在日常檢測中,大多數的細菌、放線菌、黴菌培養法均為需氧培養。培養基接種微生物後放於35 ℃~37 ℃或25℃恒溫培養箱(或水浴箱)中,培養18 h-24h或3d-5d,大多數菌能達到指數期,可以進行計數及鑒定。需氧培養法按培養基的狀態來分,可分為三類。
一、固體培養法
固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)法(fa)是(shi)指(zhi)將(jiang)微(wei)生(sheng)物(wu)接(jie)種(zhong)在(zai)固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)上(shang)生(sheng)長(chang)繁(fan)殖(zhi)的(de)方(fang)法(fa),固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)包(bao)括(kuo)瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)板(ban)和(he)瓊(qiong)脂(zhi)斜(xie)麵(mian)。瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)板(ban)用(yong)於(yu)菌(jun)落(luo)計(ji)數(shu)和(he)分(fen)離(li)菌(jun)落(luo),瓊(qiong)脂(zhi)斜(xie)麵(mian)用(yong)於(yu)微(wei)生(sheng)物(wu)形(xing)態(tai)觀(guan)察(cha)或(huo)保(bao)藏(zang),接(jie)種(zhong)後(hou)的(de)平(ping)板(ban)倒(dao)置(zhi)(防止冷凝水滴落到生長的菌體上),堆疊(一般不超過6個平皿)放於培養箱中,培養皿之間和培養皿距離箱壁至少要25 mm,baozhengkongqixunhuan,zheshi,duigegediandewenduyaojinxingyanzheng。weifangzhipeiyangjiguofenganzao,keyongsuliaodaisongsandebaoyixia,yekeyizaipeiyangxiangneifangyibeishuifangzhipeiyangjiganbie。xiemianshiguanfangyushiguanjiashang,ranhoufangzhiyupeiyangxiangzhongjinxingpeiyang。chuciliangzhongfangfashugutipeiyangfawai,haiyouyixiajizhong。
(一)插片培養法
(1)用高壓滅菌後冷卻到50℃左右的培養基製備平板,凝固後用接種環挑取菌懸液劃線接種。
(2)將滅過菌的蓋玻片以450斜插入固體培養基中,緊靠接種物,使菌體沿蓋玻片生長,置28 ℃~32 ℃培養箱培養3d-5 d。
(3)培養完畢後,取出蓋玻片放在載玻片上,直接用低倍鏡觀察放線菌的自然生長個體形態。也可在載玻片上滴一滴0.1%的美藍水溶液,再放上插片,用高倍鏡觀察孢子結構。
(二)載玻片培養法
(1)在培養皿底部鋪一張圓形濾紙,濾紙上放上一根“U"形載玻片擱架,其上放一塊幹淨的載玻片和兩片蓋玻片,蓋上皿蓋,外用紙包紮,高壓滅菌後,烘幹備用。
(2)將經過高壓滅菌冷卻到50 ℃左右的培養基,倒入另外的無菌培養皿中製成2mm厚的平板,凝固後用無菌刀切成1cm2的方塊,放置於載玻片上左右各一塊。
(3)瓊脂塊的四周用接種針接種上黴菌孢子,而後蓋上蓋玻片,壓緊瓊脂塊,在濾紙上加2 ml -3 ml。無菌水或20%無菌甘油,保濕培養,培養好後,可直接用低倍鏡觀察
(三)透析膜培養法
透(tou)析(xi)膜(mo)浸(jin)在(zai)試(shi)管(guan)中(zhong)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)後(hou),用(yong)無(wu)菌(jun)的(de)鑷(nie)子(zi)取(qu)出(chu)後(hou)平(ping)鋪(pu)在(zai)瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)板(ban)上(shang),在(zai)膜(mo)上(shang)用(yong)接(jie)種(zhong)工(gong)具(ju)點(dian)接(jie)上(shang)菌(jun)種(zhong),蓋(gai)好(hao)皿(min)蓋(gai)後(hou),進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。也(ye)可(ke)直(zhi)接(jie)把(ba)透(tou)析(xi)膜(mo)放(fang)在(zai)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)裏(li)浸(jin)泡(pao)後(hou),直(zhi)接(jie)鋪(pu)在(zai)平(ping)皿(min)中(zhong),滅(mie)菌(jun)後(hou)進(jin)行(xing)點(dian)種(zhong)微(wei)生(sheng)物(wu),再(zai)蓋(gai)上(shang)皿(min)蓋(gai)進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。
(四)其他
應用在釀造工業上的培養瓶培養,盤曲、簾子曲培養,厚層通風培養。
二、液體培養法
液體培養法是利用液體培養基對微生物進行培養的方法,可分為靜止培養法和深層培養法。
(一)靜止培養法
靜(jing)止(zhi)培(pei)養(yang)法(fa)是(shi)指(zhi)在(zai)接(jie)種(zhong)後(hou)培(pei)養(yang)液(ye)靜(jing)止(zhi)不(bu)動(dong)進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。一(yi)般(ban)包(bao)括(kuo)試(shi)管(guan)法(fa)和(he)三(san)角(jiao)瓶(ping)淺(qian)層(ceng)培(pei)養(yang)法(fa),培(pei)養(yang)時(shi)盛(sheng)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)螺(luo)口(kou)瓶(ping)或(huo)螺(luo)口(kou)試(shi)管(guan)的(de)蓋(gai)不(bu)要(yao)擰(ning)緊(jin),鬆(song)散(san)蓋(gai)上(shang)即(ji)可(ke),放(fang)於(yu)試(shi)管(guan)架(jia)上(shang),然(ran)後(hou)放(fang)置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)或(huo)水(shui)浴(yu)鍋(guo)中(zhong)進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。在(zai)靜(jing)置(zhi)狀(zhuang)態(tai)下(xia),三(san)角(jiao)瓶(ping)內(nei)的(de)通(tong)氣(qi)狀(zhuang)況(kuang)與(yu)其(qi)中(zhong)的(de)裝(zhuang)液(ye)量(liang)和(he)瓶(ping)口(kou)棉(mian)塞(sai)的(de)通(tong)氣(qi)程(cheng)度(du)對(dui)瓶(ping)內(nei)微(wei)生(sheng)物(wu)的(de)生(sheng)長(chang)速(su)度(du)和(he)生(sheng)長(chang)量(liang)有(you)很(hen)大(da)的(de)關(guan)係(xi)。一(yi)般(ban)情(qing)況(kuang)下(xia),接(jie)種(zhong)量(liang)越(yue)大(da),培(pei)養(yang)時(shi)間(jian)越(yue)長(chang),生(sheng)長(chang)量(liang)越(yue)高(gao)。剛(gang)接(jie)種(zhong)的(de)時(shi)候(hou),菌(jun)體(ti)需(xu)適(shi)應(ying)培(pei)養(yang)基(ji)環(huan)境(jing),故(gu)繁(fan)殖(zhi)較(jiao)慢(man),然(ran)後(hou)進(jin)入(ru)快(kuai)速(su)生(sheng)長(chang)期(qi),生(sheng)長(chang)速(su)度(du)呈(cheng)指(zhi)數(shu)增(zeng)長(chang),到(dao)一(yi)定(ding)數(shu)量(liang)後(hou),培(pei)養(yang)基(ji)的(de)營(ying)養(yang)成(cheng)分(fen)消(xiao)耗(hao)殆(dai)盡(jin),次(ci)生(sheng)產(chan)物(wu)增(zeng)多(duo),菌(jun)體(ti)生(sheng)長(chang)速(su)度(du)減(jian)緩(huan)。
(二)通氣深層培養法
1.振蕩(搖瓶)培養法
此法最早是荷蘭人A. J. Kluyver等在1933年使用,即將三角瓶內培養液用8層紗布包住瓶口,以取代一般的棉花塞,同時降低瓶內的裝液量,把它放置於搖床上有節奏的振蕩,以該法提高液體溶氧量的目的。
該法可以對微生物進行通氣深層培養,通過對細菌、酵母等單細胞微生物振蕩培養,可以得到均一的菌懸液,常用於菌種的選育及生化試驗和發酵試驗等。
振蕩培養的設備有恒溫搖床、搖瓶機等,培養瓶放在裏麵後,進行振蕩培養,瓶口用6層~8層的紗布包紮,瓶內液體不宜過多,防止濺到瓶塞上引起汙染。
2.發酵罐培養法
可進行較大液體量的通氣培養,有小型發酵罐和大型的發酵罐,小型的發酵罐一般為1L~100 L,大型的容量一般在1m3-500 m3,能夠提供培養微生物的營養和氧氣,並且有自動控製和記錄裝置。
三、半固體培養法
利用半固體培養基進行培養的方法,半固體培養基含有一定的瓊脂(0.02%-0.3% ),使(shi)培(pei)養(yang)基(ji)有(you)一(yi)定(ding)的(de)黏(nian)度(du),但(dan)沒(mei)有(you)完(wan)全(quan)固(gu)化(hua)。培(pei)養(yang)時(shi),盛(sheng)半(ban)固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)試(shi)管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)試(shi)管(guan)架(jia)上(shang),然(ran)後(hou)置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。一(yi)般(ban)用(yong)於(yu)生(sheng)化(hua)試(shi)驗(yan)。
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