一、開箱檢查:
打開包裝箱,查看斜麵是否破損,菌株編號與說明書是否一致。
二、實驗準備:
仔細閱讀菌株說明書,準備2個新鮮平板或斜麵。
三、器材滅菌:
斜麵試管表麵消毒後,轉移至生物安全櫃中,管口灼燒滅菌冷卻備用。接種鋤和接種鏟在酒精燈外焰翻轉灼燒滅菌3-5分鍾,冷卻備用,冷卻後用接種鋤在斜麵上相距0.5cm處切兩條平行線(與試管垂直)。
四、切分斜麵:
換接種鏟在兩條平行線之間相距0.5cm處切兩條平行線(與試管平行),形成0.5cm*0.5cm的小正方形菌塊。
五、黴菌轉接:
用接種鏟挑取菌塊平放到平板或斜麵(固體瓊脂表麵)上(菌塊正麵朝上)。轉接多個平板或斜麵,重複以上操作即可。
六、完成培養:
平板正放,斜麵傾斜放置於黴菌培養箱中培養。(參照菌種說明書上的培養條件設置溫度)
(1) 實驗材料
根黴,毛黴,黑曲黴,青黴,土豆瓊脂培養基,培養皿,載玻片,蓋玻片,鑷子,顯微鏡,小刀,U形管等。
(2) 實驗步驟
1、配置培養基:根據原料用量配置土豆培養基。配置時,先急火煮沸,在溫火加熱20min,若有渾濁出現,則需過濾,然後定容。包紮土豆培養基,甘油等其他用品。滅菌後取出備用2、培養小室準備及滅菌 在培養皿底部鋪一張略小於皿底的圓形濾紙片,濾紙片上依次放上“U”形載玻片擱架、載玻片、蓋玻片-四片,蓋上皿蓋,牛皮紙包紮,於恒溫幹燥箱中121℃滅菌30min烘幹備用;
2、瓊脂薄片製作:
a) 將稍微冷卻的培養基,倒在培養皿 中,做成薄平板。培養基應該要倒 得薄而均勻。注意無菌操作。
b) 用解剖刀將瓊脂薄平板切成邊長不大於1cm的瓊脂薄片
c) 用解剖刀將瓊脂薄片移至小室載玻片上(一個載玻片上方兩塊薄片)
3、取菌接種:用接種環挑取少量待觀察的黴菌孢子(黴菌菌種的表麵輕輕刮取即可),接jie種zhong於yu固gu體ti培pei養yang基ji邊bian緣yuan,以yi便bian於yu黴mei菌jun生sheng長chang。接jie種zhong時shi隻zhi要yao將jiang帶dai菌jun的de接jie種zhong環huan在zai載zai玻bo片pian上shang輕qing輕qing碰peng幾ji下xia即ji可ke。接jie種zhong量liang要yao少shao,以yi免mian培pei養yang後hou菌jun絲si過guo於yu稠chou密mi而er影ying響xiang觀guan察cha。
4、加蓋玻片:用(yong)無(wu)菌(jun)鑷(nie)子(zi)將(jiang)皿(min)內(nei)的(de)蓋(gai)玻(bo)片(pian)蓋(gai)在(zai)瓊(qiong)脂(zhi)薄(bo)層(ceng)上(shang),用(yong)鑷(nie)子(zi)輕(qing)壓(ya)蓋(gai)玻(bo)片(pian),使(shi)蓋(gai)玻(bo)片(pian)和(he)載(zai)玻(bo)片(pian)之(zhi)間(jian)的(de)距(ju)離(li)相(xiang)當(dang)接(jie)近(jin),但(dan)不(bu)能(neng)壓(ya)扁(bian)。蓋(gai)玻(bo)片(pian)不(bu)能(neng)緊(jin)貼(tie)載(zai)玻(bo)片(pian),要(yao)彼(bi)此(ci)留(liu)有(you)小(xiao)縫(feng)隙(xi),一(yi)是(shi)為(wei)了(le)通(tong)氣(qi),二(er)是(shi)使(shi)各(ge)部(bu)分(fen)結(jie)構(gou)平(ping)行(xing)排(pai)列(lie),易(yi)於(yu)觀(guan)察(cha)。
5、倒保濕劑:每皿倒入約2-3mL 20%的經滅菌處理的甘油,使皿內濾紙完全濕潤,以保持皿內濕度,蓋上皿蓋。製成載玻片濕室。
6、正置培養:將平皿置於27℃黴菌培養箱中培養一周。
7、觀察: 將培養好的載玻片取出,置於顯微鏡下直接觀察。
(3)實驗結果及分析
實驗結果
1.根黴:菌絲無隔,有假根、匍匐菌絲。假根著生處有向上直立的孢囊梗,其頂端膨大成孢子囊,底部為半球形囊軸。
2.毛黴:孢囊梗直接由菌絲出,頂端為球形孢子囊
3.黑曲黴:菌絲有隔,氣生菌絲分化為分生孢子梗(無隔),頂端 膨脹為球狀頂囊。
4.青黴:菌絲有隔,分生孢子梗頂端不膨大,無頂囊,多次分枝成幾輪小梗,小梗頂端長孢子。分生孢子梗呈掃帚狀。
如何讓黴菌產孢子?
一般微生物都會在逆境下產孢子,比如低溫、紫(zi)外(wai)照(zhao)射(she)等(deng)惡(e)劣(lie)的(de)生(sheng)存(cun)條(tiao)件(jian),有(you)的(de)情(qing)況(kuang)下(xia),陽(yang)光(guang)照(zhao)射(she)也(ye)能(neng)促(cu)使(shi)產(chan)孢(bao)。不(bu)同(tong)的(de)菌(jun)的(de)產(chan)孢(bao)條(tiao)件(jian)還(hai)不(bu)太(tai)一(yi)樣(yang),要(yao)因(yin)菌(jun)而(er)異(yi),和(he)培(pei)養(yang)基(ji)也(ye)有(you)關(guan)。可(ke)以(yi)找(zhao)找(zhao)相(xiang)關(guan)資(zi)料(liao)查(zha)查(zha)產(chan)孢(bao)培(pei)養(yang)基(ji),可(ke)以(yi)試(shi)試(shi)水(shui)瓊(qiong)脂(zhi)培(pei)養(yang)基(ji)(直接在水中加瓊脂、無其他營養物質)。
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