本文探討了口服酵母多糖對異育銀鯽體內免疫相關物質活性與人工感染“鰓出血”病原抗病力的影響

，試驗結果證明酵母多糖可提高供試異育銀鯽體內免疫相關物質的活性
，也可增強異育銀鯽抵抗“鰓出血”病原感染的能力
，對魚類的生長、體色等無不良影響。本試驗由江蘇省水產三新工程項目（編號：D2013-5-1）資助。

    shushinianlai，liyonggezhongkangshengsuleiyaowuhuozhehuaxueyaowufangkongyangzhiyuleidechuanranxingjibingshichangyongdecuoshi。danshi
，yaowuyinqidebingyuanjunnaiyaoxingheyangzhishuitizhongweishengtaihuanjingshihengdengwenti
，yijingzhujianchengweishuichanyangzhiyezhongriyiyanjundewenti。weilebimiancaiyongyaowufangzhiyangzhiyuleidechuanranxingjibingyinqidegezhongwenti，guonei、外wai的de研yan究jiu者zhe在zai利li用yong免mian疫yi刺ci激ji劑ji預yu防fang養yang殖zhi魚yu類lei傳chuan染ran性xing疾ji病bing方fang麵mian，也ye已yi經jing做zuo了le不bu少shao研yan究jiu工gong作zuo。目mu前qian
，在zai國guo外wai已yi經jing有you不bu少shao種zhong類lei的de免mian疫yi刺ci激ji劑ji正zheng在zai水shui產chan養yang殖zhi業ye中zhong應ying用yong。

    本研究利用安琪酵母股份有限公司生產的酵母多糖投喂異育銀鯽（Carassius auratus gibelio）後，檢測了供試異育銀鯽體內免疫相關物質活性的變化與抵抗人工感染“鰓出血”病原的能力。

    1材料與方法

    1、供試異育銀鯽與飼養條件試驗在鹽城裕達水產養殖場池塘中設置的網箱中進行。將來源相同
、活潑無外傷的體重為（113.5±5.5）g的異育銀鯽
，仔細挑選規格相近的放在同一個網箱中飼養。在同一個池塘中放置的30個條件相同網箱中選擇的7個網箱（分別作為Ⅰ-Ⅶ組），每個4.0m×4.0m×1.5m的網箱內飼養500尾異育銀鯽（圖1），在試驗期間溫度變化在17.5-25.5℃之間。每天上午8:00、中午13:00和下午16:30各投喂餌料1次，投餌量以使異育銀鯽達到飽足並有少量剩餘為準。所用飼料為惠裕飼料科技有限公司生產的異育銀鯽專用飼料。

    2、酵母多糖用於本研究的免疫增強劑是安琪酵母股份有限公司以醫藥專用酵母生產的福邦牌酵母多糖，該產品中含有的β-葡聚糖≥20%
，α-甘露聚糖肽≥20%
，肽類及蛋白質≥30%，幾丁質≥2.0%。

    3
、酵(jiao)母(mu)多(duo)糖(tang)投(tou)喂(wei)劑(ji)量(liang)與(yu)程(cheng)序(xu)根(gen)據(ju)各(ge)組(zu)試(shi)驗(yan)異(yi)育(yu)銀(yin)鯽(ji)的(de)總(zong)體(ti)重(zhong)
，在(zai)定(ding)量(liang)的(de)飼(si)料(liao)中(zhong)添(tian)加(jia)不(bu)同(tong)劑(ji)量(liang)的(de)酵(jiao)母(mu)多(duo)糖(tang)
，製(zhi)作(zuo)成(cheng)內(nei)含(han)不(bu)同(tong)水(shui)平(ping)的(de)酵(jiao)母(mu)多(duo)糖(tang)的(de)顆(ke)粒(li)飼(si)料(liao)後(hou)分(fen)別(bie)投(tou)喂(wei)Ⅰ-Ⅵ組試驗異育銀鯽，即自I號至Ⅴ號網箱的投喂免疫增強劑的劑量分別為100 mg/kg.B.W、200.0 mg/kg.B.W、300.0 mg/kg.B.W、400.0 mg/kg.B.W
、500.0 mg/kg.B.W和600.0 mg/kg.B.W。Ⅶ號網箱的試驗異育銀鯽則投喂未添加酵母多糖的飼料，作為對照組。每天投喂相當於魚體重2.5%的飼料
，連續投喂28d。

    4、采血於免疫接種並投喂添加酵母多糖飼料後的第29d，從各組中分別隨機撈取15尾供試異育銀鯽，對其斷頭取血。將每尾魚的血液分為2份，其中1份以肝素抗凝

，製備抗凝血
，供檢測白細胞吞噬活性
；將另一份血液首先在室溫下靜置1 h待其凝固


，置4℃冰箱保持4 h後，於4℃條件下以4000 r/min離心10 min，收集上層血清，保存在4℃冰箱中，備用。

    5

、在0.2 mL抗凝血中加入0.1 mL 福爾馬林滅活的金黃色葡萄球菌
，搖勻
，在25℃的恒溫水浴鍋中孵育45 min，每隔10 min搖動1次。用吸管吸取血細胞塗片

，每個樣品塗5張，用甲醇固定10 min，Giemsa染色液染1 h，水洗風幹後，鏡檢
，並依下式計算白細胞吞噬百分比（phagocytic percentage，PP）和吞噬指數（phagocytic index，PI）。

    吞噬百分比（PP） =（100個吞噬細胞中參與吞噬的細胞數/100）×100

    吞噬指數（PI ）= 細胞內總菌數/參與吞噬的細胞數

    6、溶菌酶活性的測定用0.067mol/L的磷酸緩衝液（PBS

，pH 6.4）將溶壁微球菌（Micrococcus lysoleikticus）配製成0.2 mg/mL 的菌懸液。每個樣品取3.0 mL菌懸液，吸取血清0.04 mL加入到菌懸液中
，混勻後
，立刻在540 nm下測定A。值。然後在28℃水浴中溫育30 min，取出後置於4℃冰浴終止反應，再測定A值。計算溶菌酶活性單位：U = （A。- A）/ A 。

    7、血清中穀丙轉氨酶活性的測定采用穀丙轉氨酶試劑盒（上海科欣生物技術研究所產品，批號：20140706）測定。

    8
、血清中總蛋白含量的測定采用血清總蛋白試劑盒（上海科欣生物技術研究所產品，批號：20140711）測定。

    9
、攻毒從試驗和對照組網箱中隨機各撈取50尾供試異育銀鯽，放養在盛水2.0M3的圓形塑料水族箱中充氣飼養。在每個水族箱中放置5尾體重300.0g左右的具有“鰓出血”典型症狀的病魚，與50尾供試魚同居飼養2d後將其撈出
，將供試魚繼續飼養觀察21d。對在此期間死亡的異育銀鯽進行解剖觀察，判斷是否由於感染“鰓出血”疾病而致死，統計各組的死亡率
，依下式計算相對免疫保護率（Relative percent survival，RPS）。

    免疫保護率（RPS）= [1-（免疫組死亡率/對照組死亡率）]×1002

    結果

    1、溶rong菌jun酶mei活huo性xing和he白bai細xi胞bao吞tun噬shi活huo性xing的de變bian化hua投tou喂wei添tian加jia酵jiao母mu多duo糖tang的de飼si料liao後hou，對dui照zhao和he試shi驗yan組zu異yi育yu銀yin鯽ji的de血xue清qing溶rong菌jun酶mei活huo性xing和he白bai細xi胞bao吞tun噬shi活huo性xing的de測ce定ding結jie果guo。投tou喂wei酵jiao母mu多duo糖tang的de試shi驗yan組zu異yi育yu銀yin鯽ji的de血xue清qing溶rong菌jun酶mei活huo性xing顯xian著zhu高gao於yu對dui照zhao組zu（t測驗，P<0.05）。白細胞吞噬活性的測定結果表明，試驗魚體白細胞的PP和PI均極顯著地高於對照組（t測驗，P<0.01）。

     2
、血清總蛋白和SGPT活性的變化供試異育銀鯽的血清中總蛋白含量和SGPThuoxingcedingjieguo。tianjiamianyiduotangdeshiyanzuyutidexueqingzhongzongdanbaihanliangyousuotigao
，danshi，duizhaoyushiyanzuyiyuyinjixueqingzhongdanbaihanliangbingweichuxianxianzhuxingchabie（t測驗，P>0.05）。對SGPT活性的測定結果表明，在飼料中添加酵母多糖可以降低魚體血清中SGPT的活性，但是，試驗與對照組異育銀鯽之間也並未出現顯著性差異（t測驗，P>0.05）。 

    3、攻毒後的存活率 對照及試驗魚在與典型病魚同居感染攻毒後
，各組的死亡情況可以看出
，經過投喂酵母多糖的異育銀鯽均獲得了一定的RPS，而er在zai飼si料liao中zhong添tian加jia酵jiao母mu多duo糖tang的de試shi驗yan組zu異yi育yu銀yin鯽ji死si亡wang率lv明ming顯xian的de低di於yu未wei添tian加jia酵jiao母mu多duo糖tang的de對dui照zhao組zu，與yu對dui照zhao組zu相xiang比bi


，當dang酵jiao母mu多duo糖tang酵jiao在zai飼si料liao中zhong的de添tian加jia量liang為wei500.0 mg/kg.B.W.時，受免異育銀鯽的獲得了最高的RPS，但是
，各個添加酵母多糖的試驗組之間的RPS則未出現顯著性差別（t測驗，P>0.05）。

    討論

    關於異育銀鯽的“鰓出血”病(bing)
，研(yan)究(jiu)者(zhe)們(men)已(yi)經(jing)用(yong)不(bu)同(tong)的(de)方(fang)法(fa)證(zheng)明(ming)了(le)其(qi)病(bing)原(yuan)是(shi)病(bing)毒(du)。而(er)對(dui)於(yu)魚(yu)類(lei)的(de)病(bing)毒(du)性(xing)疾(ji)病(bing)，目(mu)前(qian)尚(shang)無(wu)有(you)效(xiao)的(de)藥(yao)物(wu)可(ke)以(yi)治(zhi)療(liao)。本(ben)試(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)證(zheng)明(ming)了(le)酵(jiao)母(mu)多(duo)糖(tang)對(dui)這(zhe)種(zhong)病(bing)毒(du)病(bing)是(shi)具(ju)有(you)預(yu)防(fang)作(zuo)用(yong)的(de)。本(ben)研(yan)究(jiu)結(jie)果(guo)不(bu)僅(jin)證(zheng)明(ming)了(le)酵(jiao)母(mu)多(duo)糖(tang)對(dui)供(gong)試(shi)異(yi)育(yu)銀(yin)鯽(ji)的(de)幾(ji)種(zhong)免(mian)疫(yi)相(xiang)關(guan)物(wu)質(zhi)的(de)活(huo)性(xing)具(ju)有(you)刺(ci)激(ji)作(zuo)用(yong)，而(er)且(qie)采(cai)用(yong)將(jiang)供(gong)試(shi)魚(yu)與(yu)典(dian)型(xing)病(bing)魚(yu)同(tong)居(ju)感(gan)染(ran)的(de)方(fang)式(shi)
，證(zheng)明(ming)了(le)供(gong)試(shi)魚(yu)是(shi)具(ju)有(you)提(ti)高(gao)試(shi)驗(yan)魚(yu)抵(di)抗(kang)病(bing)原(yuan)感(gan)染(ran)的(de)作(zuo)用(yong)的(de)。

    6個不同劑量對供試異育銀鯽血清中幾種免疫相關物質活性的差別均不是很明顯

，說明在異育銀鯽的餌料中酵母多糖的添加量以100.0-600.0 mg/kg.B.W.均具有一定的作用。

    至於添加有酵母多糖餌料的投喂時間究竟以連續多長時間為宜，以及在飼料中酵母多糖的最適宜添加量等
，尚需要進一步研究。

文/譯：華中農業大學 陳昌福 胡明