熒光分子所處的外部化學環境對熒光強度有直接影響.選擇合適的條件不但可以使熒光加強.提高測定的靈敏度.同時.還可以控製幹擾物質的熒光產生.改善分析的選擇性。分了熒光分析法具有如下特點:
(l)靈敏度高.山於是在黑背景下測定熒光發射強度一般而言,分子熒光分析法的靈敏度比紫外一可見吸收光洪分析法高2~4個數址級.檢出限可達0.1--0.001ug.cm-3.
(2)選擇性強。既可根據特征發射光譜,又可根據特征吸收光譜來鑒定物質,還可以采用同步熒光光譜和時間分辨熒光光譜測量方法.進一步提高選擇性。
(3)試(shi)樣(yang)量(liang)少(shao)。分(fen)子(zi)熒(ying)光(guang)分(fen)析(xi)法(fa)的(de)主(zhu)要(yao)不(bu)足(zu)是(shi)應(ying)用(yong)範(fan)圍(wei)小(xiao),這(zhe)是(shi)由(you)於(yu)本(ben)身(shen)能(neng)夠(gou)發(fa)射(she)熒(ying)光(guang)的(de)物(wu)質(zhi)及(ji)能(neng)形(xing)成(cheng)熒(ying)光(guang)測(ce)量(liang)體(ti)係(xi)的(de)物(wu)質(zhi)相(xiang)對(dui)較(jiao)少(shao)所(suo)致(zhi)。另(ling)外(wai),方(fang)法(fa)靈(ling)敏(min)度(du)高(gao)的(de)同(tong)時(shi)受(shou)環(huan)境(jing)因(yin)素(su)的(de)影(ying)響(xiang)也(ye)較(jiao)大(da)。
2.定量依據與方法
熒光強度If正比於吸收的光強度I8和熒光最子產率:

上式即為定貧的依據。常用的定量方法有標準曲線法和比較法。
dangbeicewuzhibenshennenggouchanshengyingguangshi。ketongguozhijiecedingyingguangqiangdulaiquedinggaiwuzhidenongdu。dandaduoshuwujiheyoujihuahewubenshenbingbuchanshengyingguanghuoyingguangliangzichanlvhendierbunengzhijieceding,cishi,kecaiyongjianjiecedingfaceding。jianjiecedingfayouliangzhongfangshi,yishitongguohuaxuefanyingshifeiyingguangwuzhizhuanbianchengyingguangwuzhi,ruyingguangbiaojifa;ershitongguoyingguangcumiefaceding,jiyouxiehuahewujuyoushiyingguangtifashengyingguangcumiedezuoyong,yingguangqiangdujiangdizhiyucumiejinongduchengxianxingguanxi,kejinxingdingliangfenxi.
3.應用
無機化合物本身不產生熒光,可與有機熒光試劑配位構成發光體係後測最,約可測盆 60多種元素。測定無機化合物時常用的幾種熒光試劑有:8一羥基喹琳、2一羥基一3一萘甲酸、 2.2幾二經基偶氮苯及安息香等.被、鋁、翩、稼、硒、鎂、稀土金屬等元素的分析可采用普通熒光分析法。氛、硫、鐵、銀、鑽、鑲等元素可采用熒光碎滅法測定;鉻、妮、鈾、蹄等元素可采用低溫熒光法側定。具有熒光特性的有機化合物、生物及藥物化合物可直接采用熒光分析法側定。目前熒光分析法已成為側定腎上腺素、青祥素、苯巴比妥、維生素、普(pu)魯(lu)卡(ka)因(yin)等(deng)藥(yao)物(wu)的(de)靈(ling)敏(min)測(ce)定(ding)方(fang)法(fa)。對(dui)於(yu)不(bu)產(chan)生(sheng)熒(ying)光(guang)的(de)菌(jun)族(zu)化(hua)合(he)物(wu),經(jing)濃(nong)硫(liu)酸(suan)處(chu)理(li)後(hou),可(ke)使(shi)其(qi)不(bu)產(chan)生(sheng)熒(ying)光(guang)的(de)環(huan)狀(zhuang)醇(chun)類(lei)結(jie)構(gou)變(bian)成(cheng)能(neng)產(chan)生(sheng)熒(ying)光(guang)的(de)酚(fen)類(lei)結(jie)構(gou).然後側定。對於多組分熒光物質的測定,如果譜峰不相互重亞,則可分別測定;有部分重疊時,也可利用同步掃描方式,通過控製以來提高分辨率。
在分子熒光分析法中,利用激光誘導產生超高靈敏度,已能實時檢側到溶液中單分子的行為,如溶液中羅丹明6G分子、熒光索分子的單分子行為研究等.使該方麵的研究工作受到廣泛關注。在生物和基因檢測方麵,由於DNA自身的熒光盆子產率很低而不能直接檢測到,但以某些熒光分子作為探針,可通過探針標記分子的熒光變化來研究DNA。典型的熒光探針為澳化乙錠(EB),Tb3+、吖啶類熒光染料、釔的配合物等也被使用.在基因檢測方麵.目前也已逐步采用熒光染料作為標記物來取代同位素標記物。
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