要懷著一顆為了出具真實
、準確，可信數據而敬畏的心去申請能力驗證。

實驗要求科學嚴謹,實驗要預先充分練習和實踐。能力驗證是對實驗室綜合實驗水平（人員，設備
，環境等多因素）的評價。

首(shou)先(xian)要(yao)選(xuan)好(hao)實(shi)驗(yan)項(xiang)目(mu)
，找(zhao)到(dao)與(yu)之(zhi)配(pei)套(tao)的(de)方(fang)法(fa)
，進(jin)行(xing)充(chong)分(fen)的(de)方(fang)法(fa)驗(yan)證(zheng)，從(cong)檢(jian)測(ce)員(yuan)能(neng)力(li)，儀(yi)器(qi)設(she)備(bei)性(xing)能(neng)，校(xiao)檢(jian)結(jie)果(guo)是(shi)否(fou)能(neng)滿(man)足(zu)實(shi)驗(yan)需(xu)要(yao)，實(shi)驗(yan)檢(jian)測(ce)多(duo)次(ci)實(shi)驗(yan)

，檢(jian)測(ce)環(huan)境(jing)是(shi)否(fou)進(jin)行(xing)了(le)充(chong)分(fen)的(de)考(kao)慮(lv)
，實(shi)驗(yan)確(que)認(ren)好(hao)實(shi)驗(yan)項(xiang)目(mu)
，認(ren)真(zhen)學(xue)習(xi)標(biao)準(zhun)，理(li)解(jie)標(biao)準(zhun)，並(bing)做(zuo)到(dao)標(biao)準(zhun)所(suo)規(gui)範(fan)的(de)步(bu)驟(zhou)，並(bing)對(dui)自(zi)己(ji)實(shi)驗(yan)有(you)了(le)一(yi)定(ding)的(de)信(xin)心(xin)後(hou)再(zai)去(qu)申(shen)請(qing)能(neng)力(li)驗(yan)證(zheng)為(wei)宜(yi)。

舉例：某(mou)實(shi)驗(yan)室(shi)未(wei)經(jing)過(guo)充(chong)分(fen)實(shi)驗(yan)方(fang)法(fa)確(que)認(ren)
，實(shi)驗(yan)平(ping)時(shi)做(zuo)的(de)也(ye)少(shao)，直(zhi)接(jie)申(shen)請(qing)了(le)能(neng)力(li)驗(yan)證(zheng)。實(shi)驗(yan)過(guo)程(cheng)生(sheng)疏(shu)
，照(zhao)方(fang)抓(zhua)藥(yao)
，手(shou)忙(mang)腳(jiao)亂(luan)，造(zao)成(cheng)稀(xi)釋(shi)梯(ti)度(du)不(bu)夠(gou)

，平(ping)板(ban)幹(gan)燥(zao)
，菌(jun)落(luo)蔓(man)延(yan)
，無(wu)法(fa)出(chu)具(ju)具(ju)體(ti)數(shu)值(zhi)
，實(shi)驗(yan)失(shi)敗(bai)。

二、實驗室收到盲樣菌株標本後，首先應做的事情。

1、檢查標本的性狀和確認包裝情況
，然後按照要求去能力驗證網站提交收到樣品情況。

2

、仔細閱讀參指導書，包括標本如何保存的信息，進行實驗室內部工作分配，明確工作任務和要求。

3、實驗前應嚴格按照作業指導書的要求製訂檢驗流程，認真做好準備工作
，包括實驗中需要使用的器皿，須提前做好清潔滅菌。

三、能力驗證樣品處理。

1、定量項目
，西林瓶內樣品不可分割，應全部用於檢測。一般參考書指導的是加40mL稀釋液製成40mL樣品。

2
、定量項目樣品稀釋。指導書標明了稀釋範圍的
，在稀釋範圍左右各加1個稀釋度進行；書上沒有稀釋範圍的，多做稀釋倍數，選擇合適的稀釋倍數計數（一般可稀釋至10^-8）。

3
、dingliangxiangmu
，chuleyaoduozuoxishibeishuwai，tongshitongyixishiduyaoduodaojimin，congyuanlishanglaijiang，jianceguochengshuyusuijichouyangjianzha，pingbanyueduo，shujuyuejiejinzhenzhi。kaolvxingjiabi，youbukenengyizhifengkuangyigexishiduhenduopingban，suoyinengliyanzhengshihouduodaojimin，qiuhaojieguo。

4、定性項目有一些重要步驟。

a、增zeng菌jun及ji分fen離li步bu驟zhou尤you其qi重zhong要yao。選xuan擇ze合he適shi的de增zeng菌jun液ye和he分fen離li用yong培pei養yang基ji對dui目mu標biao菌jun的de檢jian出chu非fei常chang關guan鍵jian，選xuan擇ze兩liang種zhong以yi上shang的de增zeng菌jun液ye和he分fen離li用yong培pei養yang基ji對dui菌jun株zhu作zuo直zhi接jie分fen離li和he增zeng菌jun後hou分fen離li。

b、劃線分離十分重要，要把增菌液中的目標菌盡量多的表達出來


，要分出單個菌落並盡可能多挑取可疑菌落

，確保分離到目標菌。

c、生化試驗和血清學試驗以營養瓊脂平板上的純培養細菌為好。

四
、實驗過程一定要做陰陽對照，全程空白對照。

再厲害的高手也有失手和看走眼的時候，所以陰陽對照就是一麵鏡子。對於一些熒光染色後進行判讀的實驗顯得尤為重要。

這裏掃盲一個誤區，定量計數測菌數時
，我們會認為空白就是直接取1mLwujunshuiranhoujiarudaopingbanli
，ranhouhunjundaomin，zheshicuowude。yinweizheyangzuodehua
，zhinengmonizhengmingxishihoudaopingbanzheyibuyoumeiyouwuran。erwufazhengmingcongyangpinchengqu-樣品稀釋時候的汙染質控情況。所以要做全程空白對照。

quanchengkongbaidehanyijiushibawujunyedangchengyangpin，ranhouzouyibianshiyanguocheng。ruguoyangezhemezuodehua，youhuizouxianglingyigejiduan，suoyiquanchengkongbaizhicongquyangkaishizhixishi10^-1做了簡化，而不做後續稀釋空白樣的混菌實驗。

在有些其他實驗時候
，會有樣品空白以及稀釋液空白，比如大氣環境NOx和SO2的檢測，有興趣的可以去看看，對於全程空白的意義理解有更好的幫助。

五

、培養基方麵需要注意的地方。

1
、培養基配製充分混勻後再滅菌。

正確做法是用一部分水攪拌均勻後
，再加入剩餘水量，混勻後滅菌或分裝。

2、混菌法倒皿要充分混勻。

培養基倒完要左5圈右5圈（混勻速度一定要慢，目的是――避免培養基波動到二皿接觸的縫隙部分造成後續汙染）
，找較水平位置冷卻凝固。

3、培養基要不要覆蓋問題。

覆蓋的目的是為了阻止活菌在培養基表層通過鞭毛移動，造成片狀生長
，無法計數這一不利現象的發生。這裏可以發揮主觀能動性-對於不運動的菌，可以不覆蓋

，對於運動的菌覆蓋。

總結一下：

a長期檢測同一種樣品
，不覆蓋並無蔓延現象，不覆蓋；長期檢測蔓延選擇了覆蓋，一直覆蓋。

b未知樣品
，進行覆蓋和不覆蓋的比對實驗

，然後決定以後同樣的樣品是否需要覆蓋。養成經驗。

c能力驗證實驗，覆蓋和不覆蓋的都做

，不要吝惜那麼一點點培養基或耗材，畢竟能力驗證實驗做的漂亮才是實驗室（是室而不是人！）能力的綜合體現。

4、培養過程防止平皿幹燥。

培養過程中培養基可以倒的適當厚一些
，比如25mL。培養箱底部接一個不鏽鋼盆，裝上足量無菌水（沒有就去買幾瓶哇哈哈怡寶什麼的水倒裏麵）。

5、培養完成要保留實驗平皿和其他相關材料。

作為能力驗證，原始記錄及實驗報告還沒出具完成，各種材料還是保留至數據出具後較好
，便於出現問題現查原因，馬上補救。

題外話：很hen多duo檢jian測ce員yuan等deng結jie果guo出chu了le問wen題ti然ran後hou到dao網wang絡luo上shang來lai求qiu救jiu

，結jie果guo一yi問wen平ping皿min已yi經jing洗xi掉diao了le，那na就jiu不bu知zhi道dao是shi什shen麼me狀zhuang況kuang了le。有you時shi候hou你ni問wen她ta她ta還hai會hui振zhen振zhen有you詞ci的de講jiang：10^-1，10^-2都蔓延了，不洗掉幹嘛，10^-5
，10^-6沒長菌，不洗掉幹嘛？我當時真的無語，也不想多說話就沒繼續講了。現在我回答一下這個問題：我要你一套完整梯度濃度的平皿，可以看出你10倍稀釋梯度是不是穩定，還有蔓延是個什麼狀況，到底有多少
，是一片還是局部還是很小一部分，然後根據整體數據估算結果（當然實驗做成這樣也基本算失敗了，因為實驗沒有做到你可控的範圍），是補救的一種（並不可取，屬於垂死掙紮）。定量實驗時
，當天做完的稀釋樣品也要放冰箱裏
，雖然實驗要求不能複檢或重複檢測，但作為微生物專業你是知道菌放在2-8℃下並不會長多少，如果第二天一看數據有蔓延或疑問，馬上再做一次，這樣也應該在誤差範圍內出數。

6、 實驗培養過程勤觀察。

微wei生sheng物wu培pei養yang過guo程cheng一yi般ban需xu要yao幾ji小xiao時shi到dao幾ji十shi小xiao時shi，要yao利li用yong這zhe段duan時shi間jian觀guan察cha培pei養yang箱xiang及ji菌jun生sheng長chang情qing況kuang，比bi如ru溫wen度du是shi否fou穩wen定ding
，培pei養yang室shi內nei濕shi度du如ru何he等deng等deng，多duo思si多duo看kan，準zhun備bei預yu案an。方fang有you可ke能neng得de到dao與yu盲mang樣yang一yi致zhi的de實shi驗yan結jie果guo。

原始記錄應有條理
、思路清晰,完整準確地記錄菌株鑒定檢驗的全過程,原始記錄要包含時間、試驗現象
、試驗結果三個要素，方便試驗出現問題的查找。