15種蛋白質單晶培養的方法：

（1）大量養晶法（bulk crystallization）：若急著養出單晶，則將純化之蛋白質溶液加入固體鹽類或飽和鹽液
，直到溶液中出現乳白混濁色，離心後把上清液（suppernatant）放置數天至數周，有可能養出單晶。

（2）批次養晶法（batch method）:若發現加入蛋白質的沉澱劑和鹽類等化學藥品，在濃度C1產生沉澱，濃度Cn為液體，則在C1至Cn之間細分成一串濃度C1>C2>C3>….>Ci>Cn
，（n-2）個小試管進行養晶，可能結出單晶。此法之主要缺點在於蛋白質的消耗量大。

（3）大量透析法（bulk dialysis）：把蛋白質溶液包在半透膜（membrane）內，浸入盛有化學藥品的器皿中
，半透膜能讓小分子進出
，卻不會讓蛋白質等大分子通過，則器皿中沉澱劑、鹽類和有機溶液等化學藥品會穿過半透膜
，與蛋白質起作用
，直到膜之內外的濃度梯度（concentration gradient）降到零為止。此法的好處在於，器皿中化學藥品之濃度可作連續之調整，pH值的範圍也可探討。壞處是膜之內外濃度差異減少時
，平衡速率也隨之降低。

（4）微量透析法（microdialysis）:把(ba)半(ban)透(tou)膜(mo)的(de)體(ti)積(ji)縮(suo)小(xiao)，綁(bang)在(zai)比(bi)鈕(niu)扣(kou)略(lve)大(da)的(de)襯(chen)架(jia)上(shang)，架(jia)體(ti)之(zhi)凹(ao)槽(cao)內(nei)注(zhu)入(ru)蛋(dan)白(bai)質(zhi)溶(rong)液(ye)，包(bao)覆(fu)半(ban)透(tou)膜(mo)的(de)體(ti)架(jia)放(fang)入(ru)盛(sheng)有(you)化(hua)學(xue)藥(yao)品(pin)的(de)器(qi)皿(min)，其(qi)養(yang)晶(jing)原(yuan)理(li)與(yu)大(da)量(liang)透(tou)析(xi)法(fa)相(xiang)同(tong)，隻(zhi)是(shi)使(shi)用(yong)蛋(dan)白(bai)質(zhi)和(he)化(hua)學(xue)藥(yao)品(pin)的(de)量(liang)放(fang)得(de)少(shao)。注(zhu)意(yi)凹(ao)槽(cao)內(nei)不(bu)得(de)留(liu)有(you)氣(qi)泡(pao)
，否(fou)則(ze)膜(mo)外(wai)的(de)化(hua)學(xue)藥(yao)品(pin)為(wei)氣(qi)泡(pao)所(suo)阻(zu)止(zhi)而(er)無(wu)法(fa)透(tou)過(guo)氣(qi)泡(pao)
，滲(shen)入(ru)膜(mo)內(nei)的(de)蛋(dan)白(bai)質(zhi)溶(rong)液(ye)。

（5）連續萃取（sequential extraction）：此法所根據的原理是亞可比（Jacoby）的實驗，他發現蛋白質在硫酸銨溶液中溶解度隨溫度的提升而下降。在4℃以下取得上清液（supernatant），放在室溫長晶。先將蛋白質溶液加入固體硫酸銨或飽和硫酸銨液體
，使蛋白質溶液沉澱，離心除去上清液。接著保持4℃以下處理一係列的蛋白質沉澱物。準備數種依次遞降濃度的沉澱劑（通常為蒸餾水），nongdugaodechendianjixianjiarushangshudanbaizhichendianwuzhong，yibobangjiaobanbinglixin
，quchushangqingye，fangzaishiwenyangjing，zaibanongducigaodechendianjijiarushangciweiwanquanrongjiededanbaizhichendianwu
，jiaobanlixin，bashangqingyezhiyushiwenyangjing
，yicileitui

，zhidaodanbaizhiquanburongjieweizhi。zheyangmeiciquchudedanbaizhinongduyicidijian，rongyeyoudiwenyizhigaowen，fuheyakebidezhunze
，kenengyangchudanbaizhidanjing。

（6）自由接口間的擴散法（free interface diffusion）：若蛋白質在不同的溶劑中具有不同的溶解度，則蛋白質注入盛有沉澱劑試管的上方或下方（依密度而定
，密度大者放在下方），在兩種溶液的交界麵擴散會有晶核長出，裝置如圖7-10所示。

（7）凹盤或玻片上的蒸汽擴散法（vapor diffusion on plates or slides）—座滴法：蛋dan白bai質zhi養yang晶jing的de要yao領ling在zai於yu蛋dan白bai質zhi達da成cheng過guo飽bao和he溶rong液ye，同tong時shi添tian加jia的de化hua學xue藥yao物wu與yu蛋dan白bai質zhi起qi作zuo用yong，協xie助zhu晶jing核he的de形xing成cheng。摻chan有you化hua學xue藥yao品pin的de蛋dan白bai質zhi溶rong液ye，其qi水shui分fen慢man慢man擴kuo散san，達da到dao過guo飽bao和he溶rong液ye則ze有you可ke能neng長chang出chu單dan晶jing。若ruo蛋dan白bai質zhi溶rong液ye暴bao露lu在zai空kong氣qi中zhong，水shui分fen蒸zheng發fa掉diao，則ze蛋dan白bai質zhi幹gan涸he


，無wu法fa形xing成cheng單dan晶jing

，原yuan因yin是shi蛋dan白bai質zhi單dan晶jing約yue略lve維wei持chi液ye態tai的de結jie構gou，含han有you大da量liang水shui分fen，水shui分fen與yu蛋dan白bai質zhi間jian形xing成cheng許xu多duo氫qing鍵jian，水shui分fen蒸zheng發fa，蛋dan白bai質zhi也ye無wu以yi為wei係xi，因yin此ci必bi須xu保bao持chi水shui分fen，使shi蛋dan白bai質zhi溶rong液ye密mi閉bi在zai一yi個ge容rong器qi中zhong。同tong時shi還hai得de調tiao節jie水shui分fen，所suo以yi必bi須xu置zhi放fang兩liang種zhong溶rong液ye，使shi蛋dan白bai質zhi溶rong液ye中zhong的de水shui分fen擴kuo散san到dao另ling一yi種zhong高gao濃nong度du的de溶rong液ye中zhong，以yi達da蛋dan白bai質zhi溶rong液ye的de過guo飽bao和he。通tong常chang選xuan擇ze適shi當dang的de鹽yan類lei和he有you機ji溶rong劑ji
，調tiao在zai等deng電dian點dian的depH值，形成沉澱劑，把粉晶蛋白質泡成一定濃度，約在5～40mg/ml之間，在凹盤的下凹孔鍍矽
，注入一些蛋白質溶液和沉澱劑總共10～40 m l。在凹盤外方的塑料盒，倒入20～30ml的沉澱劑。在塑料的四周塗真空油膏（Vacuum grease），加以密封。通常這樣的塑料盒對於每種養晶條件製備兩盒，一盒放在4℃的de低di溫wen
，另ling盒he放fang在zai室shi溫wen，待dai其qi長chang晶jing，快kuai則ze一yi周zhou
，慢man則ze數shu月yue，幸xing運yun的de話hua，可ke望wang長chang出chu單dan晶jing。通tong常chang一yi次ci製zhi備bei數shu拾shi條tiao件jian，大da量liang養yang晶jing。要yao鑒jian定ding長chang出chu的de單dan晶jing確que實shi是shi蛋dan白bai質zhi而er不bu是shi滴di入ru的de沉chen澱dian劑ji等deng化hua學xue藥yao品pin。若ruo養yang出chu蛋dan白bai質zhi單dan晶jing太tai小xiao

，不bu足zu以yi供gongX光繞射實驗使用
，則可使用連續播種法把小晶粒養大：依照養出蛋白質小單晶的條件
，炮製母液（蛋白質溶液配合沉澱劑），注(zhu)入(ru)凹(ao)孔(kong)
，外(wai)圍(wei)倒(dao)注(zhu)沉(chen)澱(dian)劑(ji)
，加(jia)以(yi)密(mi)封(feng)，等(deng)待(dai)約(yue)半(ban)天(tian)後(hou)，打(da)開(kai)封(feng)蓋(gai)，把(ba)以(yi)前(qian)所(suo)養(yang)的(de)小(xiao)晶(jing)粒(li)稍(shao)加(jia)清(qing)洗(xi)後(hou)放(fang)入(ru)
，企(qi)圖(tu)長(chang)大(da)，若(ruo)長(chang)出(chu)的(de)晶(jing)體(ti)仍(reng)然(ran)不(bu)符(fu)X光使用，則把最後一次的晶體當新晶種，再繼續播種
，直到晶體夠大。此種養晶法的好處是：用量少，篩選多種條件相當理想;易於修飾塑料盒內沉澱劑的濃度。此種養晶法裝置
，也可用具有凹槽的玻片來取代
，在其一凹孔注入10m l的母液

，另一凹孔注入20～40m l的沉澱劑
，以小玻片密封
，等待長晶。 

（8）懸滴液蒸汽擴散法（vapor diffusion in hanging drops）—懸滴法: 它ta在zai原yuan理li上shang和he座zuo滴di法fa相xiang同tong，皆jie以yi蒸zheng汽qi達da到dao平ping衡heng

，利li用yong少shao量liang蛋dan白bai質zhi篩shai選xuan多duo種zhong養yang晶jing條tiao件jian。此ci法fa用yong量liang比bi座zuo滴di液ye更geng少shao。在zai方fang形xing或huo圓yuan形xing的de玻bo片pian上shang鍍du矽gui，滴di入ru少shao於yu10m l的蛋白質母液，在培養皿的每一凹槽中注入1 ml的沉澱劑，把方形玻片翻轉，蓋在凹槽孔緣
，加以密封，形成懸滴液，進行擴散，蛋白質溶液達到過飽和
，長出單晶。

（9）液體橋連法（liquid bridge）如圖7-12（b）所(suo)示(shi)
，一(yi)小(xiao)滴(di)母(mu)液(ye)和(he)一(yi)滴(di)沉(chen)澱(dian)液(ye)分(fen)別(bie)滴(di)在(zai)玻(bo)璃(li)片(pian)的(de)兩(liang)靠(kao)近(jin)處(chu)，以(yi)細(xi)針(zhen)引(yin)導(dao)細(xi)橋(qiao)相(xiang)接(jie)
，把(ba)此(ci)載(zai)有(you)液(ye)滴(di)的(de)玻(bo)片(pian)放(fang)在(zai)密(mi)封(feng)容(rong)器(qi)中(zhong)，在(zai)細(xi)橋(qiao)相(xiang)連(lian)處(chu)可(ke)望(wang)長(chang)出(chu)單(dan)晶(jing)。（10）濃度透析法（concentration dialysis）：，離(li)子(zi)強(qiang)度(du)弱(ruo)，則(ze)蛋(dan)白(bai)質(zhi)溶(rong)解(jie)度(du)低(di)
，易(yi)形(xing)成(cheng)晶(jing)核(he)
，長(chang)出(chu)單(dan)晶(jing)
，可(ke)利(li)用(yong)氮(dan)氣(qi)在(zai)裝(zhuang)有(you)蛋(dan)白(bai)質(zhi)和(he)鹽(yan)類(lei)的(de)透(tou)析(xi)袋(dai)內(nei)施(shi)壓(ya)，使(shi)鹽(yan)類(lei)穿(chuan)透(tou)透(tou)析(xi)膜(mo)流(liu)出(chu)，降(jiang)低(di)袋(dai)內(nei)鹽(yan)類(lei)濃(nong)度(du)，使(shi)蛋(dan)白(bai)質(zhi)溶(rong)液(ye)在(zai)低(di)離(li)子(zi)強(qiang)度(du)下(xia)長(chang)出(chu)單(dan)晶(jing)。

（11）pH引導長晶法（crystallization induced by pH）：蛋白質的溶解度在等電點的pH值最低
，是個良好的養晶條件。有些蛋白質在不同的數個pH值，具有數個溶解度的極小，這些溶解度極小處可望長晶。利用透析法改變透析膜外的pH值是個好辦法。也可在蒸汽擴散法中，在外圍滴入揮發性酸或堿（如氨水或幹冰等）來調節pH值。

（12）溫度長晶法（temperature crystallization）：蛋白質溶解度為溫度的函數
，有些溶解度非常溫度敏感。通常溫度降低，分子排列較有秩序

，引起能趨疲（熵）（entropy）的de降jiang低di。由you液ye體ti轉zhuan變bian到dao固gu體ti，其qi熵shang會hui降jiang低di，反fan之zhi亦yi然ran。井jing然ran有you序xu排pai列lie的de分fen子zi易yi於yu長chang晶jing。通tong常chang一yi種zhong長chang晶jing條tiao件jian泡pao兩liang份fen，一yi份fen置zhi於yu室shi溫wen，另ling一yi份fen放fang在zai4℃的冰箱。

（13）蒸發（evaporation）：這zhe是shi最zui原yuan始shi的de方fang法fa，為wei小xiao分fen子zi的de長chang晶jing常chang用yong法fa，也ye是shi某mou些xie蛋dan白bai質zhi常chang用yong的de養yang晶jing法fa。在zai蛋dan白bai質zhi不bu變bian性xing的de條tiao件jian下xia，慢man慢man讓rang母mu液ye蒸zheng發fa
，使shi蛋dan白bai質zhi溶rong液ye達da到dao過guo飽bao和he，結jie出chu單dan晶jing。

（14）填加有效分子法（effector addition）：與有效分子（effector）結合的蛋白質
，其溶解度往往與無有效分子結合者差異大，可達到某些構象（conformation）平衡狀態的存在
，養出此種構象單晶
，通常的有效分子有配位體（ligand）和基質（substrate）等。

（15）對蒸餾水透析法（dialysis against water）：liziqiangduruozedanbaizhirongjiedudi，yibantoumozhuangmuye，waijinzhengliushui，yanleiwangmowaitouchu
，daimoneidanbaizhirongjiedujiangdi，kewangchangchudanjing。cifaxiangdangyouxiao
，zhideshoucichangshi。qiantishidanbaizhibudebianxing（denature）
，有時添加少許 [0.02%（w/v）] 的 Sodium azide，或數滴甲苯（toluene）或氯仿（chloroform）有助防止細菌的滋長