傳統的菌種保存方式簡介
• 斜麵保存法：微生物保存最基本的方法，可廣泛用於細菌、真菌等，保存期限非常短，斜麵容易幹裂。
• 液體石蠟保存法：可用於保存黴菌、酵母菌、放線菌及需氧菌，方法簡便，可防止斜麵幹燥和氧氣進入，但一些固氮菌、分枝杆菌、毛黴、厭氧菌等不適宜用此法。
• 甘油冷凍保存法：用於一般細菌的保存，需使甘油終濃度為20%左右，然後-20℃或-70℃以下保存。融化時需要水浴溶化。
• 真空冷凍保存法：具有低溫、幹燥、無氧的保存條件，適用於98%以上菌種的保存，但操作複雜，一般實驗室難以使用。
• 液氮保存法：基本所有微生物均可保存，並且保存時間長，但操作較為複雜而且需要設備，不適用於一般實驗室保存菌種。
• 沙土保存法
• 半固體保存法
瓷珠菌種保存法的原理
瓷珠菌種保存管是實驗室保存菌種的容器，管內有表麵凹孔小瓷珠用於細菌的吸附和保存，放置於-20℃或-80℃下便可創造幹燥、低溫、缺營養的環境，使菌株處於“休眠” 狀態，方可長期保存（視不同菌種與保存溫度，一般可保存3-10 年）, 同時菌種保存管的取用和保存較為便利（取用複蘇及保存菌種僅需1分鍾）。
瓷珠菌種保存管的優點
• 用途：菌種保存、複蘇和運輸。
• 優點：操作簡單方便、菌種保存快速、包裝物體積小、菌種保存時間長。
• 操作簡單方便：挑取細菌新鮮純培養物，接入菌種保存管。
• 菌種保存快速：混勻後，吸出冷凍保存液。
• 包裝物體積小：1.8ml冷凍管。
• 菌種保存時間長：2-8℃可保存6個月；-20℃可保存12個月；-80℃可保存24個月。
瓷珠菌種保存管的使用方法
菌種保存流程
1.從培養18h以上的平板上刮去新鮮純培養物於菌種保存管中，配成大約3-4麥氏比濁度的菌懸液。
2.擰緊保存管，來回顛倒幾次使細菌乳化，不能旋搖。
3.用無菌移液器將菌種保存管內的液體吸取幹淨，妥善放置被吸出的液體。
4.擰緊保存管，迅速將其置於-20℃或-70℃冰箱中。
使用時的注意事項
• 被保存的菌種要求是經過純化後培養 18-24h 內的新鮮菌種（細菌18-24h，酵母菌需3 天，形成孢子的微生物保存孢子，而放線菌和絲狀真菌需培養7 天後保存），不宜使用老化或未經鑒定的菌種。
• 菌種保存濃度必須要做3-4 麥氏比濁度，如接種濃度過低將會降低複蘇效果。
• 待(dai)保(bao)存(cun)於(yu)菌(jun)種(zhong)保(bao)存(cun)管(guan)中(zhong)的(de)菌(jun)種(zhong)完(wan)全(quan)乳(ru)化(hua)均(jun)勻(yun)吸(xi)附(fu)在(zai)多(duo)孔(kong)小(xiao)瓷(ci)珠(zhu)後(hou)，要(yao)將(jiang)多(duo)餘(yu)的(de)菌(jun)種(zhong)保(bao)存(cun)液(ye)吸(xi)取(qu)出(chu)來(lai)並(bing)棄(qi)之(zhi)，否(fou)則(ze)在(zai)複(fu)蘇(su)時(shi)的(de)凍(dong)融(rong)過(guo)程(cheng)中(zhong)會(hui)損(sun)傷(shang)菌(jun)株(zhu)活(huo)性(xing)。
• 做厭氧菌保存時，應提供厭氧的環境，如厭氧箱、厭氧袋，菌種保存管中可通入氮氣來驅除保存菌種時所引入的氧氣。菌種複蘇時，也要創造厭氧的環境。
• 菌種複蘇完成後，對使用菌株需要進行再次純化，以保證菌株的單一性。
常見問題答疑
1、菌種保存管能保存黴菌及酵母菌嗎？
答：可以。對於黴菌等真菌需培養7 天(tian)進(jin)行(xing)保(bao)存(cun)，而(er)酵(jiao)母(mu)菌(jun)需(xu)培(pei)養(yang)三(san)天(tian)將(jiang)孢(bao)子(zi)洗(xi)脫(tuo)下(xia)來(lai)進(jin)行(xing)保(bao)存(cun)，保(bao)存(cun)管(guan)中(zhong)的(de)小(xiao)瓷(ci)珠(zhu)可(ke)以(yi)作(zuo)為(wei)介(jie)質(zhi)來(lai)吸(xi)附(fu)孢(bao)子(zi)和(he)菌(jun)絲(si)，相(xiang)當(dang)於(yu)砂(sha)土(tu)保(bao)存(cun)法(fa)中(zhong)砂(sha)土(tu)作(zuo)為(wei)載(zai)體(ti)起(qi)到(dao)的(de)作(zuo)用(yong)。
2、所有的菌都能保存嗎？如果不是的話，什麼樣的菌可以保存？什麼樣的菌不可以保存？
答：可以。菌種保存的原理是預防或減緩DNA 複製時自發突變導致菌種退化，因此要創造代謝不活潑的狀態，而菌種保存時使菌種進入休眠態（孢子、芽孢)，並創造幹燥、低溫、缺氧、缺營養的環境，創造的環境越接近此狀態，所保存的菌種的時間就越長，所以從原理上講，所有菌種都可用這種方法保存， 但需要注意的是，苛刻菌（如流感嗜血杆菌、腦膜炎萘瑟氏菌）等特殊細菌保存時，需-80℃或更低溫度保存，才可以做到更長期的保存。
3、能用菌種保存管永久保存菌株嗎？
答：溫度越低，保藏效果越好。從目前的試驗數據及實際保存效果來看，-20℃可保存1-5 年，-80℃或液氮中可保存5-10 年，不同菌種及不同的保存溫度保存時間會有所不同（例如：大腸、沙門等常規細菌-20℃我們目前可以保存到6年）。但需要注意的是所保存的菌種需每年抽檢進行生化特征的鑒定，確定菌株無變異。
4、菌種保藏時為什麼要進行分離純化？
答：分離純化後才能獲得單一菌株，單一菌株進行菌種保藏才有意義，防止菌種交叉汙染和變異，這也是菌種保存的基本原則。
5、菌種保存管對於平板來說，對挑選菌落個數有要求嗎？還是將整個平板的菌落全部刮入管中？
答：對於要保存的細菌一般是要進行2-3 次的純化，要保證一個平板上的菌是由單一菌落傳代而來的，所以在細菌保存的過程中，為了保證製備的菌懸液可以達到3-4MCF，是shi可ke以yi將jiang整zheng個ge平ping板ban的de的de細xi菌jun全quan部bu刮gua到dao管guan中zhong的de，如ru果guo平ping板ban長chang的de比bi較jiao滿man一yi般ban半ban個ge平ping板ban就jiu夠gou用yong，具ju體ti用yong量liang也ye根gen據ju菌jun種zhong的de不bu同tong有you所suo差cha異yi，如ru黴mei菌jun、酵母菌在保存時，不適合用濁度法。
6、對於液體培養基培養的純菌，是否也可以用咱們的菌種保存管？如果可以的話，怎麼操作？
答：是(shi)可(ke)以(yi)用(yong)的(de)，如(ru)果(guo)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)能(neng)保(bao)證(zheng)是(shi)純(chun)菌(jun)的(de)話(hua)，可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)離(li)心(xin)，棄(qi)掉(diao)上(shang)清(qing)，然(ran)後(hou)把(ba)保(bao)存(cun)管(guan)中(zhong)液(ye)體(ti)吸(xi)進(jin)去(qu)充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)，然(ran)後(hou)再(zai)轉(zhuan)移(yi)到(dao)菌(jun)種(zhong)保(bao)存(cun)管(guan)中(zhong)，整(zheng)個(ge)過(guo)程(cheng)要(yao)注(zhu)意(yi)無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)。不(bu)過(guo)，一(yi)般(ban)菌(jun)種(zhong)保(bao)存(cun)管(guan)最(zui)好(hao)選(xuan)擇(ze)平(ping)板(ban)菌(jun)落(luo)進(jin)行(xing)保(bao)存(cun)，因(yin)為(wei)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)有(you)雜(za)菌(jun)是(shi)不(bu)易(yi)觀(guan)察(cha)出(chu)來(lai)的(de)。
7、為什麼在菌種保存時，要上下顛倒？為什麼不能旋搖？
答：上下顛倒，可使菌懸液充分混勻，菌株充分、均勻地吸附到小瓷珠上，旋搖不利於菌懸液充分混勻,反而會使菌株全部沉澱於管底。
8、為什麼在使用時要將管內的液體盡可能多的吸出？
答：xichuyetikebimianfanfudongrongxingchengdebingjingduijunzhudesunshang，jiakuaifusudeguocheng，yinci，yaojinkenengdejiangyujunzhonghunyunhoudebaocunyexijing。erchangyongdeganyoufa，zaifusudeguochengzhongxuyongshuiyuguokuaisurongjie，zaiciguochengzhong，duijunzhushanghaijiaoda。
9、在使用後，菌種保存管的保存環境？需要-80℃冰箱嗎？
答：本公司菌種保存管采用的是低溫冷凍保存法，因此，使用後，需放置低溫環境，如-20℃、-80℃或液氮中保存，而且溫度越低，保存效果越好。用戶需根據菌種的保存要求選擇具體保存溫度。
10、為什麼說，如果有條件的話，菌種保存管最好置於-80 冰箱或液氮中？
答：因為，貯存在-70℃以yi下xia低di溫wen中zhong能neng減jian少shao冰bing晶jing形xing成cheng，可ke極ji大da降jiang低di冰bing晶jing形xing成cheng對dui細xi菌jun的de傷shang害hai，同tong時shi可ke為wei被bei保bao存cun的de菌jun種zhong創chuang造zao更geng低di的de代dai謝xie環huan境jing，從cong而er延yan長chang細xi菌jun保bao存cun的de時shi間jian。
11、為什麼在取用菌株時，操作過程要求快速？
答：菌種保存複蘇的原則，要求慢凍快融，之所以要求快速，是因為在菌種複蘇的過程中, 長chang時shi間jian的de溶rong解jie過guo程cheng會hui對dui所suo保bao存cun的de菌jun種zhong造zao成cheng損sun傷shang，而er我wo們men經jing過guo改gai良liang的de保bao存cun方fang法fa最zui大da程cheng度du的de避bi免mian複fu蘇su所suo造zao成cheng的de影ying響xiang，但dan我wo們men還hai是shi建jian議yi遵zun循xun菌jun種zhong的de保bao存cun複fu蘇su原yuan則ze，保bao證zheng所suo複fu蘇su菌jun種zhong的de複fu蘇su率lv。
12、將菌株反複凍存，到底對菌株有什麼影響？
答：低di溫wen會hui使shi菌jun株zhu細xi胞bao內nei的de水shui分fen形xing成cheng冰bing晶jing，從cong而er引yin起qi細xi胞bao結jie構gou尤you其qi是shi細xi胞bao膜mo的de損sun傷shang。細xi胞bao體ti積ji大da者zhe一yi般ban要yao比bi較jiao小xiao者zhe對dui低di溫wen更geng為wei敏min感gan，而er無wu細xi胞bao壁bi者zhe則ze比bi有you細xi胞bao壁bi者zhe敏min感gan。如ru果guo放fang到dao低di溫wen（不是一般冰箱）進jin行xing冷leng凍dong時shi，會hui產chan生sheng冰bing晶jing，冰bing晶jing呈cheng針zhen狀zhuang，極ji易yi導dao致zhi細xi菌jun的de嚴yan重zhong損sun傷shang。用yong電dian鏡jing觀guan察cha，可ke見jian細xi菌jun的de核he膜mo上shang有you大da量liang針zhen尖jian樣yang小xiao孔kong，當dang從cong低di溫wen下xia移yi出chu並bing開kai始shi升sheng溫wen時shi，冰bing晶jing又you會hui變bian大da，故gu反fan複fu凍dong存cun，會hui對dui菌jun株zhu造zao成cheng極ji大da損sun傷shang。
13、為什麼有時候菌種的保存效果不佳？
答：1、可能是由於保存後未將保存液吸盡，反複凍融形成冰晶損傷菌株細胞，影響了菌株活性。
2、確定所保存的菌種是否為對數生長期的菌種，我們建議普通菌種保存為18小時內的新鮮菌種，而黴菌需要待孢子出現後保存其孢子。
14、該產品能否用於菌種的運送，如果可以在什麼條件下運送？
答：就目前試驗數據而言，我們建議可主要用於普通細菌的短期運送，對於厭氧菌在運送時最好讓其處於厭氧環境下，2-8℃運送不超過5 天。另外需要說明的是如弧菌屬和綠膿杆菌需要常溫運送，其對2-8℃溫度極其敏感。
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