但是，這種實驗需要有能保證絕對安全、配置合理的實驗室和非常規範的操作為前提。

今天此文將從臨床基因擴增檢驗實驗室的平麵布局，空調通風係統設計

、氣流控製和汙染的防製幾個方麵對實驗室設計中的主要特點進行了闡述。

PCR實驗室原則上分為四個單獨的工作區域：試劑貯存和準備區、標本製備區、擴增反應混合物配製和擴增區
、擴增產物分析區。為避免交叉汙染，進入各個工作區域必須嚴格遵循單一方向進行
，即隻能從試劑貯存和準備區→標本製備區→擴增反應混合物配製和擴增區→擴增產物分析區。

各實驗區之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。

PCR實驗室並沒有嚴格的淨化要求，但是為避免各個實驗區域間交叉汙染的可能性
，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時
，要嚴格控製送、排風的比例以保證各實驗區的壓力要求。

1.試劑貯存和準備區

該實驗區主要進行的操作為貯存試劑的製備
、試(shi)劑(ji)的(de)分(fen)裝(zhuang)和(he)主(zhu)反(fan)應(ying)混(hun)合(he)液(ye)的(de)製(zhi)備(bei)。試(shi)劑(ji)和(he)用(yong)於(yu)標(biao)本(ben)製(zhi)作(zuo)的(de)材(cai)料(liao)應(ying)直(zhi)接(jie)運(yun)送(song)至(zhi)該(gai)區(qu)，不(bu)得(de)經(jing)過(guo)其(qi)他(ta)區(qu)域(yu)。試(shi)劑(ji)原(yuan)材(cai)料(liao)必(bi)須(xu)貯(zhu)存(cun)在(zai)本(ben)區(qu)內(nei)，並(bing)在(zai)本(ben)區(qu)內(nei)製(zhi)備(bei)成(cheng)所(suo)需(xu)的(de)貯(zhu)存(cun)試(shi)劑(ji)。

對氣流壓力的控製
，本區並沒有嚴格的要求。

2.標本製備區

該區域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。

本區的壓力梯度要求為：相(xiang)對(dui)於(yu)鄰(lin)近(jin)區(qu)域(yu)為(wei)正(zheng)壓(ya)，以(yi)避(bi)免(mian)從(cong)鄰(lin)近(jin)區(qu)進(jin)入(ru)本(ben)區(qu)的(de)氣(qi)溶(rong)膠(jiao)汙(wu)染(ran)。另(ling)外(wai)
，由(you)於(yu)在(zai)操(cao)作(zuo)中(zhong)可(ke)能(neng)會(hui)發(fa)生(sheng)氣(qi)溶(rong)膠(jiao)所(suo)致(zhi)的(de)汙(wu)染(ran)，所(suo)以(yi)應(ying)避(bi)免(mian)在(zai)本(ben)區(qu)內(nei)不(bu)必(bi)要(yao)的(de)走(zou)動(dong)。

3.擴增反應混合物配製和擴增區

該區域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外，已製備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本製備區) 的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和製備區) 製備成反應混合液等也可在本區內進行。在巢式PCR測定中
，通常在第一輪擴增後必須打開反應管，因此巢式擴增有較高的汙染危險性，第二次加樣必須在本區內進行。

本區的壓力梯度要求為：相(xiang)對(dui)於(yu)鄰(lin)近(jin)區(qu)域(yu)為(wei)負(fu)壓(ya)
，以(yi)避(bi)免(mian)氣(qi)溶(rong)膠(jiao)從(cong)本(ben)區(qu)漏(lou)出(chu)。為(wei)避(bi)免(mian)氣(qi)溶(rong)膠(jiao)所(suo)致(zhi)的(de)汙(wu)染(ran)
，應(ying)盡(jin)量(liang)減(jian)少(shao)在(zai)本(ben)區(qu)內(nei)的(de)不(bu)必(bi)要(yao)的(de)走(zou)動(dong)。個(ge)別(bie)操(cao)作(zuo)如(ru)加(jia)樣(yang)等(deng)應(ying)在(zai)超(chao)淨(jing)台(tai)內(nei)進(jin)行(xing)。

4.擴增產物分析區

該區域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測，此區域可不設。

本區是最主要的擴增產物汙染來源，因此對本區的壓力梯度的要求為：相對於鄰近區域為負壓，以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。

PCR實驗室設計的核心問題是如何避免汙染。在實際工作中，常見的有以下幾種汙染類型：擴增產物的汙染；天然基因組DNA的汙染；試shi劑ji的de汙wu染ran以yi及ji標biao本ben間jian的de汙wu染ran。由you於yu一yi旦dan發fa生sheng汙wu染ran，實shi驗yan就jiu必bi須xu停ting止zhi
，直zhi到dao找zhao到dao汙wu染ran源yuan為wei止zhi，而er且qie實shi驗yan結jie果guo必bi須xu作zuo廢fei，需xu重zhong新xin進jin行xing實shi驗yan。所suo以yi發fa生sheng汙wu染ran後hou再zai圍wei繞rao實shi驗yan室shi來lai尋xun找zhao汙wu染ran源yuan不bu但dan耗hao時shi而er且qie繁fan瑣suo，浪lang費fei人ren力li物wu力li。因yin此ci要yao避bi免mian汙wu染ran
，首shou先xian應ying是shi預yu防fang，而er不bu是shi排pai除chu。

1.工作區域的嚴格劃分

（1）各個實驗區域設置合理。

（2）各個實驗區域要有明顯的標記（如醒目的門牌或不同的地麵顏色等），以避免各個不同實驗區域設備物品

、試劑等發生混淆。

2.合理的係統設置

（1）合理的空調通風係統設置，盡量采用全送全排的空調係統。

（2）嚴格的氣流壓力控製，保證不同的實驗區內不同的壓力要求。

3.規範的操作

（1）臨床基因擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓
，經培訓合格後才能從事臨床基因擴增檢驗的工作。

（2）在實驗操作過程中，操作者必須戴手套，並經常更換。此外，操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止汙染的措施。

（3）清潔工作及時、正(zheng)確(que)。實(shi)驗(yan)工(gong)作(zuo)結(jie)束(shu)後(hou)
，必(bi)須(xu)立(li)即(ji)對(dui)本(ben)區(qu)進(jin)行(xing)清(qing)潔(jie)。除(chu)常(chang)規(gui)的(de)消(xiao)毒(du)液(ye)體(ti)對(dui)表(biao)麵(mian)進(jin)行(xing)擦(ca)拭(shi)消(xiao)毒(du)或(huo)紫(zi)外(wai)線(xian)燈(deng)的(de)照(zhao)射(she)消(xiao)毒(du)外(wai)
，對(dui)一(yi)些(xie)實(shi)驗(yan)設(she)備(bei)還(hai)應(ying)進(jin)行(xing)高(gao)壓(ya)消(xiao)毒(du)處(chu)理(li)。

4.嚴格的管理

（1）嚴格控製進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室，有條件的情況下要設置獨立的通道和進出整個實驗區的門。

（2）在各個實驗區域使用帶有明顯區別標誌的工作服（如不同顏色），當工作人員離開時不得將本區的工作服帶至其它區域。

（3）盡量減少在實驗區內不必要的走動以減少交叉汙染的可能性。

（4）擴kuo增zeng產chan物wu分fen析xi區qu是shi最zui主zhu要yao的de擴kuo增zeng產chan物wu汙wu染ran來lai源yuan
，廢fei液ye不bu能neng在zai實shi驗yan室shi中zhong傾qing倒dao，必bi須xu經jing消xiao毒du液ye浸jin泡pao消xiao毒du後hou在zai遠yuan離li實shi驗yan室shi的de地di方fang棄qi掉diao，用yong過guo的de吸xi頭tou等deng一yi次ci性xing材cai料liao也ye應ying經jing消xiao毒du液ye浸jin泡pao消xiao毒du後hou統tong一yi處chu理li，如ru焚fen燒shao等deng。

（5）擴增產物分析區可能會用到某些可致基因突變和有毒物質
，應特別注意實驗人員的安全防護。

5.完備的實驗室配套設施

完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件，應根據各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備和儀器，如超淨工作台、離心機
、加樣器等。

《實驗室生物安全通用要求》國家標準GB19489-2008

《臨床基因擴增檢驗實驗室工作規範》衛醫發[2002]8號文

《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》衛醫發[2002]10號文

《臨床基因擴增檢驗實驗室設計標準》衛醫發[2002]10號文附件

《基因檢驗實驗室技術要求》國家質監檢驗總局SN/T1193-2003

《潔淨室及相關受控環境-生物汙染控製》國際標準ISO14698

《潔淨廠房設計規範》國家標準GB500732013

《潔淨室施工及驗收規範》GB50591-2010

《室內空氣質量標準》國家標準GB/T18832002

《生物安全實驗室建築技術規範》國家標準GB50346-2011《病原微生物實驗室生物安全管理條例》衛生部(2004-11-12)