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平板劃線分離法:shizhibahunzazaiyiqideweishengwuhuotongyiweishengwuquntizhongdebutongxibaoyongjiezhonghuanzaipingbanpeiyangjibiaomian，tongguofenquhuaxianxishierdedaojiaoduodulifenbudedangexibao，jingpeiyanghoushengchangfanzhichengdanjunluo，tongchangbazhezhongdanjunluodangzuodaifenliweishengwudechunzhong。youshizhezhongdanjunluobingfeidouyoudangexibaofanzhierlaide，gubixufanfufenliduocicaikededaochunzhong。qiyuanlishijiangweishengwuyangpinzaigutipeiyangjibiaomianduocizuo“由點到線”稀釋而達到分離目的的。
為方便劃線，一般培養基不宜太薄，ÿ皿約傾倒20ml培養基，培養基應厚薄均勻，平板表麵光滑。劃線分離主要有分區劃線法和連續劃線法兩種（如圖1， A、B）。
圖1
分區劃線法是將平板分四區，故又稱四分區劃線法。劃線時ÿ次將平板轉動60~70°劃線，ÿ換一次角度，應將接種環上的菌燒死後，再通過上次劃線處劃線；
另一種連續劃線法是從平板邊緣一點開始，連續作波浪式劃線直到平板的另一端為止，當中不需灼燒接種環上的菌。
1）連續劃線法
接種環於酒精燈外焰燒至紅透，接種棒也要充分灼燒，最後再集中燒接種環至紅。
輕(qing)輕(qing)搖(yao)勻(yun)待(dai)接(jie)種(zhong)試(shi)管(guan)，左(zuo)手(shou)手(shou)心(xin)托(tuo)待(dai)接(jie)種(zhong)試(shi)管(guan)底(di)側(ce)部(bu)，右(you)手(shou)執(zhi)接(jie)種(zhong)環(huan)，右(you)手(shou)小(xiao)指(zhi)拔(ba)下(xia)試(shi)管(guan)塞(sai)，於(yu)酒(jiu)精(jing)燈(deng)附(fu)近(jin)將(jiang)接(jie)種(zhong)環(huan)伸(shen)進(jin)試(shi)管(guan)，稍(shao)候(hou)，再(zai)插(cha)入(ru)待(dai)接(jie)接(jie)種(zhong)液(ye)中(zhong)，蘸(zhan)一(yi)下(xia)，取(qu)滿(man)一(yi)環(huan)，抽(chou)出(chu)、燒塞、蓋蓋、放(fang)回(hui)試(shi)管(guan)架(jia)。或(huo)將(jiang)接(jie)種(zhong)環(huan)通(tong)過(guo)稍(shao)打(da)開(kai)皿(min)蓋(gai)的(de)縫(feng)隙(xi)伸(shen)入(ru)平(ping)板(ban)，在(zai)平(ping)板(ban)邊(bian)緣(yuan)空(kong)白(bai)處(chu)接(jie)觸(chu)一(yi)下(xia)使(shi)接(jie)種(zhong)環(huan)冷(leng)卻(que)，然(ran)後(hou)以(yi)無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)接(jie)種(zhong)環(huan)直(zhi)接(jie)取(qu)平(ping)板(ban)上(shang)待(dai)分(fen)離(li)純(chun)化(hua)的(de)菌(jun)落(luo)。
於靠近酒精燈處打開平皿蓋約30°，右手將環伸進平皿，將菌種點種在平板邊緣一處，輕輕塗布於瓊脂培養基邊緣（如圖2），抽出接種環，蓋上平皿蓋，然後將接種環上多餘的培養液在火焰中灼燒，打開平皿蓋約30°伸shen入ru接jie種zhong環huan，待dai接jie種zhong環huan冷leng卻que後hou，再zai與yu接jie種zhong液ye處chu輕qing輕qing接jie觸chu，開kai始shi在zai平ping板ban表biao麵mian輕qing巧qiao滑hua動dong劃hua線xian，接jie種zhong環huan不bu要yao嵌qian入ru培pei養yang基ji內nei劃hua破po培pei養yang基ji，線xian條tiao要yao平ping行xing密mi集ji，充chong分fen利li用yong平ping板ban表biao麵mian積ji，注zhu意yi勿wu使shi前qian後hou兩liang條tiao線xian重zhong疊die，劃hua線xian完wan畢bi，關guan上shang皿min蓋gai。灼zhuo燒shao接jie種zhong環huan，待dai冷leng卻que後hou放fang置zhi接jie種zhong架jia上shang。培pei養yang皿min倒dao置zhi於yu適shi溫wen的de恒heng溫wen箱xiang內nei培pei養yang（以免培養過程皿蓋冷凝水滴下，衝散已分離的菌落）。培養後在劃線平板上觀察沿劃線處長出的菌落形態，鏡檢後再接種斜麵。
圖2
2）分區劃線法
取菌、接種、培養方法與“連續劃線法”相似。
分區劃線法分離時平板分四個區，故又稱四分區劃線法。其中第4區是單菌落的主要分布區，故其劃線麵積應最大。為防止第4區內劃線與1、2、3區線條相接觸，應使4區線條與1區線條相平行，這樣區與區間線條夾角最好保持120°左右。
先將接種環沾取少量菌在平板1區劃3~5條平行線，取出接種環，左手關上皿蓋，將平板轉動60~70°，右手把接種環上多餘菌體燒死，將燒紅的接種環在平板邊緣冷卻，再按以上方法以1區劃線的菌體為菌源，由1區向2區作第2次平行劃線。第2次劃線完畢，同時再把平皿轉動約60~70°，同樣依次在3、4區劃線。劃線完畢，灼燒接種環，關上皿蓋，同上法培養，在劃線區觀察單菌落。
該法主要用於單個菌落的純培養、保存菌種或觀察細菌的某些特性。
（1）左(zuo)手(shou)平(ping)托(tuo)兩(liang)支(zhi)試(shi)管(guan)，拇(mu)指(zhi)按(an)住(zhu)試(shi)管(guan)的(de)底(di)部(bu)。外(wai)側(ce)一(yi)支(zhi)試(shi)管(guan)是(shi)斜(xie)麵(mian)上(shang)長(chang)有(you)菌(jun)苔(tai)的(de)菌(jun)種(zhong)試(shi)管(guan)，內(nei)側(ce)一(yi)支(zhi)是(shi)待(dai)接(jie)的(de)空(kong)白(bai)斜(xie)麵(mian)，兩(liang)支(zhi)試(shi)管(guan)的(de)斜(xie)麵(mian)同(tong)時(shi)向(xiang)上(shang)。用(yong)右(you)手(shou)將(jiang)試(shi)管(guan)塞(sai)旋(xuan)鬆(song)，以(yi)便(bian)在(zai)接(jie)種(zhong)時(shi)容(rong)易(yi)拔(ba)出(chu)。
（2）右手拿接種環（如握ë筆一樣），在火焰上先將環端燒紅滅菌，然後將有可能伸入試管的其餘部λ也過火滅菌．
（3）將(jiang)兩(liang)支(zhi)試(shi)管(guan)的(de)上(shang)端(duan)並(bing)齊(qi)，靠(kao)近(jin)火(huo)焰(yan)，用(yong)右(you)手(shou)小(xiao)指(zhi)和(he)掌(zhang)心(xin)將(jiang)兩(liang)支(zhi)試(shi)管(guan)的(de)試(shi)管(guan)塞(sai)一(yi)並(bing)夾(jia)住(zhu)拔(ba)出(chu)，試(shi)管(guan)塞(sai)仍(reng)夾(jia)在(zai)手(shou)中(zhong)，然(ran)後(hou)讓(rang)試(shi)管(guan)口(kou)緩(huan)緩(huan)過(guo)火(huo)焰(yan)。注(zhu)意(yi)不(bu)得(de)將(jiang)試(shi)管(guan)塞(sai)隨(sui)意(yi)丟(diu)於(yu)桌(zhuo)上(shang)受(shou)到(dao)沾(zhan)汙(wu)，試(shi)管(guan)口(kou)切(qie)勿(wu)燒(shao)得(de)過(guo)燙(tang)以(yi)免(mian)炸(zha)裂(lie)。
（4）將已灼燒的接種環伸入外側的菌種試管內。先把接種環的先端觸及無菌苔的培養基上使其冷卻（如果操作迅速，此時接種環尚δ完全冷卻）。再zai根gen據ju需xu要yao用yong接jie種zhong環huan沾zhan取qu一yi定ding量liang的de菌jun苔tai，注zhu意yi勿wu刮gua破po培pei養yang基ji。將jiang沾zhan有you菌jun苔tai的de接jie種zhong環huan迅xun速su抽chou出chu試shi管guan，注zhu意yi勿wu使shi接jie種zhong環huan碰peng到dao管guan壁bi或huo管guan口kou上shang。
（5）迅速將沾有菌種的接種環伸入另一支待接斜麵試管的底部，輕輕向上劃線（直線或曲線，根據需要確定），勿劃破培養基表麵。
（6）接好種的斜麵試管口再次過火焰，試管塞底部過火焰後立即塞入試管內。
（7）將沾有菌苔的接種環在火焰上燒紅滅菌。先在內焰中燒灼，使其幹燥後，再在外焰中燒紅，以免菌苔驟熱，會使菌體爆濺，造成汙染。
（8）放下環後，再將試管塞旋緊，在試管外麵上方距試管口2～3cm處貼上標簽。
斜麵接種方法及無菌操作過程如下具體操作過程見圖3。
圖3
用接種針經火焰滅菌，沾取少量菌種，垂直地穿入試管固體培養基中心至底部，然後將挑起菌落的接種針平行於管壁插入瓊脂斜麵底部、沿著原接種線將針拔出、燒試管塞和試管口、塞上試管塞，再將接種針上殘留的菌體在火焰上燒掉。要做到手穩、動作輕巧快速。見下圖4。（a:垂直接種法，b：水平接種法）
1）液體接種法
包(bao)括(kuo)從(cong)外(wai)麵(mian)菌(jun)種(zhong)接(jie)入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)，或(huo)從(cong)液(ye)體(ti)菌(jun)種(zhong)接(jie)入(ru)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)液(ye)，兩(liang)種(zhong)情(qing)況(kuang)都(dou)可(ke)以(yi)用(yong)接(jie)種(zhong)環(huan)接(jie)種(zhong)。但(dan)在(zai)培(pei)養(yang)量(liang)比(bi)較(jiao)大(da)的(de)情(qing)況(kuang)下(xia)，液(ye)體(ti)接(jie)種(zhong)宜(yi)采(cai)用(yong)移(yi)液(ye)管(guan)接(jie)種(zhong)，要(yao)求(qiu)無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)。
左(zuo)手(shou)持(chi)試(shi)管(guan)，右(you)手(shou)將(jiang)燒(shao)灼(zhuo)過(guo)的(de)接(jie)種(zhong)環(huan)伸(shen)入(ru)菌(jun)種(zhong)管(guan)，待(dai)冷(leng)卻(que)後(hou)，取(qu)菌(jun)液(ye)一(yi)環(huan)，立(li)即(ji)移(yi)入(ru)培(pei)養(yang)基(ji)管(guan)中(zhong)，在(zai)接(jie)近(jin)液(ye)麵(mian)的(de)管(guan)壁(bi)上(shang)輕(qing)輕(qing)研(yan)磨(mo)，然(ran)後(hou)將(jiang)試(shi)管(guan)稍(shao)傾(qing)斜(xie)，並(bing)沾(zhan)取(qu)少(shao)許(xu)液(ye)體(ti)調(tiao)和(he)，使(shi)菌(jun)液(ye)混(hun)合(he)於(yu)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)。
2）半固體培養基接種法
將jiang燒shao灼zhuo過guo的de接jie種zhong針zhen插cha入ru菌jun種zhong管guan冷leng卻que後hou，沾zhan取qu菌jun液ye少shao許xu，立li即ji垂chui直zhi插cha入ru半ban固gu體ti培pei養yang基ji的de中zhong心xin至zhi接jie近jin於yu管guan底di處chu，但dan不bu可ke直zhi刺ci至zhi管guan底di，然ran後hou循xun原yuan·退出。管口通過火焰，塞上棉塞，接種針燒灼滅菌後放下。
將上述已接種好的培養物，37℃度恒溫箱內培養，24小時後取出觀察結果。
用無菌移液管吸取菌懸液0.1mL，滴di加jia於yu培pei養yang基ji平ping板ban上shang，右you手shou持chi無wu菌jun塗tu布bu棒bang，左zuo手shou拿na培pei養yang皿min，並bing用yong拇mu指zhi將jiang皿min蓋gai打da開kai一yi縫feng，在zai火huo焰yan旁pang右you手shou持chi塗tu布bu棒bang與yu培pei養yang皿min平ping板ban表biao麵mian將jiang菌jun液ye自zi平ping板ban中zhong央yang均jun勻yun向xiang四si周zhou塗tu布bu擴kuo散san，切qie忌ji用yong力li過guo猛meng將jiang菌jun液ye直zhi接jie推tui向xiang平ping板ban邊bian緣yuan或huo將jiang培pei養yang基ji劃hua破po。接jie種zhong後hou，將jiang平ping板ban倒dao置zhi於yu恒heng溫wen箱xiang中zhong，培pei養yang觀guan察cha。
