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哪些操作不能做？哪些懶兒不能偷？那些小概率的故障師傅沒教怎麼辦？液相使用過程中有哪四大關鍵因素要注意？別著急，這就一一告訴你！
哪些操作不能做？哪些懶兒不能“偷”？
1、流動相不過濾
因為塵埃或其它任何雜質微粒都會磨損柱塞、密封環、缸體和單向閥，因此應預先除去流動相中的任何固體微粒。流動相最好在玻璃容器內蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應連接砂濾棒（或片）。輸液泵的濾器應經常清洗或更換。
2、使用後沒有及時清洗泵
流(liu)動(dong)相(xiang)不(bu)應(ying)含(han)有(you)任(ren)何(he)腐(fu)蝕(shi)性(xing)物(wu)質(zhi)，含(han)有(you)緩(huan)衝(chong)液(ye)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)不(bu)應(ying)保(bao)留(liu)在(zai)泵(beng)內(nei)，尤(you)其(qi)是(shi)在(zai)停(ting)泵(beng)過(guo)夜(ye)或(huo)更(geng)長(chang)時(shi)間(jian)的(de)情(qing)況(kuang)下(xia)。如(ru)果(guo)將(jiang)含(han)緩(huan)衝(chong)液(ye)的(de)流(liu)動(dong)相(xiang)留(liu)在(zai)泵(beng)內(nei)，由(you)於(yu)蒸(zheng)發(fa)或(huo)泄(xie)漏(lou)，甚(shen)至(zhi)隻(zhi)是(shi)由(you)於(yu)溶(rong)液(ye)的(de)靜(jing)置(zhi)，就(jiu)可(ke)能(neng)析(xi)出(chu)鹽(yan)的(de)微(wei)細(xi)晶(jing)體(ti)，這(zhe)些(xie)晶(jing)體(ti)將(jiang)和(he)上(shang)述(shu)固(gu)體(ti)微(wei)粒(li)一(yi)樣(yang)損(sun)壞(huai)密(mi)封(feng)環(huan)和(he)柱(zhu)塞(sai)等(deng)。因(yin)此(ci)，必(bi)須(xu)泵(beng)入(ru)純(chun)水(shui)將(jiang)泵(beng)充(chong)分(fen)清(qing)洗(xi)後(hou)，再(zai)換(huan)成(cheng)適(shi)合(he)於(yu)色(se)譜(pu)柱(zhu)保(bao)存(cun)和(he)有(you)利(li)於(yu)泵(beng)維(wei)護(hu)的(de)溶(rong)劑(ji)（對於反相鍵合矽膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。
3、流動相走空
泵工作時要留心防止溶劑瓶內的流動相被用完，否則空泵運轉也會磨損柱塞、缸體或密封環，最終產生漏液。
4、沒有流動相流出，又無壓力指示
可能是泵內有大量氣體，這時可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運轉，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。
另一個可能原因是密封環磨損，需更換。
5、壓力和流量不穩
原因可能是氣泡，需要排除；或(huo)者(zhe)是(shi)單(dan)向(xiang)閥(fa)內(nei)有(you)異(yi)物(wu)，可(ke)卸(xie)下(xia)單(dan)向(xiang)閥(fa)，浸(jin)入(ru)丙(bing)酮(tong)內(nei)超(chao)聲(sheng)清(qing)洗(xi)。有(you)時(shi)可(ke)能(neng)是(shi)砂(sha)濾(lv)棒(bang)內(nei)有(you)氣(qi)泡(pao)，或(huo)被(bei)鹽(yan)的(de)微(wei)細(xi)晶(jing)粒(li)或(huo)滋(zi)生(sheng)的(de)微(wei)生(sheng)物(wu)部(bu)分(fen)堵(du)塞(sai)，這(zhe)時(shi)，可(ke)卸(xie)下(xia)砂(sha)濾(lv)棒(bang)浸(jin)入(ru)流(liu)動(dong)相(xiang)內(nei)超(chao)聲(sheng)除(chu)氣(qi)泡(pao)，或(huo)將(jiang)砂(sha)濾(lv)棒(bang)浸(jin)入(ru)稀(xi)酸(suan)（如4mol/L硝酸）內迅速除去微生物，或將鹽溶解，再立即清洗。
壓力為啥過高或過低？
可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應逐段進行。
在進行梯度洗脫時，由於多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視。
PS：在(zai)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)中(zhong)對(dui)組(zu)分(fen)複(fu)雜(za)的(de)樣(yang)品(pin)采(cai)用(yong)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)的(de)方(fang)法(fa)。在(zai)同(tong)一(yi)個(ge)分(fen)析(xi)周(zhou)期(qi)中(zhong)，按(an)一(yi)定(ding)程(cheng)序(xu)不(bu)斷(duan)改(gai)變(bian)流(liu)動(dong)相(xiang)的(de)濃(nong)度(du)配(pei)比(bi)，稱(cheng)為(wei)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)。從(cong)而(er)可(ke)以(yi)使(shi)一(yi)個(ge)複(fu)雜(za)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)性(xing)質(zhi)差(cha)異(yi)較(jiao)大(da)的(de)組(zu)分(fen)能(neng)按(an)各(ge)自(zi)適(shi)宜(yi)的(de)容(rong)量(liang)因(yin)子(zi)k達到良好的分離目的。
梯度洗脫的優點：
1.縮短分析周期；
2.提高分離能力；
3.峰型得到改善，很少拖尾；
4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。
6、梯度洗脫的流動相選擇不當
yaozhuyirongjidehurongxing，buxianghunrongderongjibunengyongzuotiduxituodeliudongxiang。youxierongjizaiyidingbilineihunrong，chaochufanweihoujiubuhurong，shiyongshigengyaoyinqizhuyi。dangyoujirongjihehuanchongyehunheshi，haikenengxichuyandejingti，youqishiyonglinsuanyanshixutebiexiaoxin。
7、忽略的空白梯度洗脫
tiduxituosuoyongderongjichunduyaoqiugenggao，yibaozhenglianghaodezhongxianxing。jinxingyangpinfenxiqianbixujinxingkongbaitiduxituo，yibianrenrongjizazhifeng，yinweiruorongjizhongdezazhifujizaisepuzhutouhouhuibeiqiangrongjixituoxialai。yongyutiduxituoderongjixuchedituoqi，yifangzhihunheshichanshengqipao。
8、忽略了溶劑洗脫所帶來的粘度變化
混(hun)合(he)溶(rong)劑(ji)的(de)粘(zhan)度(du)常(chang)隨(sui)組(zu)成(cheng)而(er)變(bian)化(hua)，因(yin)而(er)在(zai)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)時(shi)常(chang)出(chu)現(xian)壓(ya)力(li)的(de)變(bian)化(hua)。例(li)如(ru)甲(jia)醇(chun)和(he)水(shui)粘(zhan)度(du)都(dou)較(jiao)小(xiao)，當(dang)二(er)者(zhe)以(yi)相(xiang)近(jin)比(bi)例(li)混(hun)合(he)時(shi)粘(zhan)度(du)增(zeng)大(da)很(hen)多(duo)，此(ci)時(shi)的(de)柱(zhu)壓(ya)大(da)約(yue)是(shi)甲(jia)醇(chun)或(huo)水(shui)為(wei)流(liu)動(dong)相(xiang)時(shi)的(de)兩(liang)倍(bei)。因(yin)此(ci)要(yao)注(zhu)意(yi)防(fang)止(zhi)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)壓(ya)力(li)超(chao)過(guo)輸(shu)液(ye)泵(beng)或(huo)色(se)譜(pu)柱(zhu)能(neng)承(cheng)受(shou)的(de)最(zui)大(da)壓(ya)力(li)。
9、六通閥的正確使用和維護
①樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進樣閥的磨損。
②轉動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內壓力劇增，甚至超過泵的最大壓力；再轉到進樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。
③為防止緩衝鹽和樣品殘留在進樣閥中，每次分析結束後應衝洗進樣閥。通常可用水衝洗，或先用能溶解樣品的溶劑衝洗，再用水衝洗。
10、色譜柱的使用和維護
色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。
調節流速太快
避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會衝動柱內填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩（如前所述）。
反衝色譜柱
一般說來色譜柱不能反衝，隻有生產者指明該柱可以反衝時，才可以反衝除去留在柱頭的雜質。否則反衝會迅速降低柱效。
預柱和保護柱
選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以(yi)避(bi)免(mian)固(gu)定(ding)相(xiang)被(bei)破(po)壞(huai)。有(you)時(shi)可(ke)以(yi)在(zai)進(jin)樣(yang)器(qi)前(qian)麵(mian)連(lian)接(jie)一(yi)預(yu)柱(zhu)，分(fen)析(xi)柱(zhu)是(shi)鍵(jian)合(he)矽(gui)膠(jiao)時(shi)，預(yu)柱(zhu)為(wei)矽(gui)膠(jiao)，可(ke)使(shi)流(liu)動(dong)相(xiang)在(zai)進(jin)入(ru)分(fen)析(xi)柱(zhu)之(zhi)前(qian)預(yu)先(xian)被(bei)矽(gui)膠(jiao)“飽和”，避免分析柱中的矽膠基質被溶解。
避(bi)免(mian)將(jiang)基(ji)質(zhi)複(fu)雜(za)的(de)樣(yang)品(pin)尤(you)其(qi)是(shi)生(sheng)物(wu)樣(yang)品(pin)直(zhi)接(jie)注(zhu)入(ru)柱(zhu)內(nei)，需(xu)要(yao)對(dui)樣(yang)品(pin)進(jin)行(xing)預(yu)處(chu)理(li)或(huo)者(zhe)在(zai)進(jin)樣(yang)器(qi)和(he)色(se)譜(pu)柱(zhu)之(zhi)間(jian)連(lian)接(jie)一(yi)保(bao)護(hu)柱(zhu)。保(bao)護(hu)柱(zhu)一(yi)般(ban)是(shi)填(tian)有(you)相(xiang)似(si)固(gu)定(ding)相(xiang)的(de)短(duan)柱(zhu)。保(bao)護(hu)柱(zhu)可(ke)以(yi)而(er)且(qie)應(ying)該(gai)經(jing)常(chang)更(geng)換(huan)。
那些小概率的故障師傅沒教怎麼辦？
1、泵壓跳動，跳動範圍10bar左右
解決方法
①原先小白頭有點髒，更換後尚未解決；
②將主動閥上的閥芯取出後，發現有類似氣泡存在，浸入甲醇-水溶液超聲5min，以試著去除氣泡，重新將其安裝後再觀察，仍未解決；
③更換新的閥芯，將其安裝後，不再有跳動，觀察一段時間後比較平穩，成功解決。
2、突發故障
①plug homing over pressure
②灌注及設流速時均無壓力也不見液體流出
③檢測器光閘不能複位
④進完大濃度樣品後，進空白相應位置也出峰。
可能原因
①在線過濾器堵了
②泵頭下單向閥堵了
③有可能是檢測池髒了，也有可能是光路有點堵，再不行可能是燈壽命到了
④小抹布髒了，需要換
解決方法
①在線過濾器卸下來，置燒杯，加純化水煮沸5-10分鍾後甲醇超一下一般就可以了，如果還堵的話就拿稀硝酸泡，還不行的話就換新的了，這本身是個消耗品。
②把泵頭下單向閥卸下來，兩個都有可能堵，剛卸下來時豎著在耳邊搖一搖是聽不到聲音的。簡單的拿洗耳球把單向閥吹吹就行了（注意方向），吹了沒反應可以拿溶劑超聲，但不可水煮，一般超至在耳邊搖能聽見聲音就不影響實驗。
③先用溶劑把檢測池衝衝，用啥試具體樣品而定；若衝了還不行，把檢測池卸下，看燈能量，若能量還可以（有個幾千），可ke能neng得de清qing洗xi光guang路lu了le。第di一yi次ci清qing洗xi的de話hua建jian議yi還hai是shi叫jiao工gong程cheng師shi來lai，因yin為wei待dai清qing理li的de部bu件jian在zai檢jian測ce器qi的de最zui下xia方fang，有you一yi個ge黑hei色se片pian片pian，中zhong間jian有you一yi條tiao縫feng，而er且qie那na一yi塊kuai的de螺luo絲si都dou是shi八ba角jiao的de，卸xie起qi來lai很hen麻ma煩fan。
④把5個樣品盤都拿出來，可以看見裏麵有一個黑色突起（看不清用手電筒），平時進樣針就是從那個地方吸樣的。手伸進去就可以卸下來，裏麵有一個小白圈圈（用多了自然就黑了），換一個新的就行了，買儀器時一般配有10個。
液相色譜在使用過程中需要注意的四大因素
1、液相色譜儀本身
對(dui)於(yu)儀(yi)器(qi)本(ben)身(shen)一(yi)般(ban)不(bu)會(hui)有(you)問(wen)題(ti)，特(te)別(bie)是(shi)剛(gang)買(mai)回(hui)來(lai)的(de)新(xin)儀(yi)器(qi)。對(dui)於(yu)儀(yi)器(qi)本(ben)身(shen)最(zui)重(zhong)要(yao)的(de)就(jiu)是(shi)儀(yi)器(qi)的(de)校(xiao)驗(yan)，剛(gang)買(mai)回(hui)來(lai)的(de)儀(yi)器(qi)一(yi)般(ban)都(dou)是(shi)由(you)賣(mai)家(jia)先(xian)對(dui)儀(yi)器(qi)做(zuo)係(xi)統(tong)的(de)確(que)認(ren)工(gong)作(zuo)（包括IQ、PQ、OQ），querenshunlitongguohou，zaiqingguojiahuoshengjiyiqijiandingjudelaixiaoyan，jiandinghegehoujiukeyifangxinshiyongle，chucizhiwai，yixiezuodehaodegongsimeibannianhuiduiyiqijinxingyicideneibuxiaoyan，mudejiushiweilebaozhengyiqidezhengchangkeyunxingzhuangtai。
2、色譜條件
色譜條件一般包括流動相、色譜柱、檢測波長、流速及進樣量。流動相就涉及到配製流動相所用到的水和試劑試液，水一般要求用超純水或其他水的電阻率不大於18.2兆歐級別，試劑試液要求用色譜級別的，原因為防止水和試劑試液中的雜質對色譜結果的幹擾。
sepuzhuhuiyinbutongdepinzhongeryoubutongdeyaoqiu，danmeigensepuzhudouyoutadeqingxiyaoqiu，zhegezaisepuzhushuomingshushangdoukeyizhaodao，yidingyaogenjushangmiandeyaoqiujinxing，fouzehuizaochengsepuzhuxiaoxiajianghesepuzhudeshiyongshoumingsuoduan，jiancebochangyehuiyinpinzhongdebutongyoubutongdeyaoqiu。zhelixuyaozhichudeshiyaozhuyiguanchajianceqidaodengnengliangdebianhua，birujixianbodongda，huoxingchengfendexiangyingzhituranbianxiaodeng，douyoukenengshidaodengdenengliangbuzusuoyinqide，daodengyibanjianyishiyong800小時，但實際上使用時間不止，可根據實際情況更換。
流速也因品種的不同而不同，一般為1.0ml/min，流速是不可隨意改動的，特別是作為QCrenyuan，danshizuoweiyanfarenyuan，youshiweilemosuotiaojianhuojinxingfangfanaiyongxingyanzheng，huiduiliusujinxinggaibianyipingjiafangfadeshiyongxing。duiyujinyangliangyinbutongdepinzhongyeyoubutongguiding，jinyangliangzhekuaixianzaidoushiyongzidongjinyang，suoyijinyangjingmidudouhenhao，buxuqiangtiaoshenme。
3、操作人員
首(shou)先(xian)，作(zuo)為(wei)液(ye)相(xiang)操(cao)作(zuo)人(ren)員(yuan)，一(yi)定(ding)要(yao)認(ren)真(zhen)學(xue)習(xi)液(ye)相(xiang)的(de)說(shuo)明(ming)書(shu)，掌(zhang)握(wo)液(ye)相(xiang)硬(ying)件(jian)和(he)軟(ruan)件(jian)的(de)操(cao)作(zuo)，掌(zhang)握(wo)日(ri)常(chang)的(de)維(wei)護(hu)保(bao)養(yang)，掌(zhang)握(wo)最(zui)基(ji)礎(chu)故(gu)障(zhang)的(de)排(pai)除(chu)和(he)維(wei)修(xiu)。
yibanyexiangdecaozuoguichengyeshiyoucaozuorenyuanqicaode，suoyizhiyaoyangeanzhaocaozuoyaoqiujinxingcaozuo，yibanbuhuichuxianwenti。dangran啫lixuyaotebiezhichudeshiduiyuyexiangderichangweihubaoyanghenzhongyao，biruliudongxiangdeguolv、脫氣、泵密封墊的清洗、係統管路的清洗、溶劑過濾頭的清洗等，倘若不堅持，很容易導致色譜柱堵塞、係統壓力過大、色譜峰異常等不必要的故障，浪費時間。
其次，操作人員在配製液相分析用樣品溶液時，最好由同一個人單獨完成，以免不必要的偶然誤差。
4、液相安裝條件
液相色譜儀應盡量安裝於水平、遠離振動、電dian磁ci幹gan擾rao的de屋wu內nei的de台tai麵mian上shang，有you條tiao件jian的de話hua盡jin量liang將jiang液ye相xiang數shu據ju處chu理li係xi統tong分fen隔ge開kai，一yi個ge是shi防fang止zhi色se譜pu基ji線xian噪zao音yin偏pian大da，基ji線xian不bu穩wen等deng，一yi個ge是shi為wei減jian少shao對dui人ren體ti的de危wei害hai。
