培養基是液體、半(ban)固(gu)體(ti)或(huo)固(gu)體(ti)形(xing)式(shi)的(de),含(han)天(tian)然(ran)或(huo)合(he)成(cheng)成(cheng)分(fen),用(yong)於(yu)保(bao)證(zheng)微(wei)生(sheng)物(wu)繁(fan)殖(zhi)或(huo)保(bao)持(chi)其(qi)活(huo)力(li)的(de)物(wu)質(zhi)。培(pei)養(yang)基(ji)的(de)製(zhi)備(bei)和(he)使(shi)用(yong)是(shi)微(wei)生(sheng)物(wu)實(shi)驗(yan)室(shi)檢(jian)測(ce)工(gong)作(zuo)的(de)重(zhong)要(yao)環(huan)節(jie),培(pei)養(yang)基(ji)自(zi)身(shen)質(zhi)量(liang)的(de)優(you)劣(lie)、保存是否得當、配製使用是否正確等都直接影響到檢測結果的準確性。
三、培養基的製備
1.培養基用水
培養基製備用水應使用電阻率不小於30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質的水,最好不使用離子交換器生產的去離子水。
2.稱量
稱量時要用專用的角匙,避免交叉汙染而影響檢驗結果;幹粉培養基易吸潮,如有條件,盡量在濕度較低的房間稱取培養基。
3.複水
複水時不得用銅鍋或鐵鍋,以防有離子混入培養基中,影響微生物的生長;容器的大小需大於複水後培養基總體積的2倍以上,避免在加熱溶解過程中,培養基溢出;含有瓊脂粉的培養基,在加熱溶解之前可以浸泡數分鍾;加(jia)熱(re)培(pei)養(yang)基(ji)時(shi)一(yi)定(ding)要(yao)進(jin)行(xing)攪(jiao)拌(ban),特(te)別(bie)是(shi)瓊(qiong)脂(zhi)類(lei)培(pei)養(yang)基(ji)。為(wei)避(bi)免(mian)燒(shao)焦(jiao)和(he)沸(fei)騰(teng)溢(yi)出(chu),對(dui)於(yu)少(shao)量(liang)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)最(zui)好(hao)使(shi)用(yong)沸(fei)水(shui)浴(yu)進(jin)行(xing)加(jia)熱(re)。燒(shao)糊(hu)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)營(ying)養(yang)物(wu)質(zhi)被(bei)破(po)壞(huai),並(bing)可(ke)產(chan)生(sheng)有(you)毒(du)物(wu)質(zhi),如(ru)發(fa)現(xian)焦(jiao)化(hua),或(huo)未(wei)溶(rong)解(jie)均(jun)勻(yun)前(qian)培(pei)養(yang)基(ji)有(you)溢(yi)出(chu),該(gai)培(pei)養(yang)基(ji)即(ji)不(bu)能(neng)使(shi)用(yong),應(ying)重(zhong)新(xin)製(zhi)備(bei)。對(dui)於(yu)瓊(qiong)脂(zhi)類(lei)培(pei)養(yang)基(ji)進(jin)行(xing)再(zai)融(rong)化(hua)時(shi)應(ying)使(shi)用(yong)沸(fei)水(shui)浴(yu)或(huo)流(liu)動(dong)蒸(zheng)汽(qi)進(jin)行(xing)加(jia)熱(re),最(zui)多(duo)隻(zhi)能(neng)加(jia)熱(re)兩(liang)次(ci),第(di)二(er)次(ci)再(zai)融(rong)化(hua)後(hou)仍(reng)未(wei)用(yong)完(wan)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)應(ying)棄(qi)去(qu)。
4.滅菌
一般培養基采用濕熱滅菌,即高壓蒸汽滅菌,通常是121℃ 15min,hantanghuoteshupeiyangji,anzhaoguojiabiaozhunhuoshengchanshangtigongdeshuomingmiejun。yipeizhihaodepeiyangjibixulijimiejun,bimianweishengwushengchangfanzhierxiaohaoyangfen,gaibianpeiyangjidesuanjiandu。gaowenkepohuaipeiyangjideyingyangchengfen,haihuishiqiongzhideningjiaoqiangduxiajiang,yincibixuyangekongzhimiejunwenduheshijian,bingqiebukezhongfumiejun。gaoyazhengqimiejunguodeyalibiaodengyaodingqijinxingjianding,bingdingqicaiyongshengwuzhishijunfahuohuaxuebiansezhipianduimiejunxiaoguojinxingyanzheng。
5.pH測定
微生物必須在適宜的pH範圍內才能正常生長繁殖或體現其生物特性。培養基配方要求的pH為滅菌或消毒後的pH值,即培養基使用前的pH,並應在25℃溫度下采用精密酸度計進行測量,固體瓊脂培養基應以特殊的膠體表麵測量電極進行測量。使用過程中,如果需要調整培養基的pH,應用1mol/LNa0H或 lmol/LHCL調整,注意不可反複調pH,否則會影響培養基的滲透壓。
6.配製好的培養基保存
滅(mie)菌(jun)以(yi)後(hou)培(pei)養(yang)基(ji)應(ying)該(gai)迅(xun)速(su)冷(leng)卻(que)至(zhi)所(suo)需(xu)溫(wen)度(du),避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)保(bao)存(cun)在(zai)滅(mie)菌(jun)鍋(guo)內(nei),造(zao)成(cheng)過(guo)度(du)滅(mie)菌(jun),影(ying)響(xiang)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)營(ying)養(yang)成(cheng)分(fen)或(huo)選(xuan)擇(ze)性(xing)效(xiao)果(guo)。所(suo)配(pei)製(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)量(liang),應(ying)該(gai)是(shi)在(zai)最(zui)長(chang)保(bao)存(cun)期(qi)限(xian)內(nei)正(zheng)好(hao)使(shi)用(yong)完(wan)。含(han)染(ran)料(liao)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)應(ying)閉(bi)光(guang)保(bao)存(cun);倒好的瓊脂平板如果配製的當天未使用完,應於冷藏保存,如果保存時間超過2天,應將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養基如果保存時間超過2個星期,應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發。
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