1.有機物中的胺根在強熱和CuSO4，濃H2SO4作用下，硝化生成（NH4）2SO4
反應式為
2NH2 H2S04 2H＝（NH4）2S04（其中CuSO4做催化劑）
2.在凱氏定氮器中與堿作用，通過蒸餾釋放出NH3，收集於H3BO3溶液中
反應式為:
（NH4）2SO4 2NaOH＝2NH3 2H2O Na2SO4
2NH3 4H3BO3＝（NH4）2B4O7 5H2O
3.用已知濃度的H2SO4（或HCI）標準溶液滴定，根據HCI消耗的量計算出氮的含量

，然後乘以相應的換算因子，既得蛋白質的含量點焊機
反應式為：
（NH4）2B4O7 H2SO4 5H2O＝（NH4）2SO4 4H3BO3（NH4）2B4O7 2HCl 5H2O＝2NH4Cl 4H3BO3

凱氏定氮儀操作步驟：（一）消化1、準備6個凱氏燒瓶，標號。1
、2、3號燒瓶中分別加入適當濃度的蛋白溶液1.0mL，樣品要加到燒瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶頸上。再依次加入硫酸鉀-硫酸銅接觸劑0.3g
，濃硫酸2.0mL，30%過氧化氫1.0mL。4、5
、6號燒瓶作為空白對照，用以測定試劑中可能含有的微量含氮物質
，對樣品測定進行校正。4、5、6號燒瓶中加入蒸餾水1.0mL代替樣液
，其餘所加試劑與1
、2、3號燒瓶相同。2
、將jiang加jia好hao試shi劑ji的de各ge燒shao瓶ping放fang置zhi消xiao化hua架jia上shang，接jie好hao抽chou氣qi裝zhuang置zhi。先xian用yong微wei火huo加jia熱re煮zhu沸fei，此ci時shi燒shao瓶ping內nei物wu質zhi炭tan化hua變bian黑hei，並bing產chan生sheng大da量liang泡pao沫mo
，務wu必bi注zhu意yi防fang止zhi氣qi泡pao衝chong出chu管guan口kou。待dai泡pao沫mo消xiao失shi停ting止zhi產chan生sheng後hou，加jia大da火huo力li，保bao持chi瓶ping內nei液ye體ti微wei沸fei，至zhi溶rong液ye澄cheng清qing後hou，再zai繼ji續xu加jia熱re使shi消xiao化hua液ye微wei沸fei15min。在消化過程中要隨時轉動燒瓶，以使內壁粘著物質均能流入底部
，以保證樣品完全消化。消化時放出的氣體內含SO2，juyouqiangliecijixing，yincizishizizhongyingdakaichoushuibengjiangqitichouruzilaishuipaichu。zhenggexiaohuaguochengjunyingzaitongfengchuzhongjinxing。xiaohuawanquanhou，guanbihuoyan，shishaopinglengquezhishiwen。（二）蒸餾和吸收蒸餾和吸收是在微量凱氏定氮儀內進行的。

凱氏定氮蒸餾裝置種類甚多，大體上都由蒸氣發生、氨的蒸餾和氨的吸收三部分組成。

1
、儀器的洗滌儀器安裝前，各部件需經一般方法洗滌幹淨，所用橡皮管、塞須浸在10%NaOH溶液中，煮約10min
，水洗
、水煮10min
，zaishuixishuci
，ranhouanzhuangbinggudingzaiyizhitiejiataishang。yiqishiyongqian，weiliangquanbuguandaodouxujingshuizhengqixidi
，yichuquguandaoneikenengcanliudean，zhengzaishiyongdeyiqi，meiciceyangqian
，zhengqixidi5minjike。jiaochangshijianweishiyongdeyiqi，zhongfuzhengqixidi，budeshaoyusanci，bingjianzhayiqishifouzhengchang。zaixijianzhagegelianjiechu，baozhengbulouqi。shouxianzaizhengqifashengqizhongjiayue2/3體積蒸餾水，加入數滴硫酸使其保持酸性，以避免水中的氨被蒸出而影響結果，並放入少許沸石（或毛細管等）
，以防爆沸。沿小玻杯壁加入蒸餾水約20mLrangshuijingchaguanliurufanyingshi，danbobeineideshuibuyaofangguang，saishangbangzhuangbosai
，baochishuifeng，fangzhilouqi。zhengqifashenghou，lijiguanbifeiyepaifangguanshangdekaiguan，shizhengqizhinengjinrufanyingshi，daozhifanyingshineideshuixunsufeiteng，zhengchuzhengqiyoufanyingshishangduankoutongguodingdanqiujinrulengningguanlengque
，zailengningguanxiaduanfangzhiyigezhuixingpingjieshoulengningshui。congdingdanqiufatangkaishijishi
，lianxuzhengzhu5min
，然(ran)後(hou)移(yi)開(kai)煤(mei)氣(qi)燈(deng)。衝(chong)洗(xi)完(wan)畢(bi)，夾(jia)緊(jin)蒸(zheng)氣(qi)發(fa)生(sheng)器(qi)與(yu)收(shou)集(ji)器(qi)之(zhi)間(jian)的(de)連(lian)接(jie)橡(xiang)膠(jiao)管(guan)，由(you)於(yu)氣(qi)體(ti)冷(leng)卻(que)壓(ya)力(li)降(jiang)低(di)，反(fan)應(ying)室(shi)內(nei)廢(fei)液(ye)自(zi)動(dong)抽(chou)到(dao)反(fan)應(ying)室(shi)外(wai)殼(ke)中(zhong)，打(da)開(kai)廢(fei)液(ye)排(pai)出(chu)口(kou)夾(jia)子(zi)放(fang)出(chu)廢(fei)液(ye)。如(ru)此(ci)清(qing)洗(xi)2～3次，再在冷凝管下換放一個盛有硼酸-指示劑混合液的錐形瓶使冷凝管下口完全浸沒在溶液中
，蒸餾1～2min，觀察錐形瓶內的溶液是否變色。如不變色，表示蒸餾裝置內部已洗幹淨。移去錐形瓶
，再蒸餾1～2min
，用蒸餾水衝洗冷凝器下口，關閉煤氣燈

，儀器即可供測樣品使用。

2、wujidanbiaozhunyangpindezhengliuxishouyouyudingdancaozuofansuo，weileshuxizhengliuhedidingdecaozuojishu，chuxuezheyixianyongwujidanbiaozhunyangpinjinxingfanfulianxi
，zaijinxingyoujidanweizhiyangpindeceding。changyongsizhinongdudebiaozhunliusuananceshisanci。qujiejingde100mL錐形瓶五隻

，依次加入2%硼酸溶液20mL，次甲基藍-甲基紅混合指示劑（呈紫紅色）3～4滴，蓋好瓶口待用。取其中一隻錐形瓶承接在冷凝管下端，並使冷凝管的出口浸沒在溶液中。注意：在此操作之前必須先打開收集器活塞，以免錐形瓶內液體倒吸。準確吸取2mL硫酸銨標準液加到玻杯中
，小心提起棒狀玻塞使硫酸銨溶液慢慢流入蒸餾瓶中，用少量蒸餾水衝洗小玻杯3次，一並放人蒸餾瓶中。然後用量筒向小玻杯中加入10 mL 30%NaOH溶液，使堿液慢慢流入蒸餾瓶中，在堿液尚未完全流入時，將棒狀玻塞蓋緊。向小玻杯中加約5mL蒸zheng餾liu水shui，再zai慢man慢man打da開kai玻bo塞sai
，使shi一yi半ban水shui流liu入ru蒸zheng餾liu瓶ping，一yi半ban留liu在zai小xiao玻bo杯bei中zhong作zuo水shui封feng。關guan閉bi收shou集ji器qi活huo塞sai，加jia熱re蒸zheng氣qi發fa生sheng器qi
，進jin行xing蒸zheng餾liu。錐zhui形xing瓶ping中zhong的de硼peng酸suan-指示劑混合液由於吸收了氨，由紫紅色變成綠色。自變色時起，再蒸餾3～5min，移動錐形瓶使瓶內液麵離開冷凝管下口約lcm，並用少量蒸餾水衝洗冷凝管下口，再繼續蒸餾1min，移yi開kai錐zhui形xing瓶ping
，蓋gai好hao
，準zhun備bei滴di定ding。在zai一yi次ci蒸zheng餾liu完wan畢bi後hou，移yi去qu煤mei氣qi燈deng，夾jia緊jin蒸zheng氣qi發fa生sheng器qi與yu收shou集ji器qi間jian的de橡xiang膠jiao管guan，排pai除chu反fan應ying完wan畢bi的de廢fei液ye，用yong水shui衝chong洗xi小xiao玻bo杯bei幾ji次ci，並bing將jiang廢fei液ye排pai除chu。如ru此ci反fan複fu衝chong洗xi幹gan淨jing後hou，即ji可ke進jin行xing下xia一yi個ge樣yang品pin的de蒸zheng餾liu。按an以yi上shang方fang法fa用yong標biao準zhun硫liu酸suan銨an再zai做zuo兩liang次ci。另ling取qu2mL蒸餾水代替標準硫酸銨進行空白測定二次。將各次蒸餾的錐形瓶一起滴定。

3
、未知樣品及空白的蒸餾吸收將消化好的蛋白樣品三支，空白對照液三支，依次作蒸餾吸收。加5mL熱的蒸餾水至消化好的樣品或空白對照液中，通過小玻杯加到反應室中，再用熱蒸餾水洗滌小玻杯3次
，每次用水量約3mL，xidiyeyibingdaorufanyingshinei。qiyucaozuoanbiaozhunliusuanandezhengliujinxing。youyuxiaohuayeneiliusuanjianongdugaoerchengzhanchouzhuang，buyicongkaishishaopingneidaochu，bixujiarurezhengliushui5 mL稀(xi)釋(shi)之(zhi)，如(ru)果(guo)有(you)結(jie)晶(jing)析(xi)出(chu)，必(bi)須(xu)微(wei)熱(re)溶(rong)解(jie)，趁(chen)熱(re)加(jia)入(ru)玻(bo)杯(bei)，使(shi)其(qi)流(liu)入(ru)反(fan)應(ying)室(shi)。此(ci)外(wai)，還(hai)應(ying)當(dang)注(zhu)意(yi)趁(chen)儀(yi)器(qi)洗(xi)滌(di)尚(shang)未(wei)完(wan)全(quan)冷(leng)卻(que)時(shi)立(li)即(ji)加(jia)入(ru)樣(yang)品(pin)或(huo)空(kong)白(bai)對(dui)照(zhao)液(ye)，否(fou)則(ze)消(xiao)化(hua)液(ye)通(tong)過(guo)冷(leng)卻(que)的(de)管(guan)道(dao)容(rong)易(yi)析(xi)出(chu)結(jie)晶(jing)
，造(zao)成(cheng)堵(du)塞(sai)。（三）凱氏定氮儀滴定樣品和空白蒸餾完畢後，一起進行滴定。打開接受瓶蓋，用酸式微量滴定管以0.0100mol/Ldebiaozhunyansuanrongyejinxingdiding。daidizhipingneirongyechenganhuiseshi
，yongzhengliushuijiangzhuixingpingneibisizhoulinxiyici。ruozhenyaohoufuxianlvse，yingzaixiaoxindirubiaozhunyansuanrongyebandi，zhenyaoguanchapingneirongyeyansebianhua
，anhuisezaiyierfenzhongneibubian

，dangshiweidaodadidingzhongdian。ruochengfenhongse，biaomingyichaoyuedidingzhongdian，kezaiyididinghaoyongdebiaozhunyansuanrongyeyongliangzhongjianqu0.02mL，meizuyangpindedingdanzhongdianyansebixuwanquanyizhi。kongbaiduizhaoyejieshoupingneiderongyeyansebubianhuolveyoubianhuashangweichuxianlvse，keyibudiding。jilumeicididinghaoyongbiaozhunyansuanrongyehaoshengshu，gongjisuanyong。