製(zhi)備(bei)型(xing)高(gao)效(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)儀(yi)通(tong)常(chang)都(dou)被(bei)認(ren)為(wei)和(he)大(da)容(rong)量(liang)色(se)譜(pu)柱(zhu)和(he)高(gao)流(liu)速(su)有(you)關(guan)聯(lian)的(de)。然(ran)而(er)並(bing)不(bu)是(shi)以(yi)設(she)備(bei)的(de)大(da)小(xiao)和(he)係(xi)統(tong)消(xiao)耗(hao)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)的(de)多(duo)少(shao)來(lai)決(jue)定(ding)製(zhi)備(bei)高(gao)效(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu),而(er)是(shi)依(yi)據(ju)分(fen)離(li)目(mu)的(de)來(lai)決(jue)定(ding)。與(yu)分(fen)析(xi)液(ye)相(xiang)不(bu)同(tong),製(zhi)備(bei)液(ye)相(xiang)的(de)目(mu)的(de)是(shi)對(dui)產(chan)品(pin)的(de)單(dan)體(ti)進(jin)行(xing)提(ti)取(qu)和(he)純(chun)化(hua)。
與傳統的純化方法(如蒸餾、萃取)比較,製備液相是一種更有效的分離方法,因此被廣泛應用在樣品和產品的提取和純化上。隨著合成、植化、生化和製藥等領域對高純度組份的需求不斷增加,製備型液相色譜儀應用的領域也在迅速的擴大發展。
製備液相與分析液相的區別
和(he)製(zhi)備(bei)液(ye)相(xiang)對(dui)應(ying)的(de),是(shi)分(fen)析(xi)液(ye)相(xiang)。它(ta)們(men)的(de)最(zui)大(da)差(cha)別(bie),不(bu)在(zai)於(yu)外(wai)形(xing),而(er)在(zai)於(yu)目(mu)的(de)。分(fen)析(xi)液(ye)相(xiang)的(de)目(mu)的(de)當(dang)然(ran)是(shi)為(wei)了(le)分(fen)析(xi)樣(yang)品(pin),有(you)什(shen)麼(me)成(cheng)分(fen),含(han)量(liang)多(duo)少(shao),也(ye)叫(jiao)做(zuo)定(ding)性(xing)定(ding)量(liang)。要(yao)做(zuo)好(hao)分(fen)析(xi)液(ye)相(xiang),最(zui)關(guan)注(zhu)的(de)是(shi)分(fen)離(li)度(du)和(he)靈(ling)敏(min)度(du),要(yao)分(fen)得(de)開(kai),測(ce)得(de)到(dao),測(ce)得(de)準(zhun)。而(er)製(zhi)備(bei)液(ye)相(xiang)是(shi)利(li)用(yong)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)分(fen)離(li)能(neng)力(li),來(lai)去(qu)除(chu)雜(za)質(zhi),得(de)到(dao)高(gao)純(chun)樣(yang)品(pin)。為(wei)什(shen)麼(me)強(qiang)調(tiao)純(chun)度(du)呢(ne)?
在實驗室裏,紅外、紫外、核(he)磁(ci)這(zhe)些(xie)儀(yi)器(qi),都(dou)要(yao)求(qiu)樣(yang)品(pin)達(da)到(dao)足(zu)夠(gou)的(de)純(chun)度(du),才(cai)能(neng)得(de)到(dao)準(zhun)確(que)的(de)結(jie)果(guo)。除(chu)了(le)實(shi)驗(yan)室(shi),藥(yao)品(pin)的(de)生(sheng)產(chan)也(ye)需(xu)要(yao)純(chun)化(hua),特(te)別(bie)是(shi)生(sheng)物(wu)製(zhi)品(pin)和(he)藥(yao)劑(ji)。很(hen)多(duo)生(sheng)物(wu)製(zhi)品(pin)如(ru)果(guo)是(shi)直(zhi)接(jie)吃(chi)下(xia)去(qu),跟(gen)吃(chi)個(ge)雞(ji)蛋(dan)也(ye)沒(mei)什(shen)麼(me)不(bu)同(tong),直(zhi)接(jie)注(zhu)射(she)才(cai)能(neng)保(bao)留(liu)活(huo)性(xing)成(cheng)份(fen)。而(er)注(zhu)射(she)治(zhi)療(liao),藥(yao)物(wu)會(hui)直(zhi)接(jie)進(jin)入(ru)血(xue)液(ye),所(suo)以(yi)純(chun)度(du)非(fei)常(chang)重(zhong)要(yao)。在(zai)實(shi)驗(yan)室(shi)裏(li),用(yong)於(yu)製(zhi)備(bei)的(de)液(ye)相(xiang),配(pei)置(zhi)和(he)普(pu)通(tong)的(de)分(fen)析(xi)液(ye)相(xiang)差(cha)不(bu)多(duo)。有(you)泵(beng),有(you)進(jin)樣(yang)器(qi),有(you)柱(zhu)子(zi),有(you)檢(jian)測(ce)器(qi)。為(wei)了(le)收(shou)集(ji)分(fen)離(li)出(chu)來(lai)的(de)化(hua)合(he)物(wu),製(zhi)備(bei)液(ye)相(xiang)通(tong)常(chang)還(hai)配(pei)一(yi)個(ge)餾(liu)分(fen)收(shou)集(ji)器(qi)。餾(liu)分(fen)收(shou)集(ji)器(qi)就(jiu)像(xiang)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)的(de)收(shou)納(na)盒(he),把(ba)每(mei)次(ci)分(fen)析(xi)的(de)同(tong)類(lei)物(wu)質(zhi)收(shou)納(na)到(dao)一(yi)起(qi)。餾(liu)分(fen)收(shou)集(ji)器(qi)可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)串(chuan)聯(lian)在(zai)檢(jian)測(ce)器(qi)後(hou)麵(mian)。也(ye)可(ke)以(yi)連(lian)接(jie)一(yi)個(ge)三(san)通(tong),和(he)檢(jian)測(ce)器(qi)並(bing)聯(lian),都(dou)接(jie)在(zai)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)後(hou)麵(mian)。有(you)些(xie)實(shi)驗(yan)室(shi)裏(li)需(xu)要(yao)收(shou)集(ji)的(de)量(liang)很(hen)大(da),一(yi)個(ge)餾(liu)分(fen)收(shou)集(ji)器(qi)裝(zhuang)不(bu)完(wan),還(hai)可(ke)以(yi)並(bing)聯(lian)好(hao)幾(ji)個(ge)。根(gen)據(ju)檢(jian)測(ce)器(qi)的(de)信(xin)號(hao)顯(xian)示(shi),當(dang)化(hua)合(he)物(wu)出(chu)峰(feng)的(de)時(shi)候(hou),儀(yi)器(qi)會(hui)自(zi)動(dong)收(shou)集(ji)。一(yi)般(ban)按(an)照(zhao)時(shi)間(jian)編(bian)程(cheng),也(ye)可(ke)以(yi)根(gen)據(ju)檢(jian)測(ce)器(qi)的(de)信(xin)號(hao)強(qiang)度(du)自(zi)動(dong)觸(chu)發(fa)。一(yi)個(ge)個(ge)化(hua)合(he)物(wu)通(tong)過(guo)餾(liu)分(fen)收(shou)集(ji)器(qi)收(shou)集(ji)到(dao)小(xiao)瓶(ping)或(huo)者(zhe)試(shi)管(guan)裏(li),也(ye)可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)管(guan)路(lu)連(lian)接(jie)到(dao)更(geng)大(da)的(de)瓶(ping)子(zi)。
製(zhi)備(bei)液(ye)相(xiang)有(you)很(hen)多(duo)種(zhong)分(fen)類(lei)方(fang)法(fa),比(bi)如(ru)按(an)壓(ya)力(li)分(fen)類(lei),或(huo)者(zhe)按(an)產(chan)量(liang)分(fen)類(lei),彼(bi)此(ci)之(zhi)間(jian)有(you)交(jiao)叉(cha),沒(mei)有(you)明(ming)確(que)的(de)標(biao)準(zhun)。不(bu)同(tong)類(lei)型(xing)的(de)製(zhi)備(bei)液(ye)相(xiang)有(you)著(zhe)不(bu)同(tong)的(de)特(te)點(dian)。比(bi)如(ru)這(zhe)根(gen)用(yong)在(zai)生(sheng)產(chan)上(shang)的(de)製(zhi)備(bei)液(ye)相(xiang)柱(zhu),模(mo)樣(yang)和(he)實(shi)驗(yan)室(shi)裏(li)有(you)些(xie)不(bu)同(tong)。僅(jin)僅(jin)內(nei)徑(jing)就(jiu)有(you)1.6m,色譜柱的重量有36dunzhong,meitianxiaohaodeliudongxiangnengfangmanbangexiaoyouyongchi。chuletebiedade,haiyoutebiexiaode。biruweikejizhibei,yechangbeichengweiweiliangzhibei,tadeyouquzhichuzaiyuweiliangliufenshoujiqi,keyizhijieshiyongMALDI點樣板。
製備色譜柱的材質及其特點
gezhongguigedebolizhuzizaishiyanshilitouhenrongyidedao,erqiejiagedilian,danbolizhuzizhimingderuodianshitanengchengshoudeyalihenxiao,qiefeichangrongyiposui。dangyouyuyalitaixiaoerdaozhiliudongxiangliusuhenmandeshihou,gaoweiyemianhuojiagaoyakongqi(或者氮氣)的采用是一個簡單的解決辦法。在底下加真空,也能在一定程度上解決這個問題。
不鏽鋼柱子具有良好的耐腐蝕、抗壓力性能,但其價格相對很貴。如果,隻有很小的分離任務且經費也允許,市麵上直徑為1cm的(de)小(xiao)型(xing)製(zhi)備(bei)柱(zhu)就(jiu)是(shi)首(shou)選(xuan)。有(you)機(ji)玻(bo)璃(li)柱(zhu)子(zi)也(ye)能(neng)抗(kang)壓(ya)力(li)耐(nai)腐(fu)蝕(shi),相(xiang)對(dui)不(bu)鏽(xiu)鋼(gang)柱(zhu)子(zi)而(er)言(yan),它(ta)是(shi)半(ban)透(tou)明(ming)的(de),可(ke)以(yi)看(kan)到(dao)液(ye)體(ti)的(de)運(yun)行(xing)狀(zhuang)態(tai),對(dui)有(you)色(se)的(de)物(wu)質(zhi)其(qi)特(te)點(dian)就(jiu)更(geng)為(wei)突(tu)出(chu)。
裝柱方法的選擇
genjugudingxiangkeliduhezhuzidechicun,caiyongbutongdezhuangzhufangfa,wangwangzhuangtianyuehaofenlixiaoguoyuehao。zhuangzhuxiaoguogentianliaodekeliduguanxihenda,kelidudejianshaohuidaozhizhuangzhudenandu。yibanlaishuo,kelizhijingxiaoyu20-30um的固定相采用濕法裝填。所謂“敲擊-裝填”技術適用於顆粒直徑大於25um的固定相。濕法的目的是迫使相對稀鬆的 固定相懸漿以高速裝入色譜柱子,從而減少空隙的形成。然而,當柱直徑大於20mm,所加壓力為30-40barshi,gaoyaxuanjiangzhuangtianjishujiubiandeshifenfuza。weijiangxiaokeligudingxiangzhuangrugengdadezhibeixingsepuzhu,kecaiyongzhuchangyasuojishu。zhezhongfangfa,xianjianggudingxiangxuanjiang(或偶爾是幹填充物)裝入柱中加壓,利用物理方法將其壓緊。壓緊的方法有兩種:徑向壓縮和軸向壓縮。濕法裝柱需要一定的設備,在柱子填完後,應用有柱效的測量,對柱效低的柱子應該重填。
流動相的選擇
除chu了le和he分fen析xi色se譜pu同tong樣yang的de考kao慮lv外wai,在zai選xuan用yong流liu動dong相xiang時shi,要yao考kao慮lv色se譜pu分fen離li後hou麵mian加jia有you旋xuan轉zhuan蒸zheng發fa等deng二er次ci分fen離li操cao作zuo。一yi般ban來lai說shuo,不bu宜yi采cai用yong高gao毒du性xing溶rong劑ji,對dui多duo元yuan溶rong劑ji要yao盡jin可ke能neng的de少shao用yong。如ru果guo產chan品pin中zhong含han有you大da量liang溶rong劑ji,溶rong劑ji的de純chun度du也ye要yao考kao慮lv在zai其qi中zhong。
組分保留時間的估計
用分析柱子在同等色譜條件下(同樣的固定相和流動相)測定保留時間後,按照單一組分的線流速(不是體積流速)一定,通過計算可以知道組分的大致保留時間區域。分析譜圖的峰形狀,對確定保留時間也有很大的參考價值。
產品的收集
手工餾分收集費時費力,自動餾分收集器有很大的方便。許多實驗室和工廠都采用了餾分收集器。
超載、邊緣切割、中心切割、放大技術與非線性效用
zaizhibeisepuzhong,yinweimeiyoubiyaodadaofenxisepunayangdefenlidu,keyizaiyidingfanweineidadajiadajinyangdenongduhetiji。zaizuofenlideshihou,yeyouyixiefenxisepudeshihou,bunengyongdaodejiqiao。yinweipianfuguanxi,buzaizhelixushu。
柱轉換技術
通過接頭或者閥門,實現柱子的簡單延長,或者比較方便地實現對其中一個(或幾個)組分的精製。
新製備技術
moniyidongchuangkeyilianxujinyang,bingkeyiliyongbianyuanqiegexiaoyong,erqiecaiyonglezhuqiehuanjishu,nenggenghaodeliyongrongjihetianliao,yijingyingyongyugongyehuashengchan。qililunhejishuyeriyiwanshan。yingtousepu、超臨界流體色譜、逆流色譜環形色譜、氣相製備色譜等在科研和工業生產中也得到了應用。
文章(文字)來源:色譜學堂等網絡
手機版




