菌(jun)種(zhong)是(shi)國(guo)家(jia)重(zhong)要(yao)的(de)生(sheng)物(wu)資(zi)源(yuan)，鑒(jian)於(yu)其(qi)自(zi)身(shen)的(de)遺(yi)傳(chuan)性(xing)和(he)變(bian)異(yi)性(xing)，在(zai)菌(jun)種(zhong)保(bao)藏(zang)過(guo)程(cheng)中(zhong)，如(ru)何(he)降(jiang)低(di)菌(jun)種(zhong)的(de)衰(shuai)亡(wang)速(su)度(du)，防(fang)止(zhi)雜(za)菌(jun)汙(wu)染(ran)
，保(bao)持(chi)菌(jun)種(zhong)遺(yi)傳(chuan)性(xing)狀(zhuang)不(bu)變(bian)異(yi)，使(shi)優(you)良(liang)高(gao)產(chan)菌(jun)株(zhu)長(chang)期(qi)在(zai)生(sheng)產(chan)中(zhong)應(ying)用(yong)，成(cheng)為(wei)食(shi)用(yong)菌(jun)領(ling)域(yu)一(yi)項(xiang)重(zhong)要(yao)的(de)課(ke)題(ti)。為(wei)適(shi)應(ying)群(qun)眾(zhong)性(xing)生(sheng)產(chan)的(de)需(xu)要(yao)

，為(wei)適(shi)應(ying)群(qun)眾(zhong)性(xing)生(sheng)產(chan)的(de)需(xu)要(yao)
，本(ben)文(wen)介(jie)紹(shao)了(le)幾(ji)種(zhong)簡(jian)單(dan)易(yi)行(xing)、實用效果好的菌種保藏方法。

一、菌種保藏基本原理

    通過低溫

、幹燥、缺氧和饑餓等手段來達到最大限度降低菌絲體的生理代謝。首先要挑選優良純菌種，包括菌絲體和它們的孢子

；其次
，根據其生理、生化特點，人為創造低溫、幹gan燥zao或huo缺que氧yang等deng條tiao件jian
，抑yi製zhi微wei生sheng物wu的de代dai謝xie作zuo用yong
，使shi其qi生sheng命ming活huo動dong降jiang低di到dao極ji低di的de程cheng度du或huo處chu於yu休xiu眠mian狀zhuang態tai
，從cong而er延yan長chang菌jun種zhong生sheng命ming以yi及ji使shi菌jun種zhong保bao持chi原yuan有you的de性xing狀zhuang，防fang止zhi變bian異yi。

二、 菌種保藏的方法

試管斜麵菌種係列保存方法

    1
、低溫定期移植保藏法

    將需要保藏的菌種接種在適宜的斜麵培養基上，適溫培養
，當菌絲健壯地長滿斜麵時取出
，放在3~5℃低溫幹燥處或4℃冰箱中保藏
，每隔3~6個月移植轉管1次ci

，具ju體ti應ying根gen據ju菌jun種zhong特te性xing決jue定ding。保bao藏zang時shi要yao注zhu意yi環huan境jing濕shi度du不bu能neng太tai高gao，以yi防fang黴mei菌jun通tong過guo棉mian塞sai進jin入ru管guan內nei。因yin此ci，若ruo用yong棉mian塞sai

，可ke用yong幹gan淨jing的de塑su料liao薄bo膜mo或huo牛niu皮pi紙zhi包bao紮zha棉mian塞sai，也ye可ke用yong無wu菌jun的de白bai膠jiao塞sai，並bing用yong石shi蠟la塗tu封feng，即ji可ke減jian少shao汙wu染ran的de機ji會hui，也ye可ke防fang止zhi培pei養yang基ji幹gan燥zao。除chu草cao菇gu外wai，大da多duo食shi用yong菌jun菌jun種zhong都dou能neng采cai用yong此ci法fa保bao藏zang。

    2

、液體石蠟保藏法

    取化學純液體石蠟裝於三角瓶中高壓滅菌後
，放入40℃恒溫箱中，蒸發其中水分，至石蠟油完全透明為止。將處理好的石蠟油移接在空白斜麵上，28～30℃下培養2～3d，證明無雜菌生長方可使用。然後將母種接在斜麵培養基上，當菌絲在斜麵上生長豐滿後，將液體石蠟注在斜麵上，注入量以高出斜麵1cmweiyi，shijunzhongyukongqigejue
，jiangdiqixinchendaixienengli。guankouyongmieguojundebaijiaosaisaijin
，bingyongshilatufeng
，zhilifangzaishineiganzaochuhuobingxiangneibaozang。yibankebaocun1年(nian)以(yi)上(shang)，在(zai)低(di)溫(wen)下(xia)保(bao)藏(zang)時(shi)間(jian)還(hai)可(ke)延(yan)長(chang)。使(shi)用(yong)時(shi)從(cong)斜(xie)麵(mian)上(shang)挑(tiao)取(qu)菌(jun)絲(si)少(shao)許(xu)
，移(yi)接(jie)到(dao)新(xin)鮮(xian)斜(xie)麵(mian)培(pei)養(yang)基(ji)上(shang)，經(jing)培(pei)養(yang)即(ji)可(ke)。由(you)於(yu)菌(jun)絲(si)體(ti)沾(zhan)有(you)液(ye)體(ti)石(shi)蠟(la)而(er)影(ying)響(xiang)其(qi)生(sheng)長(chang)
，需(xu)再(zai)經(jing)1次移接才能恢複正常生長。

    3、白膠塞封口保存法

    選擇與試管口徑相符的白膠塞，用0.2%煤酚皂溶液洗滌
，浸泡在酒精內待用。當試管斜麵長滿菌絲後，在無菌條件下拔去棉塞，取浸泡的白膠塞1個
，通過火焰迅速塞入試管口內
，並用石蠟熔封。此法能達到與石蠟油封存相似的效果。用該法保存菌種可存活1～3年
，但以每年移植1次為好。

   4、蒸餾水保藏法

    將8成熟試管菌種放在接種箱內，注入蒸餾水
，將培養基斜麵全部淹沒至管口2cm。管口用白膠塞塞緊，並用石蠟塗封
，常溫下置於陰涼處立放，可以保藏1年左右。

非斜麵固體菌種係列保存法

    1

、麥麩保藏法

    將麥麩和水按0.80∶1充(chong)分(fen)拌(ban)勻(yun)後(hou)，裝(zhuang)入(ru)試(shi)管(guan)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)，經(jing)無(wu)菌(jun)檢(jian)查(zha)合(he)格(ge)後(hou)接(jie)種(zhong)
，適(shi)溫(wen)下(xia)培(pei)養(yang)至(zhi)菌(jun)絲(si)體(ti)發(fa)育(yu)好(hao)後(hou)
，將(jiang)試(shi)管(guan)放(fang)入(ru)真(zhen)空(kong)幹(gan)燥(zao)器(qi)內(nei)，用(yong)真(zhen)空(kong)泵(beng)將(jiang)麥(mai)麩(fu)培(pei)養(yang)基(ji)內(nei)水(shui)分(fen)抽(chou)幹(gan)，然(ran)後(hou)移(yi)入(ru)盛(sheng)有(you)矽(gui)膠(jiao)的(de)幹(gan)燥(zao)器(qi)內(nei)，用(yong)凡(fan)士(shi)林(lin)密(mi)封(feng)在(zai)常(chang)溫(wen)下(xia)保(bao)存(cun)，可(ke)保(bao)藏(zang)3～5年。

    2、麥粒保藏法

    取優質小麥
，淘洗後浸入20℃水中5h，撈出稍晾幹
，裝入試管，占管深1/3
，高壓滅菌後趁熱搖散，冷卻後接入菌絲體
，適溫培養至菌絲長滿基質後用石蠟封棉塞
，置於冰箱或20℃以下幹燥處，可保藏1～2年。

    3、木屑保藏法

    將闊葉樹木屑78％、麥麩20％、蔗糖1％、石膏粉1％，混合後加水拌勻
，裝入試管滅菌後
，接入斜麵菌種，在適溫下培養
，待菌絲長至試管2/3時用石蠟封棉塞，置低溫或常溫下保藏，一般可保藏1~ 2年。

    4、稻草粉保存草菇菌種

    草菇斜麵菌種在2～4℃下保存2d便失去生活力，室溫下保存又因斜麵培養基失水太快影響菌種存活。用稻草粉保存草菇菌種有其獨特的優越性。其配方為稻草粉75%、麥麩22%、石膏粉1%、碳酸鈣1%、蔗糖1%、適量的水拌勻調濕。裝入試管高壓滅菌後按常規接種培養，當菌絲長到試管2/3時
，管口棉塞用石蠟熔封。常溫下保存至次年，不影響其活力和種性。

液體係列菌種保存法

    1、生理鹽水保藏法

    將待保藏的菌種接入馬鈴薯培養液中，在250mL三角形瓶中裝60mL培養液，振蕩培養或每天搖動5～10次，培養5～7d
，然後將形成的菌絲球用無菌吸管吸入裝有５mL無菌生理鹽水試管中，每管移入4～5個菌絲球，塞上無菌白膠塞，用石蠟塗封，置低溫下可保藏1～2年。

    2、營養液保存法

    營養液的配方為馬鈴薯汁20%、葡萄糖2%

、磷酸二氫鉀0.3%、硫酸鎂0.15%、硫酸銨微量。每支試管內裝5mL，滅菌後用無菌吸管吸取生理鹽水保藏法深層培養的菌絲球4～5個於試管中
，10~25℃的室溫下保存，可存活2～3年，其保存效果優於生理鹽水保存法。不影響菌株形成子實體的能力。

    3
、無菌水保存法

    先將培養好的斜麵菌種切成小塊

，連同培養基移入盛有適量無菌蒸餾水的試管中，然後用白膠塞封口，在20℃左右的室溫下保存。可存活1～2年。也可用磷酸緩衝液做保存液，其緩衝液的pH值視各保存菌株生長的酸堿度而定。該法操作簡便易行。

利用孢子保存菌種係列方法

    1、濾紙片保藏法

    取白色（收集深色孢子）或黑色（收集白色孢子）濾紙，剪成4.0cm×0.8cm的(de)小(xiao)紙(zhi)條(tiao)，平(ping)鋪(pu)在(zai)培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)用(yong)紙(zhi)包(bao)裹(guo)進(jin)行(xing)滅(mie)菌(jun)。采(cai)用(yong)鉤(gou)懸(xuan)法(fa)收(shou)集(ji)孢(bao)子(zi)，讓(rang)孢(bao)子(zi)落(luo)在(zai)濾(lv)紙(zhi)條(tiao)上(shang)。將(jiang)載(zai)有(you)孢(bao)子(zi)的(de)濾(lv)紙(zhi)條(tiao)放(fang)入(ru)保(bao)藏(zang)試(shi)管(guan)中(zhong)，白(bai)膠(jiao)塞(sai)封(feng)口(kou)，再(zai)將(jiang)保(bao)藏(zang)試(shi)管(guan)放(fang)入(ru)幹(gan)燥(zao)器(qi)中(zhong)1～2d，除去濾紙水分，然後低溫保藏。保存期可達２～10年。

    2、沙土管保藏法

    取河沙用水浸泡洗滌數次，過60目篩除去粗粒
，加用1％稀鹽酸煮沸30min，以除去其中的有機質
，再用水衝洗至pH值達到中性
，烘幹備用。同時取非耕作層的瘦黃土或紅土，用水反複衝洗至中性，烘幹碾細，過100目篩，將處理好的沙與土以2～4∶1混勻，然後分裝小試管內
，每管裝0.5g
，高壓滅菌（1.5kg/cm2）3次，再幹熱滅菌（160℃
，2h）1次，待無菌檢驗合格後方可使用。將已形成孢子的斜麵菌種，在無菌條件下注入無菌水3mL，刮(gua)菌(jun)苔(tai)，製(zhi)成(cheng)菌(jun)懸(xuan)液(ye)
，再(zai)用(yong)無(wu)菌(jun)吸(xi)管(guan)吸(xi)取(qu)菌(jun)液(ye)滴(di)入(ru)砂(sha)土(tu)管(guan)中(zhong)
，以(yi)浸(jin)透(tou)砂(sha)土(tu)為(wei)止(zhi)。將(jiang)接(jie)種(zhong)後(hou)的(de)沙(sha)土(tu)管(guan)放(fang)入(ru)盛(sheng)有(you)幹(gan)燥(zao)劑(ji)的(de)真(zhen)空(kong)幹(gan)燥(zao)器(qi)內(nei)
，接(jie)上(shang)真(zhen)空(kong)泵(beng)抽(chou)氣(qi)至(zhi)沙(sha)土(tu)幹(gan)燥(zao)為(wei)止(zhi)。真(zhen)空(kong)幹(gan)燥(zao)操(cao)作(zuo)需(xu)在(zai)孢(bao)子(zi)接(jie)入(ru)後(hou)48h內完成，以免孢子發芽。製備好的沙土管石蠟封口，在低溫下可保藏2～10年。

    此外，還有甘油保藏法、枝條保藏法、超低溫液氮保藏法

、冷凍真空幹燥法等。菌種保藏方法雖多，但也各有利弊。其中低溫定期移植保藏法雖然簡單易行
，不需特殊設備，但需幾個月轉管1次，轉管的次數多了，變異的可能性就增大
，易造成菌種衰退。

    近年來人們找到一種目前認為最有效廣譜安全的保藏方法——超低溫液氮保藏法
，ATCC 用這種方法保藏雙孢蘑菇，9nianhoujunzhongrengbaochiwending，shimuqianguojishanggongrenweijiaoweilixiangdejunzhongbaozangfangfa。danxuyaoyedanbaozangguanshebei，qieyedanlaiyuanyouxian，feiyonggao，zhiyoushaoshukeyanyuansuoshiyong，wufatuiguang。ciwai，haiyoulengdongzhenkongganzaofa
，cifayibankebaocun10年以上，但成本較高。

三、菌種保藏效果的鑒定

    常用指標是菌株的存活率和接種物成活率。為確切判斷菌株在保藏後是否發生變異，還須從以下4個方麵進行觀察和測定：①生物學特征，如菌絲形態、顏色等
；②對基質分解能力，如走菌、吃料速度等
；③遺傳特征，如相關酶的酶譜、酶活力等；④生產出菇能力，包括產量、質(zhi)量(liang)。通(tong)過(guo)經(jing)常(chang)檢(jian)驗(yan)，以(yi)確(que)保(bao)不(bu)出(chu)現(xian)任(ren)何(he)退(tui)化(hua)跡(ji)象(xiang)的(de)菌(jun)株(zhu)取(qu)得(de)菇(gu)農(nong)的(de)信(xin)賴(lai)。通(tong)過(guo)保(bao)藏(zang)菌(jun)種(zhong)的(de)效(xiao)果(guo)鑒(jian)定(ding)，可(ke)以(yi)對(dui)保(bao)藏(zang)方(fang)法(fa)加(jia)以(yi)改(gai)善(shan)，使(shi)保(bao)藏(zang)體(ti)係(xi)更(geng)加(jia)完(wan)善(shan)。