畜禽養殖場作為動物疫病傳播的源頭,在疫病發生時及時進行病原診斷,采取相應的應對措施,是目前動物疫病防控的關鍵環節。
muqianguoneidongwuyibingdebingyuanxuezhenduanshijixuanzefanweiyouxian。erzaitongyongdexueqingxuejianceshijizhong,juedaduoshushijiancexueqingzhongkangtidemianyishiji,qijieguogengduofanyingleyimiaomianyixiaoguo,duibingyuanganranzhinengjianjiefenxi,wufaquezhen,hekuangdongwuzaizaoshouganranhou,bingduyaozaitineiqianfuyiduanshijian,dongwucaihuichanshengkangti,jiancejieguowangwangzhihoubingyuanganran。nengduiyeduganranjinxingjianbiedechengshukangtijianceshijizhiyouzhuweikuangquandegE抗kang體ti試shi劑ji盒he,由you於yu疫yi苗miao的de純chun化hua工gong藝yi問wen題ti,口kou蹄ti疫yi的de非fei結jie構gou蛋dan白bai的de抗kang體ti目mu前qian無wu法fa產chan生sheng理li論lun上shang的de鑒jian別bie診zhen斷duan作zuo用yong。另ling一yi方fang麵mian能neng監jian測ce疫yi病bing病bing原yuan的de試shi劑ji的de商shang品pin化hua試shi劑ji偏pian少shao。免mian疫yi熒ying光guang抗kang體ti技ji術shu受shou限xian於yu基ji層ceng養yang殖zhi場chang熒ying光guang顯xian微wei鏡jing以yi及ji熒ying光guang標biao記ji抗kang體ti的de缺que乏fa,故gu在zai多duo數shu基ji層ceng養yang殖zhi試shi驗yan室shi難nan以yi普pu及ji。由you於yu達da到dao市shi場chang需xu求qiu的de特te異yi性xing及ji靈ling敏min度du並bing能neng配pei對dui的de動dong物wu疫yi病bing抗kang體ti的de缺que乏fa,免mian疫yi試shi劑ji中zhong目mu前qian的de病bing原yuan檢jian測ce產chan品pin很hen少shao,這zhe類lei產chan品pin開kai發fa的de周zhou期qi長chang,不bu確que定ding性xing很hen大da,很hen難nan應ying對dui基ji層ceng疫yi病bing防fang控kong的de需xu要yao。因yin此ci養yang殖zhi場chang試shi驗yan室shi亟ji需xu合he適shi的de病bing原yuan學xue檢jian測ce試shi劑ji。
鑒於基於核酸擴增的分子診斷技術發展迅速,熒光PCR及電泳PCR已經被農業部及各省市疫控單位逐步采用,扭轉了疫病診斷中病原診斷技術空白的態勢。但對養殖場基層試驗室來說,PCR分子診斷技術的使用存在不少阻礙:
1、分子診斷試劑一般要冷凍保存,成本高且運輸半徑有限;
2、核酸提取步驟複雜緩慢,基層技術人員操作困難;
3、基層單位無力購買價格偏高的PCR擴增儀,基層技術人員也不容易掌握儀器操作要領。因為這些難點的存在,分子診斷技術一直沒有在我國養殖基層試驗室普及。
1、分子診斷試劑一般要冷凍保存,成本高且運輸半徑有限;
2、核酸提取步驟複雜緩慢,基層技術人員操作困難;
3、基層單位無力購買價格偏高的PCR擴增儀,基層技術人員也不容易掌握儀器操作要領。因為這些難點的存在,分子診斷技術一直沒有在我國養殖基層試驗室普及。
快靈生物開發的基因試紙卡,開啟了現場分子診斷步入養殖場的新時代。它包括基因提取試劑、恒溫擴增試劑及免疫層析試紙卡三部分,能常溫運輸;在常溫下同時完成 DNA/RNA樣品提取,僅需微型離心機或專利磁力架10分鍾內完成操作;添加樣品模板後將反應管密閉後放置在變溫金屬浴上保溫60分鍾,擴增完成後將反應管插入試紙卡槽後一步按壓就啟動溶液層析,3-5分(fen)鍾(zhong)後(hou)即(ji)可(ke)目(mu)視(shi)層(ceng)析(xi)試(shi)紙(zhi)的(de)線(xian)條(tiao)顯(xian)色(se)判(pan)定(ding)結(jie)果(guo)。專(zhuan)利(li)申(shen)請(qing)中(zhong)的(de)基(ji)因(yin)試(shi)紙(zhi)卡(ka)解(jie)決(jue)了(le)擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)溶(rong)液(ye)及(ji)其(qi)氣(qi)溶(rong)膠(jiao)的(de)泄(xie)漏(lou)汙(wu)染(ran)導(dao)致(zhi)後(hou)續(xu)樣(yang)品(pin)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)的(de)問(wen)題(ti),開(kai)啟(qi)了(le)現(xian)場(chang)分(fen)子(zi)診(zhen)斷(duan)步(bu)入(ru)了(le)基(ji)層(ceng)養(yang)殖(zhi)場(chang)的(de)新(xin)時(shi)代(dai)。基(ji)因(yin)試(shi)紙(zhi)卡(ka)能(neng)直(zhi)接(jie)檢(jian)測(ce)到(dao)病(bing)原(yuan),很(hen)適(shi)合(he)對(dui)健(jian)康(kang)攜(xie)毒(du)排(pai)毒(du)的(de)動(dong)物(wu)進(jin)行(xing)篩(shai)查(zha),也(ye)適(shi)合(he)對(dui)感(gan)染(ran)早(zao)期(qi)的(de)動(dong)物(wu)進(jin)行(xing)確(que)診(zhen),大(da)大(da)縮(suo)短(duan)窗(chuang)口(kou)期(qi)。此(ci)外(wai),對(dui)於(yu)罕(han)見(jian)病(bing)原(yuan)或(huo)突(tu)然(ran)爆(bao)發(fa)的(de)新(xin)病(bing)原(yuan),隻(zhi)要(yao)能(neng)在(zai)基(ji)因(yin)庫(ku)中(zhong)查(zha)詢(xun)到(dao)該(gai)病(bing)原(yuan)的(de)基(ji)因(yin)序(xu)列(lie),基(ji)因(yin)試(shi)紙(zhi)卡(ka)能(neng)最(zui)快(kuai)在(zai)一(yi)周(zhou)內(nei)研(yan)發(fa)出(chu)來(lai)。該(gai)基(ji)因(yin)試(shi)紙(zhi)卡(ka)的(de)操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)以(yi)專(zhuan)利(li)磁(ci)力(li)架(jia),變(bian)溫(wen)金(jin)屬(shu)浴(yu),兩(liang)支(zhi)移(yi)液(ye)槍(qiang)為(wei)例(li)說(shuo)明(ming)如(ru)下(xia)圖(tu)。


快靈生物的基因試紙卡檢測盒的特點在於:
1.簡單快速提取核酸:快靈生物的核酸提取試劑在常溫下10分鍾內能同時完成樣品中DNA與RNA的提取。目前基因變異最快,危害性最大的疫病往往都是RNA病毒引起的。其他商業化RNAbingdutiqushijiyibanyaoqiuzaidiwenlengdongtiaojianxiatiqucaozuo,jicengdanweiwangwangwufashixian。kuailingshengwujingguowushucideshiyanmosuo,zhongyupeizhiledutedejiyintiqushiji,jinxuweixinggaosulixinjihuozhuanlicilijia,10分鍾內就能完成單份樣品的核酸提取。我們已經在細菌病毒樣品,全血與組織樣品分別進行了DNA、RNA的提取實驗,結果都很良好。簡單的RNA提取試劑是基因試紙卡步入基層應用的基礎。
2. 擴增核酸的高靈敏高特異的快速免疫檢測技術:kuailingshengwutongguojiaotijinshizhishixianlejiyinkuozengchanwudegaolingmingaoteyijiance。jiaotijinshizhijuyoujigaodedejiancelingmindu,rukelunteluodechanpinnengdadaonakejibie(單位ng/ml),erjiyinkuozengjishuzekeyixunsujiangchaohenliangdebajiyinteyikuozengbaiwanbei。kuailingshengwujiangjiaotijinjishuyujiyinkuozengjishuwanmeijiehe,shixianlegaolingmindehesuanjiance。wogongsiduizhaoshiyanbiaoming,dangPCR擴增產物在瓊脂糖凝膠電泳上呈現微弱信號時,快靈生物的基因試紙卡對稀釋100倍的擴增產物仍有明顯信號。當LAMP恒溫擴增溶液采用染料(如SYBR Green I)隻能檢測到微弱信號時,快靈生物基因試紙卡對100倍(bei)稀(xi)釋(shi)後(hou)的(de)擴(kuo)增(zeng)溶(rong)液(ye)仍(reng)有(you)明(ming)顯(xian)信(xin)號(hao)。因(yin)此(ci)基(ji)因(yin)試(shi)紙(zhi)卡(ka)能(neng)實(shi)現(xian)更(geng)高(gao)靈(ling)敏(min)度(du)的(de)信(xin)號(hao)檢(jian)測(ce),或(huo)者(zhe)在(zai)同(tong)樣(yang)的(de)產(chan)物(wu)濃(nong)度(du)下(xia),能(neng)保(bao)證(zheng)更(geng)好(hao)的(de)信(xin)號(hao)判(pan)別(bie)。更(geng)重(zhong)要(yao)的(de)是(shi)染(ran)料(liao)檢(jian)測(ce)方(fang)法(fa)沒(mei)有(you)特(te)異(yi)性(xing),隻(zhi)要(yao)溶(rong)液(ye)中(zhong)存(cun)在(zai)一(yi)定(ding)濃(nong)度(du)的(de)核(he)酸(suan)就(jiu)有(you)信(xin)號(hao),無(wu)法(fa)區(qu)分(fen)信(xin)號(hao)是(shi)來(lai)自(zi)特(te)異(yi)性(xing)擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)還(hai)是(shi)非(fei)特(te)異(yi)性(xing)擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)。而(er)基(ji)因(yin)試(shi)紙(zhi)卡(ka)的(de)檢(jian)測(ce)則(ze)是(shi)引(yin)物(wu)與(yu)探(tan)針(zhen)雙(shuang)重(zhong)保(bao)證(zheng)擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)的(de)特(te)異(yi)性(xing),能(neng)很(hen)好(hao)地(di)區(qu)分(fen)非(fei)特(te)異(yi)擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)。
3. 精致的防汙染基因試紙卡:快靈生物專利申請中的防汙染基因試紙卡,是目前解決基層單位基因擴增產物汙染的最佳方案。盡管在熒光定量PCR和LAMP等(deng)方(fang)法(fa)中(zhong),可(ke)以(yi)不(bu)開(kai)蓋(gai)檢(jian)測(ce),但(dan)其(qi)使(shi)用(yong)的(de)反(fan)應(ying)管(guan)並(bing)沒(mei)有(you)嚴(yan)格(ge)密(mi)封(feng)的(de)結(jie)構(gou)設(she)計(ji),滲(shen)漏(lou)與(yu)意(yi)外(wai)開(kai)蓋(gai)仍(reng)然(ran)可(ke)能(neng)導(dao)致(zhi)汙(wu)染(ran)。快(kuai)靈(ling)生(sheng)物(wu)專(zhuan)利(li)申(shen)請(qing)中(zhong)的(de)防(fang)汙(wu)染(ran)基(ji)因(yin)試(shi)紙(zhi)卡(ka)的(de)塑(su)料(liao)套(tao)件(jian)中(zhong)存(cun)在(zai)多(duo)級(ji)密(mi)封(feng)設(she)計(ji),並(bing)能(neng)承(cheng)受(shou)一(yi)定(ding)的(de)空(kong)氣(qi)壓(ya)力(li)差(cha),反(fan)應(ying)管(guan)內(nei)的(de)擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)被(bei)封(feng)存(cun)在(zai)試(shi)紙(zhi)卡(ka)中(zhong),即(ji)使(shi)層(ceng)析(xi)試(shi)紙(zhi)上(shang)的(de)擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)形(xing)成(cheng)了(le)氣(qi)溶(rong)膠(jiao)也(ye)無(wu)法(fa)擴(kuo)散(san)出(chu)來(lai)。
4. 一步操作的核酸恒溫擴增技術:kuailingshengwucaiyongleyibucaozuodehesuanhengwenkuozengjishu,shihejicengdanweicaozuorenyuanshiyong。jinniankaifachuleduozhonghengwenkuozengjishu,youxiejishuxuyaojinxingduobucaozuocaishixianhesuan(DNA或RNA)的擴增。快靈生物公司綜合了LAMP技術與RCA技術的特點,獨創了新型的恒溫擴增技術,能一次添加相關試劑與樣品後,在50℃/64℃兩個溫度下共反應60分鍾就能達到層析試紙需要的信號濃度。
5. 基因試紙卡的常溫運輸:快(kuai)靈(ling)生(sheng)物(wu)的(de)基(ji)因(yin)試(shi)紙(zhi)卡(ka)檢(jian)測(ce)盒(he)中(zhong)的(de)試(shi)劑(ji)與(yu)物(wu)料(liao)都(dou)能(neng)在(zai)常(chang)溫(wen)下(xia)運(yun)輸(shu),解(jie)決(jue)了(le)基(ji)因(yin)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)對(dui)基(ji)層(ceng)單(dan)位(wei)的(de)物(wu)流(liu)障(zhang)礙(ai)。目(mu)前(qian)絕(jue)大(da)部(bu)分(fen)的(de)基(ji)因(yin)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)都(dou)需(xu)要(yao)在(zai)-20℃detiaojianxiacaiyongganbingyunshu,shidechanpindepeisongheshiyongjiweibubian。zuoweinongmuyedejicengdanwei,chuyuyibingfangkongdexuyao,chuqinyangzhichangwangwangdichujiaoquhuopianyuandexiangcun。jiyinjianceshijidechangwenyunshu,shijiyinjiancejishujinruzhexiejicengdanweidexianjuetiaojian。kuailingchanpinzecaiyongduyoudebaohuji,duijianceshijizhongbuyibaocundechengfenjinxingdongganguhua,wanquanshixianlechanpindechangwenyunshu,geiguangdayangzhichangkaiqilejiyinjiancejishudedamen。
6. 最適應基層人員使用的方案:kuailingshengwudejiyinshizhikajiancehedequanliuchengcaozuojiandanfangbian,jishizhongxuewenhuarenyuanjingjiandanpeixunjiunengzhangwo。yinciduiguangdadejicengdanweikehu,caiyongjiyinshizhikajinxingyibingjiance,wanquanbuxuyaoewaizhaopinzhuanyedejishurenyuan。tongshijiyinshizhikasuoxupeitaoyiqizhiyouweixinggaosulixinjihuozhuanlicilijia,bianwenjinshuyuheliangzhiyiyeqiang,xuyaodepeizhifeiyongjiaodi,juedabufendejicengdanweidounengfudandeqi。
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