無血清培養基的基本配方:基本成分為基礎培養基及添加組分兩大部分。 用於生物製藥和疫苗生產的細胞在體外培養時,多數呈貼壁生長或兼性貼壁生長;而當其在無血清、無蛋白培養基中生長時,由於缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白,細胞往往以懸浮形式生長。
添加組分
1. 促貼壁物質:許多細胞必須貼壁才能生長,這種情況下無血清培養基中一定要添加促貼壁和擴展因子,一般為細胞外基質,如纖連蛋白、cengzhanliandanbaideng。tamenhaishizhongyaodefenliesuyijiweichizhengchangxibaogongnengdefenhuayinzi,duixuduoxibaodefanzhihefenhua,qizhezhongyaozuoyong。xianliandanbaizhuyaocujinlaizizhongpeicengxibaodetiebiyufenhua,zhexiexibaobaokuochengxianweixibao、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質細胞、CHO細胞、成肌細胞等。
2. 促生長因子及激素:針對不同細胞添加不同的生長因子。激素也是刺激細胞生長、維持細胞功能的重要物質,有些激素是許多細胞必不可少的,如胰島素。
3. 酶抑製劑:peiyangtiebishengchangdexibao,xuyaoyongyimeixiaohuachuandai,zaiwuxueqingpeiyangjizhongbibukeshaoxuhanmeiyizhiji,yizhongzhimeidexiaohuazuoyong,dadaobaohuxibaodemude。zuichangyongdeshidadouyimei;抑製劑。
4. 結合蛋白和轉運蛋白:常chang見jian如ru轉zhuan鐵tie蛋dan白bai和he牛niu血xue清qing白bai蛋dan白bai。牛niu血xue清qing白bai蛋dan白bai的de添tian加jia比bi較jiao大da,可ke增zeng加jia培pei養yang基ji的de粘zhan度du,保bao護hu細xi胞bao免mian受shou機ji械xie損sun傷shang。許xu多duo旋xuan轉zhuan式shi培pei養yang的de無wu血xue清qing培pei養yang基ji都dou含han有you牛niu血xue清qing白bai蛋dan白bai。
5. 微量元素:硒是最常見的。
使用方法
目(mu)前(qian),血(xue)清(qing)仍(reng)是(shi)動(dong)物(wu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)中(zhong)最(zui)基(ji)本(ben)的(de)的(de)添(tian)加(jia)物(wu),尤(you)其(qi)是(shi)在(zai)原(yuan)代(dai)培(pei)養(yang)或(huo)者(zhe)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)況(kuang)不(bu)良(liang)時(shi),常(chang)常(chang)會(hui)先(xian)使(shi)用(yong)有(you)血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)進(jin)行(xing)培(pei)養(yang),待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)旺(wang)盛(sheng)以(yi)後(hou),再(zai)換(huan)成(cheng)無(wu)血(xue)清(qing)培(pei)養(yang)液(ye)。細(xi)胞(bao)轉(zhuan)入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)培(pei)養(yang)基(ji)培(pei)養(yang)要(yao)有(you)一(yi)個(ge)適(shi)應(ying)過(guo)程(cheng),一(yi)般(ban)要(yao)逐(zhu)步(bu)降(jiang)低(di)血(xue)清(qing)濃(nong)度(du),從(cong)10%減少到5%,3%,1%,直(zhi)至(zhi)無(wu)血(xue)清(qing)培(pei)養(yang)。在(zai)降(jiang)低(di)過(guo)程(cheng)中(zhong)要(yao)注(zhu)意(yi)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)是(shi)否(fou)發(fa)生(sheng)變(bian)化(hua),是(shi)否(fou)有(you)部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)死(si)亡(wang),存(cun)活(huo)細(xi)胞(bao)是(shi)否(fou)還(hai)保(bao)持(chi)原(yuan)有(you)的(de)功(gong)能(neng)和(he)生(sheng)物(wu)學(xue)特(te)性(xing)等(deng)。在(zai)實(shi)驗(yan)後(hou)這(zhe)些(xie)細(xi)胞(bao)一(yi)般(ban)不(bu)再(zai)繼(ji)續(xu)保(bao)留(liu),很(hen)少(shao)有(you)細(xi)胞(bao)能(neng)夠(gou)長(chang)期(qi)培(pei)養(yang)於(yu)無(wu)血(xue)清(qing)培(pei)養(yang)基(ji)而(er)不(bu)發(fa)生(sheng)改(gai)變(bian)的(de)。細(xi)胞(bao)轉(zhuan)入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)培(pei)養(yang)之(zhi)前(qian),要(yao)留(liu)有(you)種(zhong)子(zi)細(xi)胞(bao),種(zhong)子(zi)細(xi)胞(bao)按(an)常(chang)規(gui)培(pei)養(yang)於(yu)含(han)血(xue)清(qing)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong),以(yi)保(bao)證(zheng)細(xi)胞(bao)的(de)特(te)性(xing)不(bu)發(fa)生(sheng)變(bian)化(hua)。
為了使細胞適應無血清培養,關鍵的是使所培養細胞:
1. 處於對數生長中期
2. >90% 活細胞率
3. 適應時以較高的起始細胞接種
細胞適應無血清培養基的方法
1. 直接適應--細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基(SFM)中。
2. 連續適應--分好幾步把細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基(SFM)中,與直接適應相比較,連續適應趨向對於細胞更加溫和一些。
特別需要強調的是:配pei製zhi無wu血xue清qing培pei養yang液ye必bi須xu使shi用yong高gao質zhi量liang的de水shui,如ru石shi英ying玻bo璃li蒸zheng餾liu器qi經jing三san次ci蒸zheng餾liu或huo超chao純chun水shui淨jing化hua裝zhuang置zhi製zhi備bei的de水shui。因yin為wei無wu血xue清qing培pei養yang基ji缺que乏fa了le血xue清qing中zhong天tian然ran成cheng分fen中zhong和he毒du素su、保護細胞的大分子,既便水中的有毒物質含量甚微,也可能對細胞產生致死性損害。這是無血清培養能否成功的關鍵因素之一。
無血清培養基的優點
1. 可避免血清批次間的質量變動,提高細胞培養和實驗結果的重複性。
2. 避免血清對細胞的毒性作用和血清源性汙染。
3. 避免血清組分對實驗研究的影響。
4. 有利於體外培養細胞的分化。
5. 可提高產品的表達水平並使細胞產品易於純化。
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