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液相色譜對於多數人來說都是很好上手的儀器了，但是就算是用過幾年、經驗豐富的分析員都會習慣於一些錯誤的操作（師傅教錯了嗎圖片），經常導致一些儀器故障。
fangbiankuaijiedefenxiguochengguranzhongyao，danshiweileduozuoyangpinerhulveleyixiebibukeshaodebuzhou，wangwangdebuchangshi，naxiecaozuobunengzuo？naxielanerbunengtou？naxiexiaogailvdeguzhangshifumeijiaozenmeban？yexiangshiyongguochengzhongyounasidaguanjianyinsuyaozhuyi？benwenyiyigaosunio！
流動相不過濾
因為塵埃或其它任何雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相最好在玻璃容器內蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應經常清洗或更換。
使用後沒有及時清洗泵
流(liu)動(dong)相(xiang)不(bu)應(ying)含(han)有(you)任(ren)何(he)腐(fu)蝕(shi)性(xing)物(wu)質(zhi)，含(han)有(you)緩(huan)衝(chong)液(ye)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)不(bu)應(ying)保(bao)留(liu)在(zai)泵(beng)內(nei)，尤(you)其(qi)是(shi)在(zai)停(ting)泵(beng)過(guo)夜(ye)或(huo)更(geng)長(chang)時(shi)間(jian)的(de)情(qing)況(kuang)下(xia)。如(ru)果(guo)將(jiang)含(han)緩(huan)衝(chong)液(ye)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)留(liu)在(zai)泵(beng)內(nei)，由(you)於(yu)蒸(zheng)發(fa)或(huo)泄(xie)漏(lou)，甚(shen)至(zhi)隻(zhi)是(shi)由(you)於(yu)溶(rong)液(ye)的(de)靜(jing)置(zhi)，就(jiu)可(ke)能(neng)析(xi)出(chu)鹽(yan)的(de)微(wei)細(xi)晶(jing)體(ti)，這(zhe)些(xie)晶(jing)體(ti)將(jiang)和(he)上(shang)述(shu)固(gu)體(ti)微(wei)粒(li)一(yi)樣(yang)損(sun)壞(huai)密(mi)封(feng)環(huan)和(he)柱(zhu)塞(sai)等(deng)。因(yin)此(ci)，必(bi)須(xu)泵(beng)入(ru)純(chun)水(shui)將(jiang)泵(beng)充(chong)分(fen)清(qing)洗(xi)後(hou)，再(zai)換(huan)成(cheng)適(shi)合(he)於(yu)色(se)譜(pu)柱(zhu)保(bao)存(cun)和(he)有(you)利(li)於(yu)泵(beng)維(wei)護(hu)的(de)溶(rong)劑(ji)（對於反相鍵合矽膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。
流動相走空
泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完，否則空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封環，最終產生漏液。
沒有流動相流出，又無壓力指示怎麼辦？
可能是泵內有大量氣體，這時可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運轉，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環磨損，需更換。
壓力和流量不穩？
原因可能是氣泡，需要排除；huozheshidanxiangfaneiyouyiwu，kexiexiadanxiangfa，jinrubingtongneichaoshengqingxi。youshikenengshishalvbangneiyouqipao，huobeiyandeweixijinglihuozishengdeweishengwubufendusai，zheshi，kexiexiashalvbangjinruliudongxiangneichaoshengchuqipao，huojiangshalvbangjinruxisuan（如4mol/L硝酸）內迅速除去微生物，或將鹽溶解，再立即清洗。
壓力為啥過高或過低？
可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應逐段進行。
在進行梯度洗脫時，由於多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視。
PS：在zai液ye相xiang色se譜pu中zhong對dui組zu分fen複fu雜za的de樣yang品pin采cai用yong梯ti度du洗xi脫tuo的de方fang法fa。在zai同tong一yi個ge分fen析xi周zhou期qi中zhong，按an一yi定ding程cheng序xu不bu斷duan改gai變bian流liu動dong相xiang的de濃nong度du配pei比bi，稱cheng為wei梯ti度du洗xi脫tuo。從cong而er可ke以yi使shi一yi個ge複fu雜za樣yang品pin中zhong的de性xing質zhi差cha異yi較jiao大da的de組zu分fen能neng按an各ge自zi適shi宜yi的de容rong量liang因yin子zik達到良好的分離目的。
梯度洗脫的優點：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。
梯度洗脫的流動相選擇不當
要yao注zhu意yi溶rong劑ji的de互hu溶rong性xing，不bu相xiang混hun溶rong的de溶rong劑ji不bu能neng用yong作zuo梯ti度du洗xi脫tuo的de流liu動dong相xiang。有you些xie溶rong劑ji在zai一yi定ding比bi例li內nei混hun溶rong，超chao出chu範fan圍wei後hou就jiu不bu互hu溶rong，使shi用yong時shi更geng要yao引yin起qi注zhu意yi。當dang有you機ji溶rong劑ji和he緩huan衝chong液ye混hun合he時shi，還hai可ke能neng析xi出chu鹽yan的de晶jing體ti，尤you其qi使shi用yong磷lin酸suan鹽yan時shi需xu特te別bie小xiao心xin。
忽略的空白梯度洗脫
梯ti度du洗xi脫tuo所suo用yong的de溶rong劑ji純chun度du要yao求qiu更geng高gao，以yi保bao證zheng良liang好hao的de重zhong現xian性xing。進jin行xing樣yang品pin分fen析xi前qian必bi須xu進jin行xing空kong白bai梯ti度du洗xi脫tuo，以yi辨bian認ren溶rong劑ji雜za質zhi峰feng，因yin為wei弱ruo溶rong劑ji中zhong的de雜za質zhi富fu集ji在zai色se譜pu柱zhu頭tou後hou會hui被bei強qiang溶rong劑ji洗xi脫tuo下xia來lai。用yong於yu梯ti度du洗xi脫tuo的de溶rong劑ji需xu徹che底di脫tuo氣qi，以yi防fang止zhi混hun合he時shi產chan生sheng氣qi泡pao。
忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化
hunherongjidezhanduchangsuizuchengerbianhua，yinerzaitiduxituoshichangchuxianyalidebianhua。lirujiachunheshuizhandudoujiaoxiao，dangerzheyixiangjinbilihunheshizhanduzengdahenduo，cishidezhuyadayueshijiachunhuoshuiweiliudongxiangshideliangbei。yinciyaozhuyifangzhitiduxituoguochengzhongyalichaoguoshuyebenghuosepuzhunengchengshoudezuidayali。
六通閥的正確使用和維護
①樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進樣閥的磨損。
②轉動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力；再轉到進樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。
③為防止緩衝鹽和樣品殘留在進樣閥中，每次分析結束後應衝洗進樣閥。通常可用水衝洗，或先用能溶解樣品的溶劑衝洗，再用水衝洗。
色譜柱的使用和維護
色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。
調節流速太快
避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會衝動柱內填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩（如前所述）。
反衝色譜柱
一般說來色譜柱不能反衝，隻有生產者指明該柱可以反衝時，才可以反衝除去留在柱頭的雜質。否則反衝會迅速降低柱效。
預柱和保護柱
選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以yi避bi免mian固gu定ding相xiang被bei破po壞huai。有you時shi可ke以yi在zai進jin樣yang器qi前qian麵mian連lian接jie一yi預yu柱zhu，分fen析xi柱zhu是shi鍵jian合he矽gui膠jiao時shi，預yu柱zhu為wei矽gui膠jiao，可ke使shi流liu動dong相xiang在zai進jin入ru分fen析xi柱zhu之zhi前qian預yu先xian被bei矽gui膠jiao“飽和”，避免分析柱中的矽膠基質被溶解。
避(bi)免(mian)將(jiang)基(ji)質(zhi)複(fu)雜(za)的(de)樣(yang)品(pin)尤(you)其(qi)是(shi)生(sheng)物(wu)樣(yang)品(pin)直(zhi)接(jie)注(zhu)入(ru)柱(zhu)內(nei)，需(xu)要(yao)對(dui)樣(yang)品(pin)進(jin)行(xing)預(yu)處(chu)理(li)或(huo)者(zhe)在(zai)進(jin)樣(yang)器(qi)和(he)色(se)譜(pu)柱(zhu)之(zhi)間(jian)連(lian)接(jie)一(yi)保(bao)護(hu)柱(zhu)。保(bao)護(hu)柱(zhu)一(yi)般(ban)是(shi)填(tian)有(you)相(xiang)似(si)固(gu)定(ding)相(xiang)的(de)短(duan)柱(zhu)。保(bao)護(hu)柱(zhu)可(ke)以(yi)而(er)且(qie)應(ying)該(gai)經(jing)常(chang)更(geng)換(huan)。
小概率故障如何排除？
【1】泵壓跳動，跳動範圍10bar左右。
解決方法：
1、原先小白頭有點髒，更換後尚未解決；
2、將主動閥上的閥芯取出後，發現有類似氣泡存在，浸入甲醇-水溶液超聲5min，以試著去除氣泡，重新將其安裝後再觀察，仍未解決；
3、更換新的閥芯，將其安裝後，不再有跳動，觀察一段時間後比較平穩，成功解決。
【2】發生故障：
①plug homing over pressure
② 灌注及設流速時均無壓力也不見液體流出
③檢測器光閘不能複位④進完大濃度樣品後，進空白相應位置也出峰。
可能原因：
①在線過濾器堵了
②泵頭下單向閥堵了
③有可能是檢測池髒了，也有可能是光路有點堵，再不行可能是燈壽命到了
④小抹布髒了，需要換
解決方法：
①在線過濾器卸下來，置燒杯，加純化水煮沸5-10分鍾後甲醇超一下一般就可以了，如果還堵的話就拿稀硝酸泡，還不行的話就換新的了，這本身是個消耗品
②把泵頭下單向閥卸下來，兩個都有可能堵，剛卸下來時豎著在耳邊搖一搖是聽不到聲音的。簡單的拿洗耳球把單向閥吹吹就行了（注意方向），吹了沒反應可以拿溶劑超聲，但不可水煮，一般超至在耳邊搖能聽見聲音就不影響實驗
③先用溶劑把檢測池衝衝，用啥試具體樣品而定；若衝了還不行，把檢測池卸下，看燈能量，若能量還可以（有個幾千），可ke能neng得de清qing洗xi光guang路lu了le。第di一yi次ci清qing洗xi的de話hua建jian議yi還hai是shi叫jiao工gong程cheng師shi來lai，因yin為wei待dai清qing理li的de部bu件jian在zai檢jian測ce器qi的de最zui下xia方fang，有you一yi個ge黑hei色se片pian片pian，中zhong間jian有you一yi條tiao縫feng，而er且qie那na一yi塊kuai的de螺luo絲si都dou是shi八ba角jiao的de，卸xie起qi來lai很hen麻ma煩fan。
④把5個樣品盤都拿出來，可以看見裏麵有一個黑色突起（看不清用手電筒），平時進樣針就是從那個地方吸樣的。手伸進去就可以卸下來，裏麵有一個小白圈圈（用多了自然就黑了），換一個新的就行了，買儀器時一般配有10個。
液相色譜在使用過程中主要有四大關鍵因素需要注意：
液相色譜儀本身
對dui於yu儀yi器qi本ben身shen一yi般ban不bu會hui有you問wen題ti，特te別bie是shi剛gang買mai回hui來lai的de新xin儀yi器qi。對dui於yu儀yi器qi本ben身shen最zui重zhong要yao的de就jiu是shi儀yi器qi的de校xiao驗yan，剛gang買mai回hui來lai的de儀yi器qi一yi般ban都dou是shi由you賣mai家jia先xian對dui儀yi器qi做zuo係xi統tong的de確que認ren工gong作zuo（包括IQ、PQ、OQ），querenshunlitongguohou，zaiqingguojiahuoshengjiyiqijiandingjudelaixiaoyan，jiandinghegehoujiukeyifangxinshiyongle，chucizhiwai，yixiezuodehaodegongsimeibannianhuiduiyiqijinxingyicideneibuxiaoyan，mudejiushiweilebaozhengyiqidezhengchangkeyunxingzhuangtai。
色譜條件
色譜條件一般包括流動相、色譜柱、檢測波長、流速及進樣量。流動相就涉及到配製流動相所用到的水和試劑試液，水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大於18.2兆歐級別，試劑試液要求用色譜級別的，原因為防止水和試劑試液中的雜質對色譜結果的幹擾。
sepuzhuhuiyinbutongdepinzhongeryoubutongdeyaoqiu，danmeigensepuzhudouyoutadeqingxiyaoqiu，zhegezaisepuzhushuomingshushangdoukeyizhaodao，yidingyaogenjushangmiandeyaoqiujinxing，fouzehuizaochengsepuzhuxiaoxiajianghesepuzhudeshiyongshoumingsuoduan，jiancebochangyehuiyinpinzhongdebutongyoubutongdeyaoqiu。zhelixuyaozhichudeshiyaozhuyiguanchajianceqidaodengnengliangdebianhua，birujixianbodongda，huoxingchengfendexiangyingzhituranbianxiaodeng，douyoukenengshidaodengdenengliangbuzusuoyinqide，daodengyibanjianyishiyong800小時，但實際上使用時間不止，可根據實際情況更換。
流速也因品種的不同而不同，一般為1.0ml/min，流速是不可隨意改動的，特別是作為QC人(ren)員(yuan)，但(dan)是(shi)作(zuo)為(wei)研(yan)發(fa)人(ren)員(yuan)，有(you)時(shi)為(wei)了(le)摸(mo)索(suo)條(tiao)件(jian)或(huo)進(jin)行(xing)方(fang)法(fa)耐(nai)用(yong)性(xing)驗(yan)證(zheng)，會(hui)對(dui)流(liu)速(su)進(jin)行(xing)改(gai)變(bian)以(yi)評(ping)價(jia)方(fang)法(fa)的(de)適(shi)用(yong)性(xing)。對(dui)於(yu)進(jin)樣(yang)量(liang)因(yin)不(bu)同(tong)的(de)品(pin)種(zhong)也(ye)有(you)不(bu)同(tong)規(gui)定(ding)，進(jin)樣(yang)量(liang)這(zhe)塊(kuai)現(xian)在(zai)都(dou)使(shi)用(yong)自(zi)動(dong)進(jin)樣(yang)，所(suo)以(yi)進(jin)樣(yang)精(jing)密(mi)度(du)都(dou)很(hen)好(hao)，不(bu)需(xu)強(qiang)調(tiao)什(shen)麼(me)。
操作人員
shouxian，zuoweiyexiangcaozuorenyuan，yidingyaorenzhenxuexiyexiangdeshuomingshu，zhangwoyexiangyingjianheruanjiandecaozuo，zhangworichangdeweihubaoyang，zhangwozuijichuguzhangdepaichuheweixiu。
一yi般ban液ye相xiang的de操cao作zuo規gui程cheng也ye是shi有you操cao作zuo人ren員yuan起qi草cao的de，所suo以yi隻zhi要yao嚴yan格ge按an照zhao操cao作zuo要yao求qiu進jin行xing操cao作zuo，一yi般ban不bu會hui出chu現xian問wen題ti。當dang然ran啫啫喱li需xu要yao特te別bie指zhi出chu的de是shi對dui於yu液ye相xiang的de日ri常chang維wei護hu保bao養yang很hen重zhong要yao，比bi如ru流liu動dong相xiang的de過guo濾lv、脫氣、泵密封墊的清洗、係統管路的清洗、溶劑過濾頭的清洗等，倘若不堅持，很容易導致色譜柱堵塞、係統壓力過大、色譜峰異常等不必要的故障，浪費時間。
其次，操作人員在配製液相分析用樣品溶液時，最好由同一個人單獨完成，以免不必要的偶然誤差。
液相安裝環境
液相色譜儀應盡量安裝於水平、遠離振動、電(dian)磁(ci)幹(gan)擾(rao)的(de)屋(wu)內(nei)的(de)台(tai)麵(mian)上(shang)，有(you)條(tiao)件(jian)的(de)話(hua)盡(jin)量(liang)將(jiang)液(ye)相(xiang)數(shu)據(ju)處(chu)理(li)係(xi)統(tong)分(fen)隔(ge)開(kai)，一(yi)個(ge)是(shi)防(fang)止(zhi)色(se)譜(pu)基(ji)線(xian)噪(zao)音(yin)偏(pian)大(da)，基(ji)線(xian)不(bu)穩(wen)等(deng)，一(yi)個(ge)是(shi)為(wei)減(jian)少(shao)對(dui)人(ren)體(ti)的(de)危(wei)害(hai)。
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