加之麵臨的實驗難度，其重要用途與優勢尚在進行之中。
怎樣選擇填料粒度 目前，商品化的色譜填料粒度從1um到超過30um均有銷售
，而目前分析分離主要用3和5um填料進行。填料的粒度主要影響填充柱的兩個參數，即柱效和背壓。粒度越小，柱壓越大，柱壓的增加限製了粒度小於3um的(de)填(tian)料(liao)應(ying)用(yong)。在(zai)相(xiang)同(tong)選(xuan)擇(ze)性(xing)條(tiao)件(jian)下(xia)，提(ti)高(gao)柱(zhu)效(xiao)可(ke)提(ti)高(gao)分(fen)離(li)度(du)，但(dan)不(bu)是(shi)唯(wei)一(yi)的(de)因(yin)素(su)。如(ru)果(guo)固(gu)定(ding)相(xiang)選(xuan)擇(ze)是(shi)正(zheng)確(que)
，但(dan)是(shi)分(fen)離(li)度(du)不(bu)夠(gou)，那(na)麼(me)選(xuan)用(yong)更(geng)小(xiao)的(de)粒(li)度(du)的(de)填(tian)料(liao)是(shi)很(hen)有(you)用(yong)的(de)。3um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%
；然而

，3um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍bei。與yu此ci同tong時shi，柱zhu效xiao提ti高gao意yi味wei著zhe在zai相xiang同tong條tiao件jian下xia可ke以yi選xuan用yong更geng短duan的de色se譜pu柱zhu，即ji相xiang同tong的de塔ta板ban數shu或huo分fen離li能neng力li，但dan是shi柱zhu長chang更geng短duan
，以yi縮suo短duan分fen析xi時shi間jian。另ling外wai
，可ke以yi采cai用yong低di粘zhan度du的de溶rong劑ji做zuo流liu動dong相xiang或huo增zeng加jia色se譜pu柱zhu的de使shi用yong溫wen度du，比bi如ru用yong乙yi腈jing代dai替ti甲jia醇chun，以yi降jiang低di色se譜pu柱zhu的de壓ya力li。