（1）在肉膏蛋白腖斜麵試管上，用記號筆寫上將接種的菌名
、日期和接種者。

（2）點燃酒精燈或煤氣燈。

（3）將菌種試管和待接種的斜麵試管，用大拇指和食指


、中指、無名指握在左手中，並將中指夾在兩試管之間
，使斜麵向上，成水平狀態，。在火焰邊用右手鬆動試管塞，以利於接種時拔出。

（4）右手拿接種環通過火焰燒灼滅菌（參照實驗一），在火焰邊用右手的手掌邊緣和小指，小指和無名指分別夾持棉塞（或試管帽）

，將其取出，並迅速燒灼管口。

（5）將(jiang)滅(mie)菌(jun)的(de)接(jie)種(zhong)環(huan)伸(shen)入(ru)菌(jun)種(zhong)試(shi)管(guan)內(nei)，先(xian)將(jiang)環(huan)接(jie)觸(chu)試(shi)管(guan)內(nei)壁(bi)或(huo)未(wei)長(chang)菌(jun)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)
，達(da)到(dao)冷(leng)卻(que)的(de)目(mu)的(de)，然(ran)後(hou)再(zai)挑(tiao)取(qu)少(shao)許(xu)菌(jun)苔(tai)。將(jiang)接(jie)種(zhong)環(huan)退(tui)出(chu)菌(jun)種(zhong)試(shi)管(guan)，迅(xun)速(su)伸(shen)入(ru)待(dai)接(jie)種(zhong)的(de)斜(xie)麵(mian)試(shi)管(guan)
，用(yong)環(huan)在(zai)斜(xie)麵(mian)上(shang)自(zi)試(shi)管(guan)底(di)部(bu)向(xiang)上(shang)端(duan)輕(qing)輕(qing)地(di)劃(hua)直(zhi)線(xian)，勿(wu)將(jiang)培(pei)養(yang)基(ji)劃(hua)破(po)
，也(ye)不(bu)要(yao)使(shi)環(huan)接(jie)觸(chu)管(guan)壁(bi)或(huo)管(guan)口(kou)。

（6）接jie種zhong環huan退tui出chu斜xie麵mian試shi管guan，再zai用yong火huo焰yan燒shao管guan口kou

，並bing在zai火huo焰yan邊bian將jiang試shi管guan塞sai塞sai上shang。將jiang接jie種zhong環huan逐zhu漸jian接jie近jin火huo焰yan

，再zai燒shao灼zhuo。如ru果guo接jie種zhong環huan上shang沾zhan的de菌jun體ti較jiao多duo時shi，應ying先xian將jiang環huan在zai火huo焰yan邊bian烤kao幹gan
，然ran後hou燒shao灼zhuo，以yi免mian未wei燒shao死si的de菌jun種zhong飛fei濺jian出chu汙wu染ran環huan境jing，接jie種zhong病bing原yuan菌jun時shi更geng要yao注zhu意yi此ci點dian。

二
、液體培養基接種

向xiang肉rou膏gao蛋dan白bai腖dong液ye體ti培pei養yang基ji中zhong接jie種zhong少shao量liang菌jun體ti時shi，其qi操cao作zuo步bu驟zhou基ji本ben與yu斜xie麵mian接jie種zhong時shi相xiang同tong，不bu同tong之zhi處chu是shi挑tiao取qu菌jun體ti的de接jie種zhong環huan放fang入ru液ye體ti培pei養yang基ji後hou，應ying在zai液ye體ti表biao麵mian處chu的de管guan內nei壁bi上shang輕qing輕qing磨mo擦ca，使shi菌jun體ti從cong環huan上shang脫tuo落luo，混hun進jin液ye體ti培pei養yang基ji，塞sai好hao試shi管guan塞sai後hou
，搖yao動dong液ye體ti，使shi菌jun體ti在zai液ye體ti中zhong分fen布bu均jun勻yun，或huo用yong試shi管guan振zhen蕩dang器qi混hun勻yun。

向xiang液ye體ti培pei養yang基ji中zhong接jie種zhong量liang大da或huo要yao求qiu定ding量liang接jie種zhong時shi
，可ke將jiang無wu菌jun水shui或huo液ye體ti培pei養yang基ji注zhu入ru菌jun種zhong試shi管guan，用yong接jie種zhong環huan將jiang菌jun苔tai刮gua下xia
，再zai將jiang菌jun種zhong懸xuan液ye以yi無wu菌jun吸xi管guan定ding量liang吸xi出chu加jia入ru，或huo直zhi接jie倒dao入ru液ye體ti培pei養yang基ji。如ru果guo菌jun種zhong為wei液ye體ti培pei養yang物wu
，則ze可ke用yong無wu菌jun吸xi管guan定ding量liang吸xi出chu加jia入ru或huo直zhi接jie倒dao入ru液ye體ti培pei養yang基ji。整zheng個ge接jie種zhong過guo程cheng都dou要yao求qiu無wu菌jun操cao作zuo。

三、穿刺接種

用接種針挑取菌種（針必須挺直）
，自培養基的中心垂直地刺入半固體培養基中，直至接近管底，但不要穿透
，然後沿原穿刺線將針拔出，塞上試管塞
，燒灼接種針。

上述幾種接種法的無菌操作
，凡未敘述的均按實驗一操作。試驗者應反複練習無菌操作接種技術
，直至較熟練地掌握。

四、將已接種的斜麵、液體和半固體培養基放置28—30℃溫箱
，培養2—3天後取出觀察結果。