固定方法有物理固定和化學固定兩類，物理固定可采用空氣幹燥（血塗片）
、驟冷（在液氮中迅速冷凍）或微波固定等；化學固定有浸潤法（immersion method）和灌流法（perfusion method）。灌流法適用於動物實驗中對缺氧敏感的器官，如神經係統和胃腸等取材。

 

一、浸潤法

 

浸潤法是組織化學和免疫 組織化學常用的固定方法，一次要處理許多組織樣品時也多用此法。

 

預(yu)先(xian)需(xu)估(gu)計(ji)固(gu)定(ding)劑(ji)的(de)用(yong)量(liang)，並(bing)在(zai)取(qu)材(cai)前(qian)配(pei)好(hao)固(gu)定(ding)液(ye)，分(fen)裝(zhuang)於(yu)小(xiao)容(rong)器(qi)內(nei)
，在(zai)容(rong)器(qi)上(shang)標(biao)記(ji)組(zu)別(bie)和(he)取(qu)材(cai)時(shi)間(jian)。容(rong)器(qi)內(nei)放(fang)人(ren)記(ji)錄(lu)組(zu)織(zhi)類(lei)型(xing)的(de)紙(zhi)條(tiao)，以(yi)便(bian)包(bao)埋(mai)時(shi)辨(bian)認(ren)。固(gu)定(ding)液(ye)的(de)用(yong)量(liang)應(ying)是(shi)樣(yang)品(pin)的(de)40倍，以保證組織充分固定。固定時間可根據所選固定液和組織類型而定。

 

若進行酶組織化學染色
，應在4℃短時間固定
，固定時間長會導致酶活性減弱，甚至消失。

 

二
、灌流固定法

 

cifashijingxueguantujing
，jianggudingyeguanzhudaoyugudingdeqiguannei
，shishenghuodexibaozaiyuanweijishixunsuguding，quxiazuzhizhihouzaijinruxiangtongdegudingyeneijixuguding。

 

灌guan流liu固gu定ding時shi大da動dong物wu多duo采cai用yong輸shu液ye方fang式shi
，將jiang固gu定ding液ye從cong一yi側ce頸jing總zong動dong脈mai或huo股gu動dong脈mai輸shu入ru，從cong另ling一yi側ce切qie開kai靜jing脈mai放fang血xue，輸shu入ru固gu定ding液ye與yu放fang血xue同tong時shi進jin行xing。固gu定ding液ye的de輸shu人ren量liang因yin個ge體ti不bu同tong而er異yi
，即ji500―2000ml不等。

 

小動物多采用心髒主動脈灌流，如大鼠和小鼠，在吸人 深(shen)度(du)麻(ma)醉(zui)情(qing)況(kuang)下(xia)
，打(da)開(kai)胸(xiong)腔(qiang)，縱(zong)向(xiang)切(qie)開(kai)心(xin)包(bao)膜(mo)，並(bing)用(yong)紗(sha)線(xian)在(zai)動(dong)脈(mai)弓(gong)下(xia)打(da)一(yi)鬆(song)結(jie)，然(ran)後(hou)用(yong)靜(jing)脈(mai)輸(shu)液(ye)針(zhen)從(cong)左(zuo)心(xin)室(shi)向(xiang)主(zhu)動(dong)脈(mai)方(fang)向(xiang)刺(ci)人(ren)，針(zhen)尖(jian)刺(ci)人(ren)後(hou)
，隨(sui)即(ji)將(jiang)紗(sha)線(xian)紮(zha)緊(jin)固(gu)定(ding)，勿(wu)使(shi)其(qi)移(yi)動(dong)，再(zai)將(jiang)右(you)心(xin)耳(er)剪(jian)開(kai)放(fang)血(xue)。在(zai)灌(guan)注(zhu)固(gu)定(ding)液(ye)前(qian)，先(xian)用(yong)含(han)抗(kang)凝(ning)劑(ji)的(de)37℃生理鹽水灌流，衝洗血管內的血液，防止血液凝固阻塞血管。抗凝劑常用肝素，劑量為40mg/L衝洗液。肝髒顏色由鮮紅變為淺白色時，即可灌流固定液，灌注速度為5～10ml/min，應在30分鍾內結束灌注並取材，而後將組織浸入相同的固定液中1～3小時。灌流固定對組織結構和酶活性保存較好。