在HPLC分析中,在色譜柱正常,樣品濃度適宜,分析方法合適,色譜峰在出峰時間較短的條件下,峰型應對稱而尖銳。danzaishijicaozuozhong,ruguoduiyangpinbulejie,qianchulibuqiadanghuozhefenxifangfabuhelideng,huichuxianfengxingbuzhengchangdeqingkuang,qizhongshuangfengxianxiangjiushiyexiangsepuzhongchangjiandewentizhiyi。
色譜柱
如ru果guo在zai樣yang品pin分fen析xi時shi發fa現xian每mei個ge色se譜pu峰feng都dou有you雙shuang峰feng出chu現xian,尤you其qi在zai采cai用yong單dan一yi純chun物wu質zhi時shi,則ze可ke以yi確que定ding是shi色se譜pu柱zhu出chu現xian問wen題ti了le,一yi般ban是shi柱zhu頭tou受shou損sun或huo者zhe柱zhu頭tou固gu定ding相xiang汙wu染ran引yin起qi的de。
溶劑問題
目前HPLC分析多為反相色譜,流動相多為甲醇、乙腈、shui,jiagezhongtianjiajiyigaishanfenlixingneng。yangpinyibanyongyuliudongxiangxiangrongderongjirongjie,zuijiaderongjiefangfashiyongliudongxiangrongjie。zaishijifenxizhong,youshihouweileyangpinderongjiexinghuowendingxingjiaruleyidiandehuanchongye,huanchongyedesuanjianxingkenenghuidaozhiyangpinzhuanhua,congerchanshengshuangfengxianxiang。cishixuyaogenghuanhuanchongye,tiaozhengrongjipH值,或者用流動相配置樣品。
進樣量
當用溶劑極性強度大的試劑,如純甲醇、純乙腈,純乙醇,而分析體係中以水為主時,如果樣品進樣量大,如定量管為20ul,此時單一的純物質會出現雙峰,第二峰比第一峰小(每次都不太一樣),且拖尾,保留時間會提前(相對進樣量少而言),將jiang進jin樣yang量liang減jian少shao一yi半ban以yi上shang,峰feng型xing將jiang變bian為wei正zheng常chang。這zhe是shi樣yang品pin的de溶rong劑ji與yu流liu動dong相xiang極ji性xing相xiang差cha太tai大da,而er流liu動dong相xiang來lai不bu及ji將jiang其qi稀xi釋shi達da到dao平ping衡heng造zao成cheng的de,此ci情qing況kuang下xia需xu要yao減jian少shao進jin樣yang量liang。
樣品特性
youxieyangpinyouyuqihuaxuejiegoudetedian,cunzaihubianyigouxianxiang,erzhezhonghubianyigoutiwufafenkai,ershiyiyigedongtaipinghengcunzai。zaisepufenxishi,zaiyigetedingdetiaojianxia(如pH值、流動相極性、溫度等),一種物質將出現雙峰,雙峰靠的很近,基本齊高,不拖尾,條件稍一變化,尤其pH,雙峰現象將消失,如紅黴素等。
pH值
體係pH值對色譜雙峰的影響出現在各個環節上(前麵已經提到),尤其在緩衝液流動相平衡過程中其影響更為明顯。當連續進樣時,受pH的連續變化影響會經常遇到這種雙峰的情況。另外,在樣品分析時,流動相的pH盡量遠離被分析物的等電點,否則也容易引起雙峰的產生。在用離子對試劑分析時,選擇不好條件也會容易引起雙峰的產生。
HPLC分析中,在色譜柱正常,樣品靈敏度足夠,分析方法合適,色譜峰在出峰時間較短的條件下(不包括梯度),fengxingyingduichengerjianrui。danshi,zaiduiyangpinlejiechengdubugou,fangfabutuo,yangpinchulifangfajijinyangfangshibuhelixia,huichuxiangezhongyixiangbudaodewenti,erduisepufengnanyizuochuhelidejieshi,youqiduiyuxinshougengshiruci,suoyi,lejiemeizhongguifengchuxiandeyuanyinduiwomendefenxigongzuoshifeichangzhongyaode。
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