希望有助於微生物檢測工作的小夥伴們更好地開展工作。
一、什麼是培養基?
培養基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養物質組合配製而成的營養基質。一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質。培養基既是提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質,也是細胞生長和繁殖的生存環境。
二、培養基的購置
從培養基自身的質量來看,不同生產廠家的產品,甚至同一廠家不同批號的產品都會存在差異。依據ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的通用要求》,對培養基的供應企業進行評價後選擇合格的供應商,這是培養基購買過程中重要的步驟。應選擇產品市場信譽度高、有質量保證能力和服務保證能力的企業;企業是否通過了質量管理體係的認證是較為客觀的評價指標。
要求生產企業提供:培養基成分名稱及產品編號、批號、使用前的pH、儲藏信息和有效期、性能評價和所用測試菌株、技術數據清單、質控證書以及必要的安全/危害數據等材料。
三、培養基的驗收
購買的培養基到貨後,應有專人做好接受和驗收工作,應仔細核對生產企業提供的資料、培養基名稱、規格數量、外觀特征、批號、保質期是否符合要求。每批培養基到貨後都應對培養基的質量進行檢測,滿足檢測方法規定的要求後方可投入使用。
四、培養基的儲存
幹粉培養基應保存在陰涼幹燥處,要避免陽光直射;未開瓶的培養基在室溫下的保存期限以廠家提供為準,開瓶後的幹粉培養基易吸濕,應注意防潮並盡快用完。
應定期對儲存中的培養基進行常規檢查,如容器密閉性複查、首次開封日期、內容物的感官檢查,如果培養基發生結塊、顏色異常和其他變質跡象就不能再使用。
五、培養基的製備
1.培養基用水
培養基製備用水應使用電阻率不小於30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質的水,最好不使用離子交換器生產的去離子水。
2.稱量
稱量時要用專用的角匙,避免交叉汙染而影響檢驗結果;幹粉培養基易吸潮,如有條件,盡量在濕度較低的房間稱取培養基。
3.複水
複水時不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養基中,影響微生物的生長;容器的大小需大於複水後培養基總體積的2倍以上,避免在加熱溶解過程中,培養基溢出;含有瓊脂粉的培養基,在加熱溶解之前可以浸泡數分鍾;加熱培養基時一定要進行攪拌,特別是瓊脂類培養基。為避免燒焦和沸騰溢出,對於少量的培養基最好使用沸水浴進行加熱。
燒shao糊hu的de培pei養yang基ji營ying養yang物wu質zhi被bei破po壞huai,並bing可ke產chan生sheng有you毒du物wu質zhi,如ru發fa現xian焦jiao化hua,或huo未wei溶rong解jie均jun勻yun前qian培pei養yang基ji有you溢yi出chu,該gai培pei養yang基ji即ji不bu能neng使shi用yong,應ying重zhong新xin製zhi備bei。對dui於yu瓊qiong脂zhi類lei培pei養yang基ji進jin行xing再zai融rong化hua時shi應ying使shi用yong沸fei水shui浴yu或huo流liu動dong蒸zheng汽qi進jin行xing加jia熱re,最zui多duo隻zhi能neng加jia熱re兩liang次ci,第di二er次ci再zai融rong化hua後hou仍reng未wei用yong完wan的de培pei養yang基ji應ying棄qi去qu。
4.滅菌
一般培養基采用濕熱滅菌,即高壓蒸汽滅菌,通常是121℃、15min,含han糖tang或huo特te殊shu培pei養yang基ji,按an照zhao國guo家jia標biao準zhun或huo生sheng產chan商shang提ti供gong的de說shuo明ming滅mie菌jun。已yi配pei製zhi好hao的de培pei養yang基ji必bi須xu立li即ji滅mie菌jun,避bi免mian微wei生sheng物wu生sheng長chang繁fan殖zhi而er消xiao耗hao養yang分fen,改gai變bian培pei養yang基ji的de酸suan堿jian度du。
高gao溫wen可ke破po壞huai培pei養yang基ji的de營ying養yang成cheng分fen,還hai會hui使shi瓊qiong脂zhi的de凝ning膠jiao強qiang度du下xia降jiang,因yin此ci必bi須xu嚴yan格ge控kong製zhi滅mie菌jun溫wen度du和he時shi間jian,並bing且qie不bu可ke重zhong複fu滅mie菌jun。高gao壓ya蒸zheng汽qi滅mie菌jun鍋guo的de壓ya力li表biao等deng要yao定ding期qi進jin行xing檢jian定ding,並bing定ding期qi采cai用yong生sheng物wu指zhi示shi菌jun法fa或huo化hua學xue變bian色se紙zhi片pian對dui滅mie菌jun效xiao果guo進jin行xing驗yan證zheng。
5.pH測定
微生物必須在適宜的pH範圍內才能正常生長繁殖或體現其生物特性。培養基配方要求的pH為滅菌或消毒後的pH 值,即培養基使用前的pH,並應在25℃溫度下采用精密酸度計進行測量,固體瓊脂培養基應以特殊的膠體表麵測量電極進行測量。使用過程中,如果需要調整培養基的pH,應用1mol/L Na0H或1mol/L HCL調整,注意不可反複調pH,否則會影響培養基的滲透壓。
6.配製好的培養基保存
滅菌以後培養基應該迅速冷卻至所需溫度,避免長時間保存在滅菌鍋內,造成過度滅菌,影響培養基的營養成分或選擇性效果。
所配製的培養基的量,應該是在最長保存期限內正好使用完。含染料的培養基應閉光保存;倒好的瓊脂平板如果配製的當天未使用完,應於冷藏保存,如果保存時間超過2天,應將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養基如果保存時間超過2個星期,應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發。
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