【文章來源】藥物微生物檢驗公眾號
藥品中的成分複雜,包括有效成分、輔料(澱粉、糊精、色素等),這zhe些xie成cheng分fen當dang中zhong的de有you機ji物wu很hen容rong易yi遭zao受shou微wei生sheng物wu汙wu染ran。在zai藥yao品pin生sheng產chan過guo程cheng中zhong,微wei生sheng物wu檢jian測ce是shi評ping價jia產chan品pin質zhi量liang和he安an全quan性xing的de重zhong要yao指zhi標biao之zhi一yi。在zai微wei生sheng物wu檢jian測ce的de過guo程cheng中zhong,菌jun種zhong保bao藏zang是shi一yi項xiang重zhong要yao的de基ji礎chu性xing工gong作zuo。使shi用yong正zheng確que的de方fang法fa對dui菌jun種zhong進jin行xing保bao藏zang可ke以yi有you效xiao地di避bi免mian菌jun種zhong的de死si亡wang、退化和汙染,便於生產及科學研究。國家也頒布了相應的法規和標準。
一、菌種的複蘇
1.製備菌懸液母液:根據微生物的種類,向凍幹菌種管中加入適量適合微生物生長的培養液(如表1.1[1] 注意是液體培養基),混合均勻。
表1.1 不同菌種適用的液體培養基
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菌株種類 |
培養液 |
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細菌 |
營養肉湯 |
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白色念珠菌 |
沙堡液體培養基 |
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分枝杆菌 |
蘇通綜合液體培養基 |
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黑曲黴菌 |
麥芽浸膏營養肉湯培養基 |
2.將菌懸液按照合適的比例加入到含有培養液的試管中,根據微生物的種類確定培養溫度和培養時間(表1.2)[1],進行菌種複蘇。培養後的微生物為第1代培養物。
表1.2 不同菌種的培養溫度和培養時間
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菌株種類 |
培養溫度 |
培養時間 |
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一般菌種 |
36 ℃±1 ℃ |
18 h~24 h |
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黑曲黴菌 |
30 ℃±1 ℃ |
42 h~48 h |
二、菌種傳代
1.根據菌株種類選擇合適的固體平皿培養板(如表2.1[1]注意是固體培養基),取第1代培養物進行劃線接種,並在適宜溫度和培養時間下培養。平皿上長出的菌落為第2代培養物。
表2.1 不同菌種適用的固體培養基
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菌株種類 |
培養液 |
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細菌 |
營養瓊脂培養基 |
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白色念珠菌 |
營養瓊脂培養基 |
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分枝杆菌 |
改良羅氏培養基或其他商品化分枝杆菌專用複合瓊脂培養基 |
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黑曲黴菌 |
麥芽浸膏瓊脂培養基 |
2.在含有第2代培養物的平皿上挑取典型菌落,接種到相應的培養基平皿或斜麵上,在適宜溫度和培養時間下培養(表2.2)[1],記為第3代培養物。
表2.2 不同菌種的培養溫度和培養時間
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菌株種類 |
培養溫度 |
培養時間 |
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一般菌種 |
36 ℃±1 ℃ |
18 h~24 h |
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分枝杆菌 |
36 ℃± 1℃ |
72 h |
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黑曲黴菌 |
30 ℃±1 ℃ |
42 h~48 h |
3.按照上述方法將菌種培養至所需代數即可。
三、流程示意圖

四、操作要點
1.選擇合適的培養基很重要。
2.全程無菌操作,避免汙染。
3.培養時間不要過長。
4.信息標注很重要(菌種名稱、菌種號、代數、傳代日期等)。
五、參考文獻
[1]WST683-2020 消毒試驗用微生物要求
具體的操作細節依據標準即可,小編就不贅述了。需要WS/T 683電子版的小夥伴記得關注公眾號後,加小編微信好友領取哦!
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