一、矽膠基質填料
1、正相色譜 正相色譜用的固定相通常為矽膠(Silica)以及其他具有極性官能團胺基團,如(NH2,APS)和氰基團(CN,CPS)的鍵合相填料。
由於矽膠表麵的矽羥基(SiOH)huoqitajixingjituanjixingjiaoqiang,yinci,fenlidecixushiyijuyangpinzhonggezufendejixingdaxiao,jijixingjiaoruodezufenzuixianbeichongxichusepuzhu。zhengxiangsepushiyongdeliudongxiangjixingxiangduibigudingxiangdi,ruzhengyiwan(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
2、反向色譜 反向色譜用的填料常是以矽膠為基質,表麵鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。反向色譜所使用的流動相極性較強,通常為水、緩衝液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組分最先被衝洗出,而極性弱的組分會在色譜柱上有更強的保留。
常用的反向填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
二、聚合物填料 聚合物填料多為聚苯乙烯―二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等,其重要優點是在PH值為1―14均可使用。相對於矽膠基質的C18填料,這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物對蛋白質等樣品的分離非常有效。現有的聚合物填料的缺點是相對矽膠基質填料,色譜柱柱效較低。
三、其它無機填料 其它HPLC的(de)無(wu)機(ji)填(tian)料(liao)色(se)譜(pu)柱(zhu)也(ye)已(yi)經(jing)商(shang)品(pin)化(hua)由(you)於(yu)其(qi)特(te)殊(shu)的(de)性(xing)質(zhi),一(yi)般(ban)僅(jin)限(xian)於(yu)特(te)殊(shu)的(de)用(yong)途(tu)。如(ru),石(shi)墨(mo)化(hua)碳(tan)黑(hei)正(zheng)逐(zhu)漸(jian)成(cheng)為(wei)反(fan)向(xiang)色(se)譜(pu)柱(zhu)填(tian)料(liao)。這(zhe)種(zhong)填(tian)料(liao)的(de)分(fen)離(li)不(bu)同(tong)於(yu)矽(gui)膠(jiao)基(ji)質(zhi)烷(wan)基(ji)鍵(jian)合(he)相(xiang),石(shi)墨(mo)化(hua)碳(tan)的(de)表(biao)麵(mian)即(ji)是(shi)保(bao)留(liu)的(de)基(ji)礎(chu),不(bu)再(zai)需(xu)其(qi)它(ta)的(de)表(biao)麵(mian)改(gai)性(xing)。該(gai)柱(zhu)填(tian)料(liao)一(yi)般(ban)比(bi)烷(wan)基(ji)鍵(jian)合(he)相(xiang)矽(gui)膠(jiao)或(huo)多(duo)孔(kong)聚(ju)合(he)物(wu)填(tian)料(liao)的(de)保(bao)留(liu)能(neng)力(li)更(geng)強(qiang)。石(shi)墨(mo)化(hua)碳(tan)可(ke)用(yong)於(yu)分(fen)離(li)某(mou)些(xie)幾(ji)何(he)異(yi)構(gou)體(ti),由(you)於(yu)在(zai)HPLC流動相中不會被溶解,這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可以用於HPLC。氧化鋁微粒剛性強,可製成穩定的色譜柱柱床,其優點是可以在PH高達12的de流liu動dong相xiang中zhong使shi用yong。但dan由you於yu氧yang化hua鋁lv與yu堿jian性xing化hua合he物wu的de作zuo用yong也ye很hen強qiang,應ying用yong範fan圍wei受shou到dao一yi定ding限xian製zhi,所suo以yi未wei能neng廣guang泛fan應ying用yong。新xin型xing色se譜pu氧yang化hua鋯gao基ji質zhi填tian料liao也ye可ke用yong於yuHPLC。商品化的隻有聚合物塗層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應用PH1-14,溫度可達100℃。由於氧化鋯填料是最近幾年才開始研究,加之麵臨的實驗難度,其重要用途與優勢尚在進行之中。
怎樣選擇填料粒度 目前,商品化的色譜填料粒度從1um到超過30um均有銷售,而目前分析分離主要用3和5um填料進行。填料的粒度主要影響填充柱的兩個參數,即柱效和背壓。粒度越小,柱壓越大,柱壓的增加限製了粒度小於3um的(de)填(tian)料(liao)應(ying)用(yong)。在(zai)相(xiang)同(tong)選(xuan)擇(ze)性(xing)條(tiao)件(jian)下(xia),提(ti)高(gao)柱(zhu)效(xiao)可(ke)提(ti)高(gao)分(fen)離(li)度(du),但(dan)不(bu)是(shi)唯(wei)一(yi)的(de)因(yin)素(su)。如(ru)果(guo)固(gu)定(ding)相(xiang)選(xuan)擇(ze)是(shi)正(zheng)確(que),但(dan)是(shi)分(fen)離(li)度(du)不(bu)夠(gou),那(na)麼(me)選(xuan)用(yong)更(geng)小(xiao)的(de)粒(li)度(du)的(de)填(tian)料(liao)是(shi)很(hen)有(you)用(yong)的(de)。3um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而,3um的色譜柱的背壓卻是5um的2bei。yucitongshi,zhuxiaotigaoyiweizhezaixiangtongtiaojianxiakeyixuanyonggengduandesepuzhu,jixiangtongdetabanshuhuofenlinengli,danshizhuchanggengduan,yisuoduanfenxishijian。lingwai,keyicaiyongdizhanduderongjizuoliudongxianghuozengjiasepuzhudeshiyongwendu,biruyongyijingdaitijiachun,yijiangdisepuzhudeyali。
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