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| 色譜法，又稱層析法。根據其分離原理，有吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與排阻色譜等方法。 吸附色譜是利用吸附劑對被分離物質的吸附能力不同，用溶劑或氣體洗脫，以使組分分離。常用的吸附劑有氧化鋁、矽膠、聚酰胺等有吸附活性的物質。 分配色譜是利用溶液中被分離物質在兩相中分配係數不同，以使組分分離。其中一相為液體，塗布或使之鍵合在固體載體上，稱固定相；另一相為液體或氣體，稱流動相。常用的載體有矽膠、矽藻土、矽鎂型吸附劑與纖維素粉等。 離子交換色譜是利用被分離物質在離子交換樹脂上的離子交換勢不同而使組分分離。常用的有不同強度的陽、陰離子交換樹脂，流動相一般為水或含有有機溶劑的緩衝液。 排(pai)阻(zu)色(se)譜(pu)又(you)稱(cheng)凝(ning)膠(jiao)色(se)譜(pu)或(huo)凝(ning)膠(jiao)滲(shen)透(tou)色(se)譜(pu)，是(shi)利(li)用(yong)被(bei)分(fen)離(li)物(wu)質(zhi)分(fen)子(zi)量(liang)大(da)小(xiao)的(de)不(bu)同(tong)和(he)在(zai)填(tian)料(liao)上(shang)滲(shen)透(tou)程(cheng)度(du)的(de)不(bu)同(tong)，以(yi)使(shi)組(zu)分(fen)分(fen)離(li)。常(chang)用(yong)的(de)填(tian)料(liao)有(you)分(fen)子(zi)篩(shai)、葡聚糖凝膠、微孔聚合物、微孔矽膠或玻璃珠等，可根據載體和試樣的性質，選用水或有機溶劑為流動相。 色譜法的分離方法，有柱色譜法、紙色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、高(gao)效(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)法(fa)等(deng)。色(se)譜(pu)所(suo)用(yong)溶(rong)劑(ji)應(ying)與(yu)試(shi)樣(yang)不(bu)起(qi)化(hua)學(xue)反(fan)應(ying)，並(bing)應(ying)用(yong)純(chun)度(du)較(jiao)高(gao)的(de)溶(rong)劑(ji)。色(se)譜(pu)時(shi)的(de)溫(wen)度(du)，除(chu)氣(qi)相(xiang)色(se)譜(pu)法(fa)或(huo)另(ling)有(you)規(gui)定(ding)外(wai)，係(xi)指(zhi)在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)操(cao)作(zuo)。 分離後各成分的檢出，應采用各單體中規定的方法。通常用柱色譜、紙色譜或薄層色譜分離有色物質時，可根據其色帶進行區分，對有些無色物質，可在245-365nm的de紫zi外wai燈deng下xia檢jian視shi。紙zhi色se譜pu或huo薄bo層ceng色se譜pu也ye可ke噴pen顯xian色se劑ji使shi之zhi顯xian色se。薄bo層ceng色se譜pu還hai可ke用yong加jia有you熒ying光guang物wu質zhi的de薄bo層ceng矽gui膠jiao，采cai用yong熒ying光guang熄xi滅mie法fa檢jian視shi。用yong紙zhi色se譜pu進jin行xing定ding量liang測ce定ding時shi，可ke將jiang色se譜pu斑ban點dian部bu分fen剪jian下xia或huo挖wa取qu，用yong溶rong劑ji溶rong出chu該gai成cheng分fen，再zai用yong分fen光guang光guang度du法fa或huo比bi色se法fa測ce定ding，也ye可ke用yong色se譜pu掃sao描miao儀yi直zhi接jie在zai紙zhi或huo薄bo層ceng板ban上shang測ce出chu，也ye可ke用yong色se譜pu掃sao描miao儀yi直zhi接jie以yi紙zhi或huo薄bo層ceng板ban上shang測ce出chu。柱zhu色se譜pu、氣相色譜和高效液相色譜可用接於色譜柱出口處的各種檢測器檢測。柱色譜還可分部收集流出液後用適宜方法測定。 柱色譜法 所用色譜管為內徑均勻、下(xia)端(duan)縮(suo)口(kou)的(de)硬(ying)質(zhi)玻(bo)璃(li)管(guan)，下(xia)端(duan)用(yong)棉(mian)花(hua)或(huo)玻(bo)璃(li)纖(xian)維(wei)塞(sai)住(zhu)，管(guan)內(nei)裝(zhuang)有(you)吸(xi)附(fu)劑(ji)。色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)大(da)小(xiao)，吸(xi)附(fu)劑(ji)的(de)品(pin)種(zhong)和(he)用(yong)量(liang)，以(yi)及(ji)洗(xi)脫(tuo)時(shi)的(de)流(liu)速(su)，均(jun)按(an)各(ge)單(dan)體(ti)中(zhong)的(de)規(gui)定(ding)。吸(xi)附(fu)劑(ji)的(de)顆(ke)粒(li)應(ying)盡(jin)可(ke)能(neng)保(bao)持(chi)大(da)小(xiao)均(jun)勻(yun)，以(yi)保(bao)證(zheng)良(liang)好(hao)的(de)分(fen)離(li)效(xiao)果(guo)，除(chu)另(ling)有(you)規(gui)定(ding)外(wai)通(tong)常(chang)多(duo)采(cai)用(yong)直(zhi)徑(jing)為(wei)0.07-0.15mm的顆粒。吸附劑的活性或吸附力對分離效果有影響，應予注意。 吸附劑的填裝 幹法：jiangxifujiyicijiarusepuguan，zhendongguanbishiqijunyunxiachen，ranhouyanguanbihuanhuanjiarukaishicengxishishiyongdeliudongxiang，huojiangsepuguanxiaduanchukoujiahuosai，jiarushiliangdeliudongxiang，xuankaihuoshiliudongxianghuanhuandichu，ranhouziguandinghuanhuanjiaruxifuji，shiqijunyundirunshixiachen，zaiguanneixingchengsongjinshidudexifuceng。caozuoguochengzhongyingbaochiyouchongfendeliudongxiangliuzaixifucengdeshangmian。shifa：將jiang吸xi附fu劑ji與yu流liu動dong相xiang混hun合he，攪jiao拌ban以yi除chu去qu空kong氣qi泡pao，徐xu徐xu傾qing入ru色se譜pu管guan中zhong，然ran後hou再zai加jia入ru流liu動dong相xiang，將jiang附fu著zhe於yu管guan壁bi的de吸xi附fu劑ji洗xi下xia，使shi色se譜pu柱zhu表biao麵mian平ping整zheng。 俟填裝吸附劑所用流動相從色譜柱自然流下，液麵將柱表麵相平時，即加試樣溶液。 試樣的加入 除chu另ling有you規gui定ding外wai，將jiang試shi樣yang溶rong於yu層ceng析xi時shi使shi用yong的de流liu動dong相xiang中zhong，再zai沿yan色se譜pu管guan壁bi緩huan緩huan加jia入ru。注zhu意yi勿wu使shi吸xi附fu劑ji翻fan起qi。或huo將jiang試shi樣yang溶rong於yu適shi當dang的de溶rong劑ji中zhong。與yu少shao量liang吸xi附fu劑ji混hun勻yun，再zai使shi溶rong劑ji揮hui發fa去qu盡jin後hou使shi呈cheng鬆song散san狀zhuang；將混有試樣的吸附劑加在已製備好的色譜柱上麵。如試樣在常用溶劑中不溶解，可將試樣與適量的吸附劑在乳缽中研磨混勻後加入。 洗脫 除chu另ling有you規gui定ding外wai，通tong常chang按an流liu動dong相xiang洗xi脫tuo能neng力li大da小xiao，遞di增zeng變bian換huan流liu動dong相xiang的de品pin種zhong和he比bi例li，分fen別bie分fen部bu收shou集ji流liu出chu液ye，至zhi流liu出chu液ye中zhong所suo含han成cheng分fen顯xian著zhu減jian少shao或huo不bu再zai含han有you時shi，再zai改gai變bian流liu動dong相xiang的de品pin種zhong和he比bi例li。操cao作zuo過guo程cheng中zhong應ying保bao持chi有you充chong分fen的de流liu動dong相xiang留liu在zai吸xi附fu層ceng的de上shang麵mian。 紙色譜法 以紙為載體，用單一溶劑或混合溶劑進行分配。亦即以紙上所含水分或其他物質為固定相，用流動相進行展開的分配色譜法。 suoyonglvzhiyingzhidijunyunpingzheng，juyouyidingjixieqiangdu，bixubuhanhuiyingxiangsepuxiaoguodezazhi，yebuyingyusuoyongxiansejiqizuoyong，yimianyingxiangfenlihejianbiexiaoguo，biyaoshikezuoteshuchulihouzaiyong。 試樣經層析後可用比移值（Rf）表示各組成成分的位置（比移值=原點中心至色譜斑點中心的距離與原點中心至流動相前沿的距離之比），youyuyingxiangbiyizhideyinsujiaoduo，yinciyibancaiyongzaixiangtongshiyantiaojianxiaduizhaowuzhiduibiyiquedingqiyitong。zuoweidantijianbieshi，shiyangsuoxianzhusepubandiandeyanse（或熒光）與供置，應與對照（標準）樣所顯主色的譜斑點或供試品-對照品（1∶1）混合所顯的主色譜斑點相同。作為質量指標（純度）檢查時，可取一定量的試樣，經展開後，按各單體的規定，檢視其所顯雜質色譜斑點的個數或呈色（或熒光）的強度。作為含量測定時，可將色譜斑點剪下洗脫後，再用適宜的方法測定，也可用色譜掃描儀測定。 1、下行法 所suo用yong色se譜pu缸gang一yi般ban為wei圓yuan形xing或huo長chang方fang形xing玻bo璃li缸gang，缸gang上shang有you磨mo口kou玻bo璃li蓋gai，應ying能neng密mi閉bi，蓋gai上shang有you孔kong，可ke插cha入ru分fen液ye漏lou鬥dou，以yi加jia入ru流liu動dong相xiang。在zai近jin缸gang頂ding端duan有you一yi用yong支zhi架jia架jia起qi的de玻bo璃li槽cao作zuo為wei流liu動dong相xiang的de容rong器qi，槽cao內nei有you一yi玻bo璃li棒bang，用yong以yi支zhi持chi色se譜pu濾lv紙zhi使shi其qi自zi然ran下xia垂chui，避bi免mian流liu動dong相xiang沿yan濾lv紙zhi與yu溶rong劑ji槽cao之zhi間jian發fa生sheng虹hong吸xi現xian象xiang。 取適當的色譜濾紙按纖維長絲方向切成適當大小的紙條，離紙條上端適當的距離（使色譜紙上端能足夠浸入溶劑槽內的流動相中，並使點樣基線能在溶劑槽側的玻璃支持棒下數厘米處）用鉛筆劃一點樣基線，必要時色譜紙下端可切成鋸齒形，以便於流動相滴下。 將jiang試shi樣yang溶rong於yu適shi當dang的de溶rong劑ji中zhong，製zhi成cheng一yi定ding濃nong度du的de溶rong劑ji。用yong微wei量liang吸xi管guan或huo微wei量liang注zhu射she器qi吸xi取qu溶rong劑ji，點dian於yu點dian樣yang基ji線xian上shang，溶rong液ye宜yi分fen次ci點dian加jia，每mei次ci點dian加jia後hou，俟qi其qi自zi然ran幹gan燥zao、低溫烘幹或經溫熱氣流吹幹。樣點直徑一般不超過0.5cm，樣點通常應為圓形。 jiangdianyanghoudesepulvzhishangduanfangzairongjicaonei，bingyongbolibangyazhu，shisepuzhitongguocaocebolizhichibangziranxiachui，dianyangjixianzaizhichibangxiashulimichu。sepukaishiqian，sepugangneiyonggedantizhongsuoguidingderongjidezhengqibaohe，yibankezaisepugangdibufangyizhuangyouliudongxiangdepingmin，huojiangjinyouliudongxiangdelvzhitiaofuzhezaisepugangdeneibishang，fangzhiyidingshijian，qirongjihuifashigangneichongmanbaohezhengqi。ranhoutianjialiudongxiang，shijinmeirongjicaoneilvzhi，liudongxiangjijingmaoxiguanzuoyongyanlvzhiyidongjinxingzhankaizhiguidingjulihou，quchulvzhi，biaomingliudongxiangqianyanweizhi，qiliudongxianghuisanhouanguidingfangfajianchusepubandian。 2、上行法 色se譜pu缸gang基ji本ben和he下xia行xing法fa相xiang似si，唯wei除chu去qu溶rong劑ji槽cao和he支zhi架jia，並bing在zai色se譜pu缸gang蓋gai上shang的de孔kong中zhong加jia塞sai，塞sai中zhong插cha入ru玻bo璃li懸xuan鉤gou，以yi便bian將jiang點dian樣yang後hou的de色se譜pu濾lv紙zhi掛gua在zai鉤gou上shang。色se譜pu濾lv紙zhi一yi般ban長chang約yue25cm，寬度則視需要而定。必要時可將色譜濾紙卷成筒形。點樣基線距底邊約2.5cm，點樣方法與下行法相同。色譜缸內加入適量流動相，放置，俟流動相蒸氣飽和後，再下降懸鉤，使色譜濾紙浸入流動相約0.5cm，流動相即經毛細管作用沿色譜濾紙上升，除另有規定外，一般展開至15cm後，取出晾幹，按規定方法檢視。 色譜可以向一個方向進行，即單向色譜；也可進行雙向色譜，即先向一個方向展開，取出，俟流動相完全揮發後，將濾紙轉90°，再用原流動相或另一種流動相進行展。亦可多次展開，連續展或徑向色譜等。 薄層色譜法 按各單體所規定的載體，放入適當容器，加入適量水以配成懸浮液，在厚度均勻一致的50×200mm或200×200mm平滑玻璃板上將此懸浮液均布成0.25mm的厚度，風幹後一般在110度下幹燥0.5-1h（或按單體規定）。 以離薄層板一端約25mm的位置作為點樣基線，用微量吸管按規定量吸取試樣液和對照（標準）液，點於基線上，點與點之間的距離在10mm以上，液點的直徑約3mm，風幹後，基線一端向下，將薄層板放入展開溶劑，溶劑層深10mm，並預經開展溶劑的蒸汽飽和。在展開溶劑從基線上升至規定距離（一般為15cm）後，取出薄層板，風幹，然後按規定的方法，對斑點的位置和顏色進行檢查。 氣相色譜法 氣相色譜法是在以適當的固定相做成的柱管內，利用氣體（載氣）作為移動相，使試樣（氣體、液體或固體）在氣體狀態下展開，在色譜柱內分離後，各種成分先後進入檢測器，用記錄儀記錄色譜譜圖。 在對裝置進行調試後，按各單體的規定條件調整柱管、檢測器、溫度和載氣流量。進樣口溫度一般應高於柱溫30-50度。如用火焰電離檢測器，其溫度應等於或高於柱溫，但不得低於100度，以免水汽凝結。色譜上分析成分的峰的位置，以滯留時間（從注入試樣液到出現成分最高峰的時間）和滯留容量（滯留時間×載氣流量）來表示。這些在一定條件下，就能反應出物質所具有特殊值，並據此確定試樣成分。 根據色譜上出現的物質成分的峰麵積或峰高進行定量。峰麵積可用麵積測定儀測定，按半寬度法求得（即以峰1/2處的峰寬×峰高求得）。fenggaodecedingfangfashicongfenggaodedingdianxiangjiluzhihengzuobiaozhunchuixian，zhaochucichuixianyufengdeliangxiaduanlianjiexiandejiaodian，jiyicijiaodianzhifengdingdiandejulichangduweifenggao。 定量方法可分以下三種： 1、內標準法 取qu標biao準zhun被bei測ce成cheng分fen，按an依yi次ci增zeng加jia或huo減jian少shao的de已yi知zhi階jie段duan量liang，各ge自zi分fen別bie加jia入ru各ge單dan體ti所suo規gui定ding的de定ding量liang內nei標biao準zhun物wu質zhi中zhong，調tiao製zhi標biao準zhun溶rong液ye。分fen別bie取qu此ci標biao準zhun液ye的de一yi定ding量liang注zhu入ru色se譜pu柱zhu，根gen據ju色se譜pu圖tu取qu標biao準zhun被bei測ce成cheng分fen的de峰feng麵mian積ji和he峰feng高gao和he內nei標biao物wu質zhi的de峰feng麵mian積ji和he峰feng高gao的de比bi例li為wei縱zong座zuo標biao，取qu標biao準zhun被bei測ce成cheng分fen量liang和he內nei標biao物wu質zhi量liang之zhi比bi，或huo標biao準zhun被bei測ce成cheng分fen量liang為wei橫heng坐zuo標biao，製zhi成cheng標biao準zhun曲qu線xian。 然ran後hou按an單dan體ti中zhong所suo規gui定ding的de方fang法fa調tiao製zhi試shi樣yang液ye。在zai調tiao製zhi試shi樣yang液ye時shi，預yu先xian加jia入ru與yu調tiao製zhi標biao準zhun液ye時shi等deng量liang的de內nei標biao物wu質zhi。然ran後hou按an製zhi作zuo標biao準zhun曲qu線xian時shi的de同tong樣yang條tiao件jian下xia得de出chu的de色se譜pu，求qiu出chu被bei測ce成cheng分fen的de峰feng麵mian積ji或huo峰feng高gao和he內nei標biao物wu質zhi的de峰feng積ji或huo峰feng高gao之zhi比bi，再zai按an標biao準zhun曲qu線xian求qiu出chu被bei測ce成cheng分fen的de含han量liang。 所用的內標物質，應采用其峰麵積的位置與被測成分的峰的位置盡可能接近並與被測成分以外的峰位置完全分離的穩定的物質。 2、絕對標準曲線法 取標準被測成分 按(an)依(yi)次(ci)增(zeng)加(jia)或(huo)減(jian)少(shao)階(jie)段(duan)法(fa)，各(ge)自(zi)調(tiao)製(zhi)成(cheng)標(biao)準(zhun)液(ye)，注(zhu)入(ru)一(yi)定(ding)量(liang)後(hou)，按(an)色(se)譜(pu)圖(tu)取(qu)標(biao)準(zhun)被(bei)測(ce)成(cheng)分(fen)的(de)峰(feng)麵(mian)積(ji)或(huo)峰(feng)高(gao)為(wei)縱(zong)座(zuo)標(biao)，而(er)以(yi)標(biao)準(zhun)被(bei)測(ce)成(cheng)分(fen)的(de)含(han)量(liang)為(wei)橫(heng)坐(zuo)標(biao)，製(zhi)成(cheng)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)。然(ran)後(hou)按(an)單(dan)體(ti)中(zhong)所(suo)規(gui)定(ding)的(de)方(fang)法(fa)製(zhi)備(bei)試(shi)樣(yang)液(ye)。取(qu)試(shi)樣(yang)液(ye)按(an)製(zhi)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)時(shi)相(xiang)同(tong)的(de)條(tiao)件(jian)作(zuo)出(chu)色(se)譜(pu)，求(qiu)出(chu)被(bei)測(ce)成(cheng)分(fen)的(de)峰(feng)麵(mian)積(ji)和(he)峰(feng)高(gao)，再(zai)按(an)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)求(qiu)出(chu)被(bei)測(ce)成(cheng)分(fen)的(de)含(han)量(liang)。 3、峰麵積百分率法 以色譜中所得各種成分的峰麵積的總和為100，按各成分的峰麵積總和之比，求出各成分的組成比率。 氣液色譜法 這時所指的氣液色譜法，主要用於各種香料物質的分析，基本條件和參數主要依照美國精油協會（EOA）於1979年所建議的方法。其基本原理、操作、標準狀態等均與上述氣相色譜法相同。 1、柱 用304號合金所製不鏽鋼管，長3m，內徑2.16-2.57mm，外徑3.18mm。底物：極性柱為聚乙二醇20M（Carbowax 20M）,分子量約2萬；非極性柱為氣相色譜級甲基矽氧烷（SE-30），或二甲基矽氧烷（OV-1或OV-101）。底物濃度：重量的105。固體載體：10目或20目熔融煆燒過的矽藻土，經矽烷化和酸洗後，其自由傾落密度為0.2g/cm3，最小120目，最大80目。裝填密度每cm3應大於0.24g。 2、載氣 氦。最低流量為每分鍾25-50ml。 分析狀態 極性柱：起始溫度，最低75℃；最終溫度，最高225℃。升溫速度，2℃/min～8℃/min 非極性柱：起始溫度，最低75℃；最終溫度，不超過275℃；升溫速度，2℃/min～8 ℃/min 進樣溫度：225-250℃。試樣量：0.1-1ul。 檢測器：用熱導池。檢測器的操作條件應維持恒定。 |
