控製菌檢驗方法驗證
發布日期：2023-08-30
核心提示：一. 控製菌檢驗方法驗證建立藥品的微生物限度檢查時，進行控製菌檢查方法的驗證，以確認所采用的方法適合於該藥品的的控製菌檢查
一. 控製菌檢驗方法驗證
建jian立li藥yao品pin的de微wei生sheng物wu限xian度du檢jian查zha時shi，進jin行xing控kong製zhi菌jun檢jian查zha方fang法fa的de驗yan證zheng，以yi確que認ren所suo采cai用yong的de方fang法fa適shi合he於yu該gai藥yao品pin的de的de控kong製zhi菌jun檢jian查zha方fang法fa測ce定ding。若ruo藥yao品pin的de組zu分fen或huo原yuan檢jian驗yan條tiao件jian發fa生sheng改gai變bian可ke能neng影ying響xiang檢jian驗yan結jie果guo時shi，檢jian驗yan方fang法fa應ying進jin行xing重zhong新xin驗yan證zheng。驗yan證zheng試shi驗yan也ye可ke與yu供gong試shi品pin的de控kong製zhi菌jun檢jian查zha同tong時shi進jin行xing。大腸埃希菌（Esherichia coli）【CMCC(B) 44102】或同等有效的金黃色葡萄球菌（ Staphylococcus）【CMCC(B)26003】或同等有效的乙型付傷寒沙門菌（Salmonella paratyphi B）【CMCC(B) 50094】或同等有效的銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）【CMCC (B) 10104】或同等有效的驗證實驗所用的菌株傳代次數不得超過5代（從菌種保存中心獲得的冷凍幹燥菌種為0 代），並采用適宜的菌種保藏技術，以保證試驗菌株的生物學特性。大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型付傷寒沙門菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養物至10mL營養肉湯培養基中，35～37℃培養18～24小時；分別取培養液 1mL加0.9%無菌氯化鈉溶液，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-5~10-7，製成每1ml含菌數10～100CFU的菌懸液。設立陰性菌對照組是為了驗證該控製菌檢查方法的專屬性。方法同試驗組，驗證大腸埃希菌、大腸菌群、沙門菌檢查法時的陰性對照菌采用金黃色葡萄球菌；驗證銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌檢查法時的陰性對照菌采用大腸埃希菌。陰性對照菌不得檢出。
- 大腸埃希菌 取相當於1g或1mL供試品的供試液至100mL膽鹽乳糖培養基中，陽性菌對照加入大腸埃希菌10～100CFU，陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌 10～100CFU，35～37℃培養18～24小時，取此培養物按《微生物限度檢查SOP》大腸埃希菌項下規定檢查。
- 大腸菌群 取含適量（不少於10ml）的膽鹽乳糖發酵培養基管3支，分別加入含供試品1g或1mL 、0.1g或0.1mL、含供試品0.001g或0.001mL的供試液，陽性菌對照加入大腸埃希菌10～100CFU，陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌 10～100CFU，35～37℃培養18～24小時，按《微生物限度檢查SOP》大腸菌群項下規定檢查。
- 沙門菌 取供試品10g或10mL，直接或處理後接種至適量（不少於200mL）的營養肉湯培養基中，用勻漿儀或其他適宜方法混勻，陽性菌對照加入沙門菌 10～100CFU，陰性菌對照加入金黃色葡萄球菌10～100CFU，35～37℃培養18～24小時。按《微生物限度檢查SOP》沙門菌項下規定檢查。
- 銅綠假單胞菌 取相當於1g或1mL供試品的供試液至100mL膽鹽乳糖培養基中，陽性菌對照加入銅綠假單胞菌10～100CFU，陰性菌對照加入大腸埃希菌10～100CFU，35～37℃培養18～24小時。按《微生物限度檢查SOP》沙門菌項下規定檢查。
- 金黃色葡萄球菌 取相當於1g或1mL供試品的供試液至100mL膽鹽乳糖培養基中，陽性菌對照加入金黃色葡萄球菌10～100CFU，陰性菌對照加入大腸埃希菌 10～100CFU，35～37℃培養18～24小時。按《微生物限度檢查SOP》金黃色葡萄球菌項下規定檢查。
供試品有抑菌作用，放大培養基量，由1：100放大到1：300、1：500或1：1000，由於容器體積限製，一般放大到500mL或1000mL，本法適用於抑菌作用不強的樣品。采cai用yong薄bo膜mo過guo濾lv法fa時shi，取qu規gui定ding量liang供gong試shi液ye，過guo濾lv，衝chong洗xi，試shi驗yan菌jun應ying加jia在zai最zui後hou一yi次ci衝chong洗xi液ye中zhong，過guo濾lv後hou，注zhu入ru培pei養yang基ji或huo取qu出chu濾lv膜mo接jie入ru增zeng菌jun培pei養yang基ji中zhong。取規定量供試液，如供試液含許多藥渣，先以500轉/分鍾離心3~5分鍾，取全部上清液，再以3000轉/分離心20分鍾，取下麵1mL液體，並將適量的稀釋劑洗滌管底的洗滌液一並移入同瓶增菌液中，培養，本法適用於中度抑菌作用的樣品。在(zai)供(gong)試(shi)品(pin)溶(rong)液(ye)中(zhong)加(jia)入(ru)相(xiang)應(ying)的(de)中(zhong)和(he)劑(ji)，以(yi)減(jian)除(chu)供(gong)試(shi)品(pin)中(zhong)抑(yi)菌(jun)成(cheng)分(fen)的(de)作(zuo)用(yong)，中(zhong)和(he)劑(ji)應(ying)對(dui)微(wei)生(sheng)物(wu)無(wu)毒(du)性(xing)，與(yu)抑(yi)菌(jun)成(cheng)分(fen)結(jie)合(he)後(hou)的(de)產(chan)物(wu)應(ying)對(dui)微(wei)生(sheng)物(wu)亦(yi)無(wu)毒(du)性(xing)，或(huo)有(you)毒(du)性(xing)但(dan)不(bu)影(ying)響(xiang)待(dai)檢(jian)菌(jun)的(de)檢(jian)出(chu)。至少應進行3次(ci)獨(du)立(li)平(ping)行(xing)試(shi)驗(yan)。陰(yin)性(xing)菌(jun)對(dui)照(zhao)組(zu)不(bu)得(de)檢(jian)出(chu)陰(yin)性(xing)對(dui)照(zhao)菌(jun)。若(ruo)試(shi)驗(yan)組(zu)檢(jian)出(chu)試(shi)驗(yan)菌(jun)，照(zhao)該(gai)供(gong)試(shi)液(ye)製(zhi)備(bei)方(fang)法(fa)和(he)控(kong)製(zhi)菌(jun)檢(jian)查(zha)法(fa)進(jin)行(xing)該(gai)供(gong)試(shi)品(pin)控(kong)製(zhi)菌(jun)的(de)檢(jian)查(zha)；若試驗組未檢出試驗菌，應采用自然沉降法、培養基稀釋法、離心沉澱集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，並重新進行方法驗證。編輯：songjiajie2010
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