接種與分離方法
根據待檢標本的性質、培養目的和所用培養基的種類，采用不同的接種方法。
對(dui)混(hun)有(you)多(duo)種(zhong)細(xi)菌(jun)，采(cai)用(yong)劃(hua)線(xian)分(fen)離(li)和(he)培(pei)養(yang)，使(shi)原(yuan)來(lai)混(hun)雜(za)在(zai)一(yi)起(qi)的(de)細(xi)菌(jun)沿(yan)劃(hua)線(xian)在(zai)瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)板(ban)表(biao)麵(mian)分(fen)離(li)，得(de)到(dao)分(fen)散(san)的(de)單(dan)個(ge)菌(jun)落(luo)，以(yi)獲(huo)得(de)純(chun)種(zhong)。平(ping)板(ban)劃(hua)線(xian)分(fen)離(li)法(fa)通(tong)常(chang)有(you)兩(liang)種(zhong)方(fang)法(fa)：
①分區劃線分離法：此法常用於含菌量較多的細菌的分離。先用接種環挑取標本塗布於瓊脂平板1區（占培養基總麵積的¼）並作數條劃線，再於2、3、4區依次劃線。每劃完一個區域，均將接種環燒灼滅菌1次，冷後再劃下一區域，每一區域的劃線均與上一區域的劃線交接1~3次。一個成功分區劃線的平板，培養後分別觀察1區形成菌苔，2區菌落連成線，3區和4區可分離到單個菌落。
②連續劃線分離法：此法常用於含菌量不多的標本或培養物中的細菌分離培養。方法是先將接種物在瓊脂平板上1/5處輕輕塗抹，然後再用接種環或拭子在平板表麵曲線連續劃線接種，直至劃滿瓊脂平板表麵。
2.瓊脂斜麵接種法
主要用於菌落的移種，以獲得純種進行鑒定和保存菌種等。用接種環（針）tiaoqudangejunluohuopeiyangwu，congpeiyangjixiemiandibuxiangshanghuayitiaozhixian，ranhouzaicongdibuyanzhixianxiangshangquzhelianxuhuaxian，zhizhixiemianjindingduanchuzhi。shenghuajiandingpeiyangjixiemianjiezhong，yongjiezhongzhentiaoqudaijiandingxijundejunluo，congxiemianzhongyangchuizhicirudibu，chouchuhouzaixiemianshangyouxiazhishangquzhehuaxianjiezhong。
3．穿刺接種法
此法多用於半固體培養基或雙糖鐵、明ming膠jiao等deng具ju有you高gao層ceng的de培pei養yang基ji接jie種zhong，半ban固gu體ti培pei養yang基ji的de穿chuan刺ci接jie種zhong可ke用yong於yu觀guan察cha細xi菌jun的de動dong力li。接jie種zhong時shi用yong接jie種zhong針zhen挑tiao取qu菌jun落luo，由you培pei養yang基ji中zhong央yang垂chui直zhi刺ci入ru至zhi距ju管guan底di0.4cm處，再沿穿刺線退出接種針。雙糖鐵等有高層及斜麵之分的培養基，穿刺高層部分，退出接種針後直接劃線接種斜麵部分。
用於各種液體培養基如肉湯、蛋白腖水、糖發酵管等的接種。用接種環挑取單個菌落，傾斜液體培養管，在液麵與管壁交界處研磨接種物（以試管直立後液體淹沒接種物為準）。此接種法應避免接種環與液體過多接觸，更不應在液體中混勻、攪拌，以免形成氣溶膠，造成實驗室汙染。
5．傾注平板法
本法主要用於飲水、飲料、牛乳等標本中的細菌計數。取純培養物的稀釋或原標本1ml至無菌培養皿內，再將已融化並冷卻至45~50℃左右的瓊脂培養基15~20ml傾注入該無菌培養皿內，混勻，待凝固後置37℃培養，長出菌落後進行菌落計數，以求出每毫升標本中所含菌數。先數6個方格（每格為1cm2）中菌落數，求出每格的平均菌落數，並算出平皿直徑，然後按下列公式計數，求出每毫升標本中的細菌數。
6．塗布接種法
本法多用於紙片擴散法藥敏試驗的細菌接種。將一定量或適量的菌液加到瓊脂培養基表麵，然後用滅菌的Lxingbolibanghuomianshiziyubutongdejiaodufanfutubu，shibeijiezhongyejunyunfenbuyuqiongzhibiaomian，ranhoutieshangyaominzhipian，huozhijiepeiyang，benfajingpeiyanghouxijunxingchengjuntai。
細菌的培養方法
根據不同的標本及不同的培養目的，可選用不同的培養方法。通常把細菌的培養方法分為需氧培養、二氧化碳培養、微需氧培養和厭氧培養四種。
是指需氧菌或兼性厭氧菌在有氧條件下的培養，將已接種好的平板、斜麵、液體培養基等在空氣中置35℃孵育箱內孵育18~24h，無特殊要求的細菌均可生長。少數生長緩慢的細菌需要培養3-7d甚至1個(ge)月(yue)才(cai)能(neng)生(sheng)長(chang)。為(wei)使(shi)孵(fu)育(yu)箱(xiang)內(nei)保(bao)持(chi)一(yi)定(ding)的(de)濕(shi)度(du)，可(ke)在(zai)其(qi)內(nei)放(fang)置(zhi)一(yi)杯(bei)水(shui)。對(dui)培(pei)養(yang)時(shi)間(jian)較(jiao)長(chang)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)，接(jie)種(zhong)後(hou)應(ying)將(jiang)試(shi)管(guan)口(kou)塞(sai)好(hao)棉(mian)塞(sai)或(huo)矽(gui)膠(jiao)塞(sai)後(hou)用(yong)石(shi)蠟(la)-凡士林封固，以防培養基幹裂。
某些細菌，在初次分離時，須在5%~10%二氧化碳環境中培養才能生長。常用的培養法如下。
①二氧化碳培養箱法：二氧化碳孵箱能自動調節二氧化碳的含量、溫度和濕度，培養物置於孵育箱內閣，孵育一定時間後可直接觀察生長結果。
②燭缸培養法：quyougaimokoubiaobenganghuoboliganzaoqi，jiangjiezhonghaodepeiyangjifangrugangnei，dianranlazhuhoufangzaigangneishaogaoyupeiyangwudeweizhishang，ganggaihuogangkoujuntuyifanshilin，jiagaimibi。yingangneilazhuranshaoyangzhujianjianshao，shufenzhonghoulazhuzixingximie，cishirongqineieryanghuatanhanliangyuezhan5%~10%。將缸置於35℃普通孵育箱內孵育。
③氣袋法：選xuan用yong無wu毒du透tou明ming的de塑su料liao袋dai，將jiang已yi接jie種zhong標biao本ben的de培pei養yang皿min放fang入ru袋dai內nei，盡jin量liang祛qu除chu袋dai內nei空kong氣qi後hou將jiang開kai口kou處chu折zhe疊die並bing用yong彈dan簧huang夾jia夾jia緊jin袋dai口kou。使shi袋dai呈cheng密mi閉bi狀zhuang態tai，執zhi斷duan袋dai內nei已yi置zhi的de二er氧yang化hua碳tan產chan氣qi管guan（安瓿）產生二氧化碳，數分鍾內就可達到需要的二氧化碳培養環境，置於35℃孵育箱內孵育。
④化學法：常用碳酸氫鈉-鹽酸法。按每升容積稱取碳酸氫鈉0.4g與濃鹽酸0.35ml比例，分別置容器內，連同容器置於玻璃缸內，蓋緊密封，傾斜缸位使鹽酸與碳酸氫鈉接觸而生成二氧化碳。於35℃孵育箱內孵育。
微需氧菌培養在大氣中及絕對無氧環境中均不能生長，在含有5%-6% 氧氣，5%-10%二氧化碳和85%氮氣的氣體環境中才可生長，將標本接種到培養基上，置於上述氣體環境中，35℃進行培養即微需氧培養法。
4．厭氧培養
厭氧菌對氧敏感，培養過程中需造成低氧化還原電勢的厭氧環境。厭氧培養常用的方法有：物理法、化學法、生物法。如厭氧罐培養法、氣袋法、厭氧手套箱法、需氧菌共生厭氧法等。
細菌在培養基上生長特性
標本或液體培養物劃線接種到固體培養基表麵後，單個細菌經分裂繁殖可形成一個肉眼可見的細菌集團，稱為菌落（colony）。
①菌落的形態特征：大小、形狀（露滴狀、圓形、菜花樣、不規則等）、突起或扁平、凹陷、邊緣（光滑、波形、鋸齒狀、卷發狀等）、顏色（紅色、灰白色、黑色、綠色、無色、黃色等）、表麵（光滑、粗糙等）、透明度（不透明、半透明、透明等）和粘度等。據細菌菌落表麵特征不同，可將菌落分為3型：
A.光滑型菌落（S型菌落）：菌落表麵光滑、濕潤、邊緣整齊，新分離的細菌大多呈光滑型菌落。
B.粗糙型菌落（R型菌落）：菌落表麵粗糙、幹燥、呈皺紋或顆粒狀，邊緣大多不整齊。R型菌落多為S型細菌變異失去菌體表麵多糖或蛋白質形成。R型細菌抗原不完整，毒力和抗吞噬能力都比S型細菌弱。但也有少數細菌新分離的毒力株就是R型，如炭疽孢杆菌、結核分枝菌等。
C.粘液型菌落（M型菌落）：菌落粘稠、有光澤、似水珠樣。多見於厚莢膜或豐富粘液層的細菌、結核杆菌等。
α溶血：又稱草綠色溶血，菌落周圍培養基出現1~2mm的草綠色環，為高鐵血紅蛋白所致；
β溶血：又稱完全溶血，菌落周圍形成一個完全清晰透明的溶血環，是細菌產生的溶血素使紅細胞完全溶解所致；
γ溶血：即不溶血，菌落周圍的培養基沒有變化，紅細胞沒有溶解或缺損。
③色素：有些細菌產生水溶性色素，使菌落和周圍的培養基出現綠色、金黃色、白色、橙色、檸檬色等顏色，產生的色素有水溶性或脂溶性。
④氣味：某些細菌在培養基中生長繁殖後可產生特殊氣味，如銅綠假單胞菌（生薑氣味）、變形杆菌（巧克力燒焦的臭味）、厭氧梭菌（腐敗的惡臭味）、白色假絲酵母菌（酵母味）和放線菌（泥土味）等。
細菌在液體培養基中有3種生長現象：大多數細菌在液體培養基生長繁殖後呈均勻混濁；少數鏈狀排列的細菌如鏈球菌、炭疽芽胞杆菌等則呈沉澱生長；枯草芽胞杆菌、結核分枝杆菌和銅綠假單胞菌等專性需氧菌一般呈表麵生長，常形成菌膜。
半(ban)固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)主(zhu)要(yao)用(yong)於(yu)細(xi)菌(jun)動(dong)力(li)試(shi)驗(yan)，有(you)鞭(bian)毛(mao)的(de)細(xi)菌(jun)除(chu)了(le)沿(yan)穿(chuan)刺(ci)線(xian)生(sheng)長(chang)外(wai)，在(zai)穿(chuan)刺(ci)線(xian)兩(liang)側(ce)也(ye)可(ke)見(jian)羽(yu)毛(mao)狀(zhuang)或(huo)雲(yun)霧(wu)狀(zhuang)混(hun)濁(zhuo)生(sheng)長(chang)。無(wu)鞭(bian)毛(mao)的(de)細(xi)菌(jun)隻(zhi)能(neng)沿(yan)穿(chuan)刺(ci)線(xian)呈(cheng)明(ming)顯(xian)的(de)線(xian)狀(zhuang)生(sheng)長(chang)，穿(chuan)刺(ci)線(xian)兩(liang)邊(bian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)仍(reng)然(ran)澄(cheng)清(qing)透(tou)明(ming)，為(wei)動(dong)力(li)試(shi)驗(yan)陰(yin)性(xing)。
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