菌落總數就是指在一定條件下(如需氧情況、營養條件、pH、培養溫度和時間等)每克(每毫升)檢樣所生長出來的細菌菌落總數。按國家標準方法規定,即在需氧情況下,37℃培養48h,能在普通營養瓊脂平板上生長的細菌菌落總數,所以厭氧或微需氧菌、有(you)特(te)殊(shu)營(ying)養(yang)要(yao)求(qiu)的(de)以(yi)及(ji)非(fei)嗜(shi)中(zhong)溫(wen)的(de)細(xi)菌(jun),由(you)於(yu)現(xian)有(you)條(tiao)件(jian)不(bu)能(neng)滿(man)足(zu)其(qi)生(sheng)理(li)需(xu)求(qiu),故(gu)難(nan)以(yi)繁(fan)殖(zhi)生(sheng)長(chang)。因(yin)此(ci)菌(jun)落(luo)總(zong)數(shu)並(bing)不(bu)表(biao)示(shi)實(shi)際(ji)中(zhong)的(de)所(suo)有(you)細(xi)菌(jun)總(zong)數(shu),菌(jun)落(luo)總(zong)數(shu)並(bing)不(bu)能(neng)區(qu)分(fen)其(qi)中(zhong)細(xi)菌(jun)的(de)種(zhong)類(lei),所(suo)以(yi)有(you)時(shi)被(bei)稱(cheng)為(wei)雜(za)菌(jun)數(shu),需(xu)氧(yang)菌(jun)數(shu)等(deng)。
1.菌落總數(colonies number)
junluozongshucedingshiyonglaipandingshipinbeixijunwurandechengdujiweishengzhiliang,tafanyingshipinzaishengchanguochengzhongshifoufuheweishengyaoqiu,yibianduibeijianyangpinzuochushidangdeweishengxuepingjia。junluozongshudeduoshaozaiyidingchengdushangbiaozhizheshipinweishengzhiliangdeyoulie。
菌落總數 - 概念
junluoshizhixijunzaigutipeiyangjishangshengchangfanzhierxingchengdenengbeirouyanshibiedeshengchangwu,tashiyoushuyiwanjixiangtongdeweishengwujiheercheng。dangyangpinbeixishidaoyidingchengdu,yupeiyangjihunhe,zaiyidingpeiyangtiaojianxia,meigenenggoushengchangfanzhidexijunxibaodoukeyizaipingbanshangxingchengyigekejiandejunluo。junluozongshushizhishipinjianyangjingguochuli,zaiyidingtiaojianxiapeiyanghou(如培養基成分培養溫度和時間、PH值、需氧性等)所取1ml(g)檢樣中所含菌落的總數。
菌落總數 - 單位
菌落形成單位叫做CFU。CFU的含義是形成菌落的菌落個數,不等於細菌個數。(比如兩個相同的細菌靠得很近或貼在一起,那麼經過培養這兩個細菌將會形成一個菌落,此時就是2個細菌,1CFU)。junluozongshuwangwangcaiyongdeshipingbanjishufa,jingguopeiyanghouwomenshuchupingbanshangsuoshengchangchudejunluogeshu,congerjisuanchumeihaoshenghuomeikedaijianyangpinzhongkeyipeiyangchuduoshaogejunluo,yushiyiCFU/ml或CFU/g報告之。[1]
菌落總數 - 作用
菌jun落luo主zhu要yao作zuo為wei判pan定ding食shi品pin被bei汙wu染ran程cheng度du的de標biao誌zhi,也ye可ke以yi應ying用yong這zhe一yi方fang法fa觀guan察cha細xi菌jun對dui食shi品pin被bei汙wu染ran程cheng序xu的de標biao誌zhi,也ye可ke以yi應ying用yong這zhe一yi方fang法fa觀guan察cha細xi菌jun在zai食shi品pin繁fan殖zhi的de動dong態tai,以yi便bian對dui被bei檢jian樣yang品pin進jin行xing衛wei生sheng學xue評ping價jia時shi提ti供gong依yi據ju。
菌落總數 - 危害
shipindejunluozongshuyanzhongchaobiao,shuomingqichanpindeweishengzhuangkuangdabudaojibendeweishengyaoqiu,jianghuipohuaishipindeyingyangchengfen,jiasushipindefubaibianzhi,shishipinshiqushiyongjiazhi。xiaofeizheshiyongweishengwuchaobiaoyanzhongdeshipin,henrongyihuanlijidengchangdaojibing,kenengyinqioutu、腹瀉等症狀,危害人體健康安全。
但dan需xu要yao強qiang調tiao的de是shi,菌jun落luo總zong數shu和he致zhi病bing菌jun有you本ben質zhi區qu別bie,菌jun落luo總zong數shu包bao括kuo致zhi病bing菌jun和he有you益yi菌jun,對dui人ren體ti有you損sun害hai的de主zhu要yao是shi其qi中zhong的de致zhi病bing菌jun,這zhe些xie病bing菌jun會hui破po壞huai腸chang道dao裏li正zheng常chang的de菌jun落luo環huan境jing,一yi部bu分fen可ke能neng在zai腸chang道dao被bei殺sha滅mie,一yi部bu分fen會hui留liu在zai身shen體ti裏li引yin起qi腹fu瀉xie、sunshangganzangdengshentiqiguan,eryouyijunbaokuosuannaizhongchangbeitiqiderusuanjundeng。danjunluozongshuchaobiaoyeyiweizhezhibingjunchaobiaodejihuizengda,zengjiaweihairentijiankangdejilv。
2、檢驗方法編輯菌落總數的測定,一般將被檢樣品製成幾個不同的10倍遞增稀釋液,然後從每個稀釋液中分別取出1mL置於滅菌平皿中與營養瓊脂培養基混合,在一定溫度下,培養一定時間後(一般為48小時),記錄每個平皿中形成的菌落數量,依據稀釋倍數,計算出每克(或每ml)原始樣品中所含細菌菌落總數。
基本操作一般包括:樣品的稀釋--傾注平皿--培養48小時--計數報告。
國內外菌落總數測定方法基本一致,從檢樣處理、稀釋、傾qing注zhu平ping皿min到dao計ji數shu報bao告gao無wu何he明ming顯xian不bu同tong,隻zhi是shi在zai某mou些xie具ju體ti要yao求qiu方fang麵mian稍shao有you差cha別bie,如ru有you的de國guo家jia在zai樣yang品pin稀xi釋shi和he傾qing注zhu培pei養yang進jin,對dui吸xi管guan內nei液ye體ti的de流liu速su,稀xi釋shi液ye的de振zhen蕩dang幅fu度du、時間和次數以及放置時間等均作了比較具體的規定。
檢驗方法參見:
GB4789.2-2016 《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定》
SN/T 0168-2015《進出口食品中菌落總數計數方法》
3、檢驗步驟編輯樣品的處理和稀釋
①操作方法:以無菌操作取檢樣25g(或25ml),放於225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內預置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振要或研磨製成1:10的均勻稀釋液。
固體檢樣在加入稀釋液後,最好置滅菌均質器中以8000~10000r/min的速度處理1min,製成1:10的均勻稀釋液。
用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml,沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混合均勻,製成1:100的稀釋液。
另取1ml滅菌吸管,按上項操作順序,製10倍遞增稀釋液,如此每遞增稀釋一次即換用1支1ml滅菌吸管。
②無菌操作:操作中必須有“無菌操作”的概念,所用玻璃器皿必須是完全滅菌的,不得殘留有細菌或抑菌物質。所用剪刀、鑷子等器具也必須進行消毒處理。樣品如果有包裝,應用75%乙醇在包裝開口處擦拭後取樣。
操作應當在超淨工作台或經過消毒處理的無菌室進行。瓊脂平板在工作台暴露15分鍾,每個平板不得超過15個菌落。
③采樣的代表性:如係固體樣品,取樣時不應集中一點,宜多采幾個部位。固體樣品必須經過均質或研磨,液體樣品須經過振搖,以獲得均勻稀釋液。
④樣品稀釋誤差:為減少樣品稀釋誤差,在連續遞次稀釋時,每一稀釋液應充分振搖,使其均勻,同時每一稀釋度應更換一支吸管。
在進行連續稀釋時,應將吸管內液體沿管壁流入,勿使吸管尖端伸入稀釋液內,以免吸管外部粘附的檢液溶於其內。
為減少稀釋誤差,SN標準采用取10mL稀釋液,注入90mL緩衝液中。
⑤稀釋液:樣品稀釋液主要是滅菌生理鹽水,有的采用磷酸鹽緩衝液(或0.1%蛋白腖水),後者對食品已受損傷的細菌細胞有一定的保護作用。如對含鹽量較高的食品(如醬油)進行稀釋,可以采用滅菌蒸餾水。
4.傾注培養
①操作方法:根據標準要求或對汙染情況的估計,選擇2~3個適宜稀釋度,分別在製10倍遞增稀釋的同時,以吸取該稀釋度的吸管移取1ml稀釋液於滅菌平皿中,每個稀釋度做兩個平皿。
將涼至46℃營養瓊脂培養基注入平皿約15ml,並轉動平皿,混合均勻。同時將營養瓊脂培養基傾入加有1ml稀釋液(不含樣品)的滅菌平皿內作空白對照。
待瓊脂凝固後,翻轉平板,置36±1℃溫箱內培養48±2h,取出計算平板內菌落數目,乘以稀釋倍數,即得每克(每毫升)樣品所含菌落總數。
②傾注用培養基應在46℃水浴內保溫,溫度過高會影響細菌生長,過低瓊脂易於凝因而不能與菌液充分混勻。如無水浴,應以皮膚感受較熱而不燙為宜。
傾注培養基的量規定不一,從12~20ml不等,一般以15ml較為適宜,平板過厚可影響觀察,太薄又易於幹裂。傾注時,培基底部如有沉澱物,應將底部棄去,以免與菌落混淆而影響計數觀察。
③為wei使shi菌jun落luo能neng在zai平ping板ban上shang均jun勻yun分fen布bu,檢jian液ye加jia入ru平ping皿min後hou,應ying盡jin快kuai傾qing注zhu培pei養yang基ji並bing旋xuan轉zhuan混hun勻yun,可ke正zheng反fan兩liang個ge方fang向xiang旋xuan轉zhuan,檢jian樣yang從cong開kai始shi稀xi釋shi到dao傾qing注zhu最zui後hou一yi個ge平ping皿min所suo用yong時shi間jian不bu宜yi超chao過guo20min,以防止細菌有所死亡或繁殖。
④培養溫度一般為37℃(水產品的培養溫度,由於其生活環境水溫較低,故多采用30℃)。培養時間一般為48h,有些方法隻要求24h的培養即可計數。培養箱應保持一定的濕度,瓊脂平板培養48h後,培養基失重不應超過15%。
⑤為wei了le避bi免mian食shi品pin中zhong的de微wei小xiao顆ke粒li或huo培pei基ji中zhong的de雜za質zhi與yu細xi菌jun菌jun落luo發fa生sheng混hun淆xiao,不bu易yi分fen辨bian,可ke同tong時shi作zuo一yi稀xi釋shi液ye與yu瓊qiong脂zhi培pei基ji混hun合he的de平ping板ban,不bu經jing培pei養yang,而er於yu4℃環境中放置,以便計數時作對照觀察。
在某些場合,為了防止食品顆粒與菌落混淆不清,可在營養瓊脂中加入氯化三苯四氮唑(TTC),培養後菌落呈紅色,易於分別。
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