答：保bao存cun的de是shi第di三san代dai複fu活huo出chu來lai後hou，如ru果guo采cai用yong平ping板ban或huo肉rou湯tang活huo化hua相xiang當dang於yu轉zhuan接jie了le一yi代dai，就jiu是shi第di四si代dai了le，如ru果guo還hai在zai瓷ci珠zhu裏li的de話hua就jiu還hai是shi原yuan來lai的de代dai數shu。如ru果guo是shi保bao存cun在zai斜xie麵mian上shang，這zhe一yi支zhi斜xie麵mian一yi直zhi就jiu是shi第di三san代dai，如ru果guo轉zhuan接jie到dao另ling一yi支zhi斜xie麵mian就jiu是shi第di四si代dai了le。傳chuan代dai原yuan則ze，菌jun株zhu活huo化hua複fu蘇su不論以任何形式繁殖了一次就算是傳了一代。但如果僅是物理位置的轉移沒有繁殖就不是傳代，需要注意。

2.剛買回來的陽性菌株是第0代嗎

？

答：一般菌株你買回來的時候上麵都會寫明第幾代，常規來說都是第0代的。像購買的ATCC或CICC的凍幹粉都是標記為0代的。

3.菌株傳代保存到瓷珠裏一定要挑單菌落嗎？

答：不bu一yi定ding非fei挑tiao單dan菌jun落luo
，但dan是shi一yi定ding要yao挑tiao相xiang同tong特te征zheng的de菌jun落luo，就jiu是shi說shuo從cong同tong一yi個ge菌jun落luo純chun化hua出chu來lai的de，以yi保bao證zheng它ta們men的de特te性xing完wan全quan一yi致zhi。原yuan則ze是shi盡jin量liang多duo挑tiao
，寧ning多duo勿wu少shao。

4.菌株保存是-70℃還是-80℃有具體標準規定麼
？

答：其實是有標準的
，《SN/T 2632-2010 微生物菌株常規保藏技術規程》是關於菌株保藏的一個標準，大家可以學習一下
，各個保存方式都有介紹
，但是瓷珠是比較新興的保存方式暫時裏麵還沒有收錄。

5.怎樣延長菌株的保存時間呢？

大量的實驗證明菌株在低溫、幹燥

、缺氧
、缺營養的條件下保存效果是最好的
，越接近這種保存條件，菌株的保存時間越長。

6.怎樣純化菌株？

純化就是從TSA上或別的非選擇性平板上轉接一次，這就相當於純化了。

7. 我們保存的一代菌株是不是要重新傳代保存呢，認證老師會不會認為這是個錯誤？

答：應該不會，認證老師不會提出這種問題的
，不過最好是一代菌株保存一些、二代菌株保存一些
，使用時工作菌株最好使用第三代菌株，一代菌株可作為長期保存用。

8. 為何要將第三代作為工作菌株？

答：duochuandaijicihoujunzhudehuolihuimingxiantigao，danzuiduochuandaidaodiwudaihoujiubunengyongle，yinweidiwudaihoujunzhusuiranbuhuiwanquanbianyi，danbianyilvhuimingxianzengjia，yincixuanyongdisandaizuoweigongzuojunzhushibijiaoheshide，ruoshiyongdiyi、第二代菌株活力沒有那麼強。

9.用瓷珠管反複上下搖勻，有泡沫不容易吸出來，怎麼辦
？

答：不必特別劇烈大尺度的搖動瓷珠管
，稍微上下晃動就可以
；如果確實有泡沫的話可以靜置一會，讓菌株多吸附一下瓷珠也是可以的。

10. 老師，黴菌需要長出孢子保存，可有黴菌孢子的圖片，長到什麼程度就可以保存了呢？

保存這種黑色孢子就可以
，這是黑曲黴的圖片。

11. 瓷珠管液體混勻可以吹吸麼？

答：不建議吹吸，因為空氣裏可能也帶有部分的細菌，萬一使用的槍頭等有菌混進去就不太好了，直接擰緊保存管蓋子後上下搖晃即可。

12. TSA斜麵一般多少度保存，可以放在冷藏裏嗎？

答：2-8℃保存，放在冷藏是可以的
；注意弧菌和綠膿杆菌要放到室溫20-25℃保存
，否則會很快死亡。

13.如果TSA斜麵放在冷凍裏麵
，會有什麼影響？

答：瓊脂冷凍後性狀會發生改變，會變得很軟
，結構發生改變，所以不建議冷凍；如果要冷凍的話就采用甘油保存法或瓷珠保存法。

14.用瓷珠管保存產氣莢膜梭菌老是保存不好！做好瓷珠管之後瓷珠管要放到厭氧袋裏麵再放到-20℃麼？

答：如果冷凍保存最好放在厭氧袋裏再-20°保存
，保存效果還可以；或者可以采用庖肉培養基保存，它是一種液體培養基，將產氣莢膜梭菌接進去然後2-8 ℃保存，可以保存一年沒有問題，在厭氧環境下保存效果最好。