一、流動相溶劑瓶的保養
溶劑瓶是流動相的起點,通常是盛放水相溶液或是有機相溶液。
1、水相溶液,對於水相溶液來說,首要的問題是防止汙染。對於溶劑瓶我們要做的非常重要的工作就是勤換流動相,常換常新。
2、youjixiangrongye,duiyuyoujixiangrongye,keyibuyongdanxinxijunfanzhidewenti。danshiyoujixiangrongyifashengjuhe,tebieshiyijingzaishiyideguangzhaotiaojianxiajiyifashengjuhe,pingzilijiuhuichuxianyixiexuzhuangdejuhechendianwu。weilefangzhijuheguochengdefasheng,zhuangyijingshiyaoyongzongsederongjiping,bimianyangguangzhishe,genghuanyijingshiyingdangqiqupingdishengyuderongye。
3、清qing洗xi過guo濾lv,溶rong劑ji瓶ping裏li的de過guo濾lv頭tou,其qi作zuo用yong是shi為wei了le防fang止zhi溶rong液ye瓶ping中zhong的de顆ke粒li雜za質zhi進jin入ru到dao儀yi器qi的de流liu路lu係xi統tong中zhong,它ta的de材cai質zhi通tong常chang分fen為wei玻bo璃li燒shao結jie石shi英ying和he不bu鏽xiu鋼gang,如ru果guo不bu慎shen堵du塞sai會hui造zao成cheng流liu動dong相xiang吸xi液ye不bu暢chang,因yin此ci必bi須xu進jin行xing清qing洗xi,玻bo璃li材cai質zhi的de通tong常chang是shi用yong稀xi硝xiao酸suan泡pao,而er不bu鏽xiu鋼gang材cai質zhi的de可ke以yi直zhi接jie進jin行xing超chao聲sheng清qing洗xi。
二、高壓泵的保養
bengshiyexiangsepudehexin,bengjiangliudongxiangcongrongjipingshusongdaoyexiangliuluxitongzhong,bingyaozaigaoyaxiabaochiliuliangheyalidewending。zhuangtaizhengchangdegaoyabengshiyexiangsepuzhunquefenxidejichu,suoyipingriyidingyaozhongshiduibengdeweihu。
1、bengyalibodong,henduoqingkuangxia,bengdewentifanyingzaiyalishang,yalibodongyoushichangjiandeyileiwenti。tongchangwomenkeyitongguozhongxinqingxiliuluhezaicituoqiliudongxiangjiayijiejue。
2、過濾白頭保養,在泵的維護裏還有一項常做的工作就是更換清洗閥上的過濾白頭,通常判斷的標準是純水以5mL/min流速清洗的時候,如果壓力超過1MPa則考慮更換。
三、進樣器的保養
進樣器分手動和自動兩大類,雖然兩者工作模式不同,但使用的要點是基本一致的。
1、防fang止zhi交jiao叉cha汙wu染ran,自zi動dong進jin樣yang器qi常chang見jian的de問wen題ti是shi交jiao叉cha汙wu染ran,交jiao叉cha汙wu染ran產chan生sheng的de原yuan因yin很hen直zhi接jie,樣yang品pin殘can留liu在zai進jin樣yang針zhen內nei外wai表biao麵mian,並bing隨sui下xia一yi次ci進jin樣yang進jin入ru色se譜pu係xi統tong。要yao解jie決jue交jiao叉cha汙wu染ran,主zhu要yao靠kao清qing洗xi。
2、精細操作,手動進樣器的操作要點大致相同,應使用液相色譜LC專用進樣針,進樣時插針應插到底,不使用時將針頭留在進樣器內,使用前後都要及時清洗。
四、色譜柱的保養
色譜柱是化合物分離的關鍵。保養良好的色譜柱具有很高的塔板數,且儀器基線平穩。
1、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會衝動柱內填料,因此在調節流速時應該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉動不能過緩(如前所述)。
2、應逐漸改變溶劑的組成,特別是反相色譜中,不應直接從有機溶劑改變為全部是水,反之亦然。
3、色譜柱反衝,納譜分析小分子分離液相色譜柱ChromCore係列和EcoPak係列色譜柱可以反衝;納譜分析手性色譜柱UniChiral係列色譜柱可以反衝,反衝可以除去留在柱頭的雜質。但是納譜分析生物大分子液相色譜柱BioCore係列色譜柱不要反衝,否則反衝會迅速降低柱效。
4、選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),以yi避bi免mian固gu定ding相xiang被bei破po壞huai。有you時shi可ke以yi在zai進jin樣yang器qi前qian麵mian連lian接jie一yi預yu柱zhu,分fen析xi柱zhu是shi鍵jian合he矽gui膠jiao時shi,預yu柱zhu為wei矽gui膠jiao,可ke使shi流liu動dong相xiang在zai進jin入ru分fen析xi柱zhu之zhi前qian預yu先xian被bei矽gui膠jiao“飽和”,避免分析柱中的矽膠基質被溶解。
5、bimianjiangjizhifuzadeyangpinyouqishishengwuyangpinzhijiezhuruzhunei,xuyaoduiyangpinjinxingyuchulihuozhezaijinyangqihesepuzhuzhijianlianjieyibaohuzhu。baohuzhuyibanshitianyouxiangsigudingxiangdeduanzhu。baohuzhukeyierqieyinggaijingchanggenghuan。
6、jingchangyongqiangrongjichongxisepuzhu,qingchubaoliuzaizhuneidezazhi。zaijinxingqingxishi,duiliuluxitongzhongliudongxiangdezhihuanyingyixianghunrongderongjizhujianguodu,meizhongliudongxiangdetijiyingshizhutijide20倍左右,即常規分析需要50~75ml。
下麵列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序,作為參考:
矽膠柱以正已烷(或庚烷)、二(er)氯(lv)甲(jia)烷(wan)和(he)甲(jia)醇(chun)依(yi)次(ci)衝(chong)洗(xi),然(ran)後(hou)再(zai)以(yi)相(xiang)反(fan)順(shun)序(xu)依(yi)次(ci)衝(chong)洗(xi),所(suo)有(you)溶(rong)劑(ji)都(dou)必(bi)須(xu)嚴(yan)格(ge)脫(tuo)水(shui)。甲(jia)醇(chun)能(neng)洗(xi)去(qu)殘(can)留(liu)的(de)強(qiang)極(ji)性(xing)雜(za)質(zhi),已(yi)烷(wan)使(shi)矽(gui)膠(jiao)表(biao)麵(mian)重(zhong)新(xin)活(huo)化(hua)。
反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次衝洗,再以相反順序依次衝洗。
如果下一步分析用的流動相不含緩衝液,那麼可以省略最後用水衝洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質,在甲醇(乙腈)衝洗時重複注射100~200µl四氫呋喃數次有助於除去強疏水性雜質。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞碸數次。此外,用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質汙染。
陽離子交換柱可用稀酸緩衝液衝洗,陰離子交換柱可用稀堿緩衝液衝洗,除去交換性能強的鹽,然後用水、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表麵的有機物)、甲醇、水依次衝洗。
7、保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發幹燥。禁止將緩衝溶液留在柱內靜置過晚上或更長時間。
8、色譜柱使用過程中,如果壓力升高,一種可能是燒結濾片被堵塞,這時應更換濾片或將其取出進行清洗;另一種可能是大分子進入柱內,使柱頭被汙染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現塌陷,死體積增大。
在後兩種情況發生時,小心擰開柱接頭,用潔淨小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度(注意把被汙染填料取淨)再把柱內填料整平。然後用適當溶劑濕潤的固定相(與柱內相同)填滿色譜柱,壓平,再擰緊柱接頭。這樣處理後柱效能得到改善,但是很難恢複到新柱的水平。
柱子失效通常是柱端部分,在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5~30mm),可以起到保護、延長柱壽命的作用。采用保護柱會損失一定的柱效,這是值得的。
通常以矽膠為基質的色譜柱,隻能在pH2~9範fan圍wei內nei使shi用yong。柱zhu子zi使shi用yong一yi段duan時shi間jian後hou,可ke能neng有you一yi些xie吸xi附fu作zuo用yong強qiang的de物wu質zhi保bao留liu於yu柱zhu頂ding,特te別bie是shi一yi些xie有you色se物wu質zhi更geng易yi看kan清qing被bei吸xi著zhe在zai柱zhu頂ding的de填tian料liao上shang。新xin的de色se譜pu柱zhu在zai使shi用yong一yi段duan時shi間jian後hou柱zhu頂ding填tian料liao可ke能neng塌ta陷xian,使shi柱zhu效xiao下xia降jiang,這zhe時shi也ye可ke補bu加jia填tian料liao使shi柱zhu效xiao恢hui複fu。
每次工作完後,用洗脫能力強的洗脫液衝洗,例如ODS柱宜用甲醇衝洗至基線平衡。當采用鹽緩衝溶液作流動相時,使用完後應用無鹽流動相衝洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會腐蝕不鏽鋼管道,不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經常使用,應每隔4~5天開機衝洗15分鍾。
五、檢測器的保養
1、光源部分
檢(jian)測(ce)器(qi)中(zhong)非(fei)常(chang)重(zhong)要(yao)的(de)部(bu)件(jian)是(shi)光(guang)源(yuan),光(guang)源(yuan)對(dui)發(fa)射(she)能(neng)量(liang)有(you)要(yao)求(qiu),一(yi)旦(dan)能(neng)量(liang)衰(shuai)減(jian)到(dao)一(yi)定(ding)程(cheng)度(du),就(jiu)會(hui)出(chu)現(xian)基(ji)線(xian)噪(zao)聲(sheng)變(bian)大(da),靈(ling)敏(min)度(du)降(jiang)低(di)等(deng)一(yi)係(xi)列(lie)影(ying)響(xiang)使(shi)用(yong)的(de)問(wen)題(ti),因(yin)此(ci)光(guang)源(yuan)是(shi)一(yi)個(ge)消(xiao)耗(hao)品(pin)。通(tong)常(chang)紫(zi)外(wai)燈(deng)的(de)壽(shou)命(ming)是(shi)2000h,當到達這個時限的時候,我們就要特別關注燈的能量狀況,可以通過儀器維護軟件中自帶的“燈能量測試”功能來判斷,測試的結果會分別評估低、中、高三個波長段的能量,一旦某個波長段的測試結果顯示失敗,就表示需要更換燈。
2、檢測池
jianceqizhonglingyigezhongyaobujianshijiancechi,yejiaoliutongchi。tongchangdajiaguanxindeyigewentishijiancechibeidudiao,yinweijiancechitongchangbushihennaiya,suoyiyidanbeidujiuhenkenengzaochengsunhuai。shishishangjiancechitongchangbutairongyibeidu,yuanyinshijihusuoyoudekelizazhidouhuibeisepuzhulanxiale,suoyidusaijianceqidedongxijibendoubushilaiziyangpinde,henkenengshihoulai“產生”的,比如含鹽流動相殘留在檢測池中導致鹽析出。
六、廢液的處置
液相色譜儀LCdefeiyedabufenhanyouyoujirongji,huiduirentichanshengyidingdeweihai,duihuanjingyehuichanshengwuran,yanjinsuiyiqingdao,yingjishichuli。muqian,guoneidabufenshiyanshishijiangfeiyesongdaozhuanmendefeiyechulizhanjizhongjinxingwuhaihuachuli。
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