因為塵埃或其它任何雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和單向閥,因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相最好在玻璃容器內蒸餾,而常用的方法是濾過,可采用Millipore濾膜(0.2μm或0.45μm)等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒(或片)。輸液泵的濾器應經常清洗或更換。
使用後沒有及時清洗泵
liudongxiangbuyinghanyourenhefushixingwuzhi,hanyouhuanchongyedeliudongxiangbuyingbaoliuzaibengnei,youqishizaitingbengguoyehuogengchangshijiandeqingkuangxia。ruguojianghanhuanchongyedeliudongxiangliuzaibengnei,youyuzhengfahuoxielou,shenzhizhishiyouyurongyedejingzhi,jiukenengxichuyandeweixijingti,zhexiejingtijiangheshangshugutiweiliyiyangsunhuaimifenghuanhezhusaideng。yinci,bixubengruchunshuijiangbengchongfenqingxihou,zaihuanchengshiheyusepuzhubaocunheyouliyubengweihuderongji(對於反相鍵合矽膠固定相,可以是甲醇或甲醇-水)。
流動相走空
泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完,否則空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封環,最終產生漏液。
沒有流動相流出,又無壓力指示怎麼辦?
可能是泵內有大量氣體,這時可打開泄壓閥,使泵在較大流量(如5ml/min)下運轉,將氣泡排盡,也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環磨損,需更換。
壓力和流量不穩了?
原因可能是氣泡,需要排除;或huo者zhe是shi單dan向xiang閥fa內nei有you異yi物wu,可ke卸xie下xia單dan向xiang閥fa,浸jin入ru丙bing酮tong內nei超chao聲sheng清qing洗xi。有you時shi可ke能neng是shi砂sha濾lv棒bang內nei有you氣qi泡pao,或huo被bei鹽yan的de微wei細xi晶jing粒li或huo滋zi生sheng的de微wei生sheng物wu部bu分fen堵du塞sai,這zhe時shi,可ke卸xie下xia砂sha濾lv棒bang浸jin入ru流liu動dong相xiang內nei超chao聲sheng除chu氣qi泡pao,或huo將jiang砂sha濾lv棒bang浸jin入ru稀xi酸suan(如4mol/L硝酸)內迅速除去微生物,或將鹽溶解,再立即清洗。
壓力為啥過高或過低?
可能是是管路被堵塞,需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應逐段進行。
在進行梯度洗脫時,由於多種溶劑混合,而且組成不斷變化,因此帶來一些特殊問題,必須充分重視:
PS:(在(zai)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)中(zhong)對(dui)組(zu)分(fen)複(fu)雜(za)的(de)樣(yang)品(pin)采(cai)用(yong)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)的(de)方(fang)法(fa)。在(zai)同(tong)一(yi)個(ge)分(fen)析(xi)周(zhou)期(qi)中(zhong),按(an)一(yi)定(ding)程(cheng)序(xu)不(bu)斷(duan)改(gai)變(bian)流(liu)動(dong)相(xiang)的(de)濃(nong)度(du)配(pei)比(bi),稱(cheng)為(wei)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)。從(cong)而(er)可(ke)以(yi)使(shi)一(yi)個(ge)複(fu)雜(za)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)性(xing)質(zhi)差(cha)異(yi)較(jiao)大(da)的(de)組(zu)分(fen)能(neng)按(an)各(ge)自(zi)適(shi)宜(yi)的(de)容(rong)量(liang)因(yin)子(zi)k達到良好的分離目的。
梯度洗脫的優點:1.縮短分析周期;2.提高分離能力;3.峰型得到改善,很少拖尾;4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。)
梯度洗脫的流動相選擇不當
要yao注zhu意yi溶rong劑ji的de互hu溶rong性xing,不bu相xiang混hun溶rong的de溶rong劑ji不bu能neng用yong作zuo梯ti度du洗xi脫tuo的de流liu動dong相xiang。有you些xie溶rong劑ji在zai一yi定ding比bi例li內nei混hun溶rong,超chao出chu範fan圍wei後hou就jiu不bu互hu溶rong,使shi用yong時shi更geng要yao引yin起qi注zhu意yi。當dang有you機ji溶rong劑ji和he緩huan衝chong液ye混hun合he時shi,還hai可ke能neng析xi出chu鹽yan的de晶jing體ti,尤you其qi使shi用yong磷lin酸suan鹽yan時shi需xu特te別bie小xiao心xin。
忽略的空白梯度洗脫
梯ti度du洗xi脫tuo所suo用yong的de溶rong劑ji純chun度du要yao求qiu更geng高gao,以yi保bao證zheng良liang好hao的de重zhong現xian性xing。進jin行xing樣yang品pin分fen析xi前qian必bi須xu進jin行xing空kong白bai梯ti度du洗xi脫tuo,以yi辨bian認ren溶rong劑ji雜za質zhi峰feng,因yin為wei弱ruo溶rong劑ji中zhong的de雜za質zhi富fu集ji在zai色se譜pu柱zhu頭tou後hou會hui被bei強qiang溶rong劑ji洗xi脫tuo下xia來lai。用yong於yu梯ti度du洗xi脫tuo的de溶rong劑ji需xu徹che底di脫tuo氣qi,以yi防fang止zhi混hun合he時shi產chan生sheng氣qi泡pao。
忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化
hunherongjidezhanduchangsuizuchengerbianhua,yinerzaitiduxituoshichangchuxianyalidebianhua。lirujiachunheshuizhandudoujiaoxiao,dangerzheyixiangjinbilihunheshizhanduzengdahenduo,cishidezhuyadayueshijiachunhuoshuiweiliudongxiangshideliangbei。yinciyaozhuyifangzhitiduxituoguochengzhongyalichaoguoshuyebenghuosepuzhunengchengshoudezuidayali。
關於六通閥的正確使用和維護
①樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾,以減少微粒對進樣閥的磨損。
②轉動閥芯時不能太慢,更不能停留在中間位置,否則流動相受阻,使泵內壓力劇增,甚至超過泵的最大壓力;再轉到進樣位時,過高的壓力將使柱頭損壞。
③為防止緩衝鹽和樣品殘留在進樣閥中,每次分析結束後應衝洗進樣閥。通常可用水衝洗,或先用能溶解樣品的溶劑衝洗,再用水衝洗。
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