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緩衝溶液能幫助維持分析方法的穩定，而不會因為微弱的環境改變的情況下而造成分析結果的改變。
緩衝溶液是被用來維持pH值的穩定。它們是通過維持弱酸及其共軛堿的平衡從而防止了pH值的改變。
緩衝溶液是如何工作的？
根據LeChatelier原理，當一些強酸(或者更多的氫離子“H+”) 加jia入ru到dao弱ruo酸suan及ji其qi共gong軛e堿jian的de平ping衡heng混hun合he物wu中zhong時shi，平ping衡heng會hui被bei向xiang左zuo移yi動dong。同tong樣yang，如ru果guo在zai混hun合he物wu中zhong加jia入ru強qiang堿jian，氫qing離li子zi濃nong度du下xia降jiang的de幅fu度du會hui小xiao於yu所suo預yu期qi加jia入ru堿jian的de量liang。
當配製緩衝溶液時
應該遵循以下幾個原則
1.在配製緩衝液前，建議用定值校準緩衝液標準品來校對電子pH計。
2.根據所需緩衝液的濃度，精確地稱出所需緩衝鹽的重量。
3.把所需的緩衝鹽加到已經裝有HPLC色譜級超純水的容量燒瓶中，並充分攪拌至完全溶解。
4.使用pH探針或pH計去測量溶液的pH值。
5.通過添加少量的強酸或強堿，將溶液的pH值調整至所需的值。
6.調整至所需pH值後，將溶液用色譜級超純水稀釋至最終的所需體積容量，並混合均勻。
HPLC緩(huan)衝(chong)液(ye)通(tong)常(chang)用(yong)於(yu)控(kong)製(zhi)在(zai)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)分(fen)析(xi)中(zhong)所(suo)不(bu)希(xi)望(wang)出(chu)現(xian)的(de)二(er)次(ci)相(xiang)互(hu)作(zuo)用(yong)。此(ci)外(wai)，緩(huan)衝(chong)液(ye)也(ye)被(bei)用(yong)來(lai)工(gong)作(zuo)分(fen)析(xi)物(wu)的(de)電(dian)離(li)狀(zhuang)態(tai)，以(yi)確(que)保(bao)分(fen)析(xi)物(wu)不(bu)會(hui)同(tong)時(shi)出(chu)現(xian)一(yi)個(ge)以(yi)上(shang)的(de)電(dian)離(li)狀(zhuang)態(tai)。
化合物的pKa值代表此化合物的50%離子化和50%中性時的pH值。如果在此pH值下分析此化合物，你會看到分裂峰的出現或者不穩定的保留時間。因此，我們建議所有的分析方法的pH值都應該控製在目標分析化合物的pKa值正負兩個pH單位以上。
當配製等度流動相的時候，我們
還需要考慮以下幾個因素來確保方法的穩定
1.盡可能提前預混合你所使用的流動相，因為這將防止經過泵混合流動相時會出現的錯誤。
2.每mei一yi次ci都dou需xu要yao始shi終zhong使shi用yong相xiang同tong的de配pei製zhi方fang法fa及ji流liu程cheng。例li如ru，如ru果guo你ni方fang法fa是shi先xian加jia水shui，那na你ni每mei次ci都dou必bi須xu是shi先xian加jia水shui。如ru果guo你ni是shi先xian測ce定ding單dan獨du的de成cheng分fen然ran後hou再zai混hun合he，那na你ni就jiu必bi須xu每mei次ci都dou按an這zhe個ge流liu程cheng來lai做zuo。記ji得de千qian萬wan不bu要yao改gai變bian這zhe一yi個ge固gu定ding的de配pei製zhi流liu程cheng，因yin為wei這zhe個ge配pei製zhi流liu程cheng的de改gai變bian讓rang分fen析xi物wu的de保bao留liu時shi間jian可ke能neng出chu現xian很hen大da的de改gai變bian。
以下的這個實驗例子展示了當流動相
用以下不同的方式來混合時，
峰保留時間可能出現的改變
方法一
先加水：先用量筒量400mL的水並倒進1L的容量瓶中，然後用甲醇稀釋至容量瓶的刻度。
方法二
先加甲醇：先用量筒量600mL的甲醇並倒進1L的容量瓶中，然後用水稀釋至容量瓶的刻度。
方法三
甲醇和水各自先量好：先用量筒量600mL的甲醇並倒進流動相瓶中，然後用同樣的量筒量400mL的水並倒進已經裝有甲醇的流動相瓶中。
方法四
讓液相的泵來混合A瓶中的水和B瓶中的甲醇。
小結
huanchongyedenongdubixufeichangjingquedipinghenghao，yiquebaozaisuoyoudetiaojianxiadounengdadaowanquanrongjie。zaifanxiangtiaojianxia，ruguofangfatiaojianshibaohanlegaobiliyoujixiangdehua（例如跨度很大的梯度），則很有可能需要控製緩衝液的濃度，以確保不會出現緩衝鹽的析出。
當開發一個可靠穩定的HPLC方法時，流動相的貢獻跟色譜柱固定相的選擇性一樣重要，另外流動相的選擇與配製也是一樣重要的。
