PCR實驗室核酸檢測常見六大問題
發布日期：2022-06-10
核心提示：檢驗科人員是核酸檢測工作的主力軍，我們不但要保證檢測結果的有效性，還時刻麵臨著被感染的風險。本文為大家講解《PCR實驗室新冠核酸檢測操作注意事項》，重點從新冠病毒生理特性、熒光PCR原理、PCR實驗室籌備規範、樣本檢測環節操作、實驗室數據分析、常見問題解析等幾個方麵討論學習，一起來看看吧~
目前所見傳染源主要是新型冠狀病毒感染的患者。無症狀感染者也可能成為傳染源。jinghuxidaofeimohemiqiejiechuchuanboshizhuyaodechuanbotujing。zaixiangduifengbidehuanjingzhongchangshijianbaoluyugaonongduqirongjiaoqingkuangxiacunzaijingqirongjiaochuanbodekeneng。youyuzaifenbianjiniaozhongkefenlidaoxinxingguanzhuangbingdu，yingzhuyifenbianjiniaoduihuanjingwuranzaochengqirongjiaohuojiechuchuanbo。
重複進行“變性 - 退火 - 延伸” 三個過程，模板DNA的量就會呈指數倍增加，理論上講經過 n 個循環之後，模板量就會達到2的n次方。答：如果是個別單一通道翹尾，不管是FAM還是VICtongdao，shouxiananzhaoyaoqiufuzha，fuzhajianyizhongxincaiyang，ruguobufangbianzhongxincaiyangjianyiduiyuanyouyangbenjinxingzhongxintiquhesuanyanzheng，ruguofuzhayinxingpanduyinxing，ruguofuzhahaishitongyitongdaoqiaowei，jiuyaoduijieguozaixishenhe，yishiyaopaichushiyanshiwuran，ershiyaoduibingrenxinxilejieqingchu，conglinchuangzhengzhuangjijiechushipaizha，ruguomeifaqueren，jianyibixuzhongxincaiyangfuzha，ruyoubiyaokeyicaiyonglingyijiashijilaiyanzheng。ruguochuxiandaliangderuoyangxingkuozengqiaowei，shouyaoyuanyinshikaolvshiyanshiwuran，keyitongguozuohuanjingyangbenheyinxingduizhaozuoyanzhengpaichu。②N基因和1ab基因是新冠病毒的特有基因嗎，靈敏度哪個更高？是否會和其他冠狀病毒片段重疊？答：N基因跟1ab都是特異的，不會跟其他呼吸道病原體交叉反應。設計時候，兩個基因的序列不一樣，導致靈敏度不一樣，N基因的靈敏度比1ab靈敏度高。答：新冠病毒由於是RNA病毒，容易降解，另外檢測結果也和取樣，核酸提取以及樣本本身的核酸濃度有關，需要逐一分析，同時可以結合臨床症狀判讀。
④采用生理鹽水做陰性對照，內標也會增長，怎麼解釋？答：因(yin)為(wei)試(shi)劑(ji)采(cai)用(yong)的(de)是(shi)內(nei)源(yuan)性(xing)內(nei)標(biao)，內(nei)源(yuan)性(xing)內(nei)標(biao)是(shi)用(yong)人(ren)源(yuan)基(ji)因(yin)標(biao)記(ji)，此(ci)基(ji)因(yin)存(cun)在(zai)於(yu)人(ren)的(de)表(biao)皮(pi)細(xi)胞(bao)內(nei)，操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)就(jiu)可(ke)能(neng)會(hui)出(chu)現(xian)人(ren)源(yuan)性(xing)的(de)汙(wu)染(ran)，另(ling)外(wai)環(huan)境(jing)汙(wu)染(ran)也(ye)有(you)可(ke)能(neng)導(dao)致(zhi)內(nei)標(biao)增(zeng)長(chang)，這(zhe)也(ye)是(shi)前(qian)麵(mian)提(ti)到(dao)的(de)建(jian)議(yi)做(zuo)環(huan)境(jing)樣(yang)本(ben)質(zhi)控(kong)。答：如(ru)果(guo)新(xin)冠(guan)樣(yang)本(ben)內(nei)標(biao)不(bu)出(chu)，該(gai)樣(yang)本(ben)必(bi)須(xu)複(fu)查(zha)，可(ke)重(zhong)新(xin)混(hun)勻(yun)該(gai)樣(yang)本(ben)提(ti)取(qu)核(he)酸(suan)，如(ru)果(guo)重(zhong)新(xin)提(ti)取(qu)該(gai)樣(yang)本(ben)內(nei)標(biao)還(hai)是(shi)不(bu)出(chu)，在(zai)排(pai)除(chu)提(ti)取(qu)問(wen)題(ti)的(de)情(qing)況(kuang)下(xia)，說(shuo)明(ming)采(cai)樣(yang)不(bu)合(he)格(ge)，要(yao)通(tong)知(zhi)臨(lin)床(chuang)重(zhong)新(xin)采(cai)樣(yang)複(fu)查(zha)。
⑥采集環境樣本檢測新冠狀病毒，為啥大部分樣本內標不出，偶爾個別樣本檢測出內標？答：因為新冠試劑檢測的是人內源性內標，環境樣本一般不含有人源細胞，所以檢測不出內標；偶爾檢出內標，可能該環境樣本上有人源性細胞粘附，故而檢出內標。
編輯：songjiajie2010
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