動物的選擇。常見的可以用來製備抗體的動物有：小鼠(Mouse)、大鼠(Rat)、豚鼠(Guinea pig)、倉鼠(Hamster)、兔(Rabbit)
、綿羊(Sheep)、山羊(Goat)、馬(Horse)、驢(Donkey)
、奶牛(Cow)，haiyoudehaiyongjihuozheyade。xuanzedongwuwufeijiushikaolvlianggewenti
，diyigewentishinengfoujuyoujiaohaodemianyixiaoguo。tebieshiduiyukangyuanshidanbaizhideqingkuang，weilebaozhengmianyichenggong，jiuyaoqiuxiuzhudongwuyukangyuanlaiyuanwuzhongzhijianxuyaoyoujiaoyuandeqinyuanguanxi

，ruguobutaiquedingqinyuanguanxideyuanjin，keyibakangyuandexulieyubeimianyidedongwuxiangyingdedanbaidexuliejinxingyigeduibi，youxianxuanzetongyuanxingjiaodidewuzhongjinxingmianyi。xuanzedongwudediergewentishikangxueqingchanliangdewenti，qishihenduoqingkuangxiaxuyaodexueqingliangjiuhendachengdushangxianzhilexuanzeyudi。genjushiyanmudebutong，kangxueqingdeyongliangyeyousuobutong。birushuozhixiangzuojiciWestern Blot隻需要一點點血清就夠了，此時就可以選用小鼠這樣的小動物
，而如果想生產二抗作為商業使用，則可選用羊、驢、馬這樣的大型動物，大型動物還可以進行多次放血，以提高動物的利用率。這裏列幾種常見的物種以及它們的血清產量：

物種	抗血清產量(含血液中其它成份)
小鼠	每次可采0.1-0.2ml ，每月可采兩次。也可以一次放血 ，產量約為1-1.5ml。
豚鼠	每次可采1-2ml，每月可采兩次。也可以一次放血，產量約為10-15ml。
兔	每次可采20ml，每月可采兩次。也可以一次放血 ，產量約為100ml。
山羊	每次可采血800ml，每月可采兩至三次。
馬	每次可采血3L ，每月可采兩次。一年可以采10L以上。

如果是製備單克隆抗體
，那選擇的餘地就更小了
，目前主流做單抗的動物主要有小鼠、兔、大鼠。而且除了Epitomics公司外，其它單位是不可以製備兔單抗的(已申請專利)。另(ling)外(wai)需(xu)要(yao)指(zhi)出(chu)的(de)是(shi)，實(shi)驗(yan)動(dong)物(wu)都(dou)有(you)相(xiang)應(ying)的(de)法(fa)律(lv)法(fa)規(gui)，在(zai)進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)之(zhi)前(qian)需(xu)要(yao)參(can)考(kao)相(xiang)應(ying)的(de)規(gui)定(ding)，隻(zhi)有(you)獲(huo)得(de)了(le)相(xiang)關(guan)的(de)資(zi)質(zhi)才(cai)可(ke)以(yi)進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)。實(shi)驗(yan)動(dong)物(wu)也(ye)由(you)相(xiang)應(ying)的(de)機(ji)構(gou)繁(fan)殖(zhi)和(he)保(bao)種(zhong)，選(xuan)擇(ze)動(dong)物(wu)應(ying)該(gai)使(shi)用(yong)特(te)定(ding)的(de)動(dong)物(wu)品(pin)係(xi)
，以(yi)保(bao)證(zheng)實(shi)驗(yan)的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)。

免疫佐劑(Adjuvant)。免疫佐劑主要有兩個作用：yishicijijitiyinqimianyifanying，lingyigezuoyongshijiangkangyuanbaoqilaiyanhuanshifang，qidaoxiangdangyuduocicijidexiaoguo。keyiyonglaizhibeikangtidemianyizuojizhuyaoyouzhemejilei：鋁鹽、油乳、脂質體
、CpG、細胞因子
、經過處理的微生物或其代謝物。關於它們各自的特性我這裏就不作詳細的介紹了
，有興趣的可以看看這篇文獻：《我國免疫佐劑的研究進展》(劉悅竹，2008)。目前應用得比較廣泛的商品化佐劑主要有三種：弗氏佐劑(Freund's Adjuvant)、Ribi Adjuvant、Titermax。弗氏佐劑是應用最多的佐劑

，分為弗氏完全佐劑( Freund's Complet Adjuvant,FCA)和弗氏不完佐劑(Freund's Incomplete Adjuvant,FIA)

， 弗(fu)氏(shi)完(wan)全(quan)佐(zuo)劑(ji)由(you)石(shi)蠟(la)油(you)和(he)羊(yang)毛(mao)脂(zhi)以(yi)及(ji)結(jie)核(he)分(fen)枝(zhi)杆(gan)菌(jun)的(de)細(xi)胞(bao)壁(bi)成(cheng)分(fen)組(zu)成(cheng)
，它(ta)是(shi)細(xi)胞(bao)免(mian)疫(yi)的(de)刺(ci)激(ji)劑(ji)。弗(fu)氏(shi)不(bu)完(wan)全(quan)佐(zuo)劑(ji)不(bu)含(han)分(fen)枝(zhi)杆(gan)菌(jun)，其(qi)它(ta)同(tong)弗(fu)氏(shi)完(wan)全(quan)佐(zuo)劑(ji)。弗(fu)氏(shi)不(bu)完(wan)全(quan)佐(zuo)劑(ji)僅(jin)能(neng)刺(ci)激(ji)體(ti)液(ye)免(mian)疫(yi)。通(tong)常(chang)在(zai)免(mian)疫(yi)動(dong)物(wu)時(shi)，先(xian)使(shi)用(yong)弗(fu)氏(shi)完(wan)全(quan)佐(zuo)劑(ji)進(jin)行(xing)首(shou)次(ci)免(mian)疫(yi)
，後(hou)用(yong)弗(fu)氏(shi)不(bu)完(wan)全(quan)佐(zuo)劑(ji)作(zuo)為(wei)加(jia)強(qiang)免(mian)疫(yi)
，二(er)者(zhe)使(shi)用(yong)前(qian)都(dou)需(xu)要(yao)與(yu)抗(kang)原(yuan)進(jin)行(xing)完(wan)全(quan)乳(ru)化(hua)。弗(fu)氏(shi)佐(zuo)劑(ji)會(hui)引(yin)起(qi)動(dong)物(wu)局(ju)部(bu)肉(rou)芽(ya)腫(zhong)或(huo)者(zhe)無(wu)菌(jun)性(xing)膿(nong)腫(zhong)，人(ren)體(ti)接(jie)觸(chu)可(ke)能(neng)導(dao)致(zhi)風(feng)濕(shi)病(bing)，誤(wu)入(ru)眼(yan)睛(jing)可(ke)能(neng)造(zao)成(cheng)失(shi)明(ming)，因(yin)此(ci)在(zai)操(cao)作(zuo)時(shi)需(xu)要(yao)注(zhu)意(yi)防(fang)護(hu)。

Ribi佐zuo劑ji則ze采cai用yong可ke被bei代dai謝xie的de角jiao鯊sha烯xi代dai替ti礦kuang物wu油you

，同tong時shi它ta也ye含han有you分fen枝zhi杆gan菌jun的de成cheng份fen，與yu弗fu氏shi佐zuo劑ji相xiang比bi，它ta毒du性xing小xiao，可ke以yi減jian小xiao動dong物wu的de局ju部bu接jie種zhong反fan應ying，但dan是shi同tong樣yang可ke以yi產chan生sheng高gao親qin和he力li的de抗kang體ti(抗原為蛋白質)。

Titermax不像弗氏佐劑和Ribinayangshiyoubaoshuidejiegou，ershiyoujiaoshaxihefeilizixingqianduanjuhewuzucheng，cijuhewushiyoushushuixingdejuyangbingxiheqinshuixingdejuyangyixixingchengdeyifenziduojutizuchengde。youyutongshicunzaiqinshuibufenheshushuibufen
，gukeyihekangyuanxingchengwendingderuzhuoye。Titermax毒性低
，但是價格貴
，而且對於弱免疫原性的抗原能否引起機體的免疫反應尚存在爭議。

另外向大家推薦一款國產的佐劑，由北京康碧泉公司研製，商品名叫Quickantibody，此佐劑不含蛋白質成分
，而且免疫方式簡單，無需乳化抗原(隻需要簡單混合即可免疫)

，同時免疫周期短，抗原用量少，推薦大家使用。

佐劑和抗原的乳化 大部分佐劑在使用前都需要乳化，很多網友問起過乳化方法的問題
，在這裏我簡單地向大家介紹幾種我個人覺得比較好的方法吧。 xianlailejieyixiazenmeyangcaisuanruhuahaole。duiyufushizuojizheleiyoubaoshuijiegoudezuojilaishuo
，ruhuawanchenghou，keyiquyidiruhuaguodeyedidizaiyibeiqingshuili，kankanciyedishifoufensan，ruguobufensanzebiaomingruhuawanquan
，fouzehaiyaojiezheruhua。guanyuruhuadefangfa

，bijiaohaoyongdeyousanzhong：第一種比較費時間，就是將抗原和佐劑放在EP管guan裏li
，然ran後hou用yong槍qiang反fan複fu吹chui打da，然ran後hou放fang在zai渦wo旋xuan儀yi上shang反fan複fu渦wo旋xuan。第di二er種zhong方fang法fa就jiu是shi將jiang抗kang原yuan和he佐zuo劑ji用yong槍qiang混hun合he後hou放fang在zai超chao聲sheng破po碎sui儀yi下xia超chao聲sheng



，這zhe個ge方fang法fa比bi較jiao快kuai速su，但dan是shi需xu要yao一yi個ge配pei有you小xiao探tan頭tou的de超chao聲sheng破po碎sui儀yi。第di三san種zhong方fang法fa也ye就jiu最zui簡jian單dan最zui常chang用yong的de方fang法fa了le：準備好兩個玻璃注射器和一個魯爾接頭，將抗原和佐劑用槍在EP管guan內nei混hun合he好hao，然ran後hou吸xi入ru一yi個ge注zhu射she器qi內nei，再zai用yong魯lu爾er接jie頭tou將jiang另ling一yi個ge注zhu射she器qi與yu它ta接jie上shang，把ba抗kang原yuan和he佐zuo劑ji來lai回hui在zai兩liang個ge注zhu射she器qi內nei推tui動dong
，兩liang分fen鍾zhong左zuo右you就jiu可ke以yi完wan成cheng乳ru化hua工gong作zuo。如ru果guo沒mei有you魯lu爾er接jie頭tou
，也ye可ke以yi用yong一yi小xiao截jie一yi次ci性xing輸shu液ye管guan將jiang兩liang個ge注zhu射she器qi連lian接jie，不bu過guo有you網wang友you反fan映ying這zhe個ge不bu是shi很hen好hao用yong。

免疫方案(1)免疫部位：常見的免疫部位有皮下、肌肉、腹腔、腳墊、靜脈、脾pi髒zang。大da型xing動dong物wu多duo為wei皮pi下xia或huo肌ji肉rou免mian疫yi，小xiao型xing動dong物wu可ke采cai用yong後hou麵mian的de免mian疫yi部bu位wei。製zhi備bei多duo抗kang時shi，整zheng個ge流liu程cheng可ke采cai用yong同tong一yi種zhong免mian疫yi部bu位wei，也ye可ke以yi多duo種zhong部bu位wei聯lian合he使shi用yong，但dan是shi初chu次ci免mian疫yi都dou建jian議yi在zai皮pi下xia進jin行xing。在zai製zhi備bei單dan抗kang時shi，甚shen至zhi還hai可ke以yi將jiang脾pi髒zang取qu出chu進jin行xing體ti外wai免mian疫yi，脾pi髒zang免mian疫yi最zui大da的de優you勢shi就jiu是shi可ke以yi大da大da減jian小xiao免mian疫yi劑ji量liang並bing縮suo短duan周zhou期qi，而er且qie還hai可ke以yi解jie決jue高gao同tong源yuan性xing蛋dan白bai無wu法fa免mian疫yi成cheng功gong的de問wen題ti。但dan體ti外wai免mian疫yi不bu能neng形xing成cheng完wan整zheng的de免mian疫yi應ying答da反fan應ying，抗kang體ti無wu法fa成cheng熟shu
，所suo產chan生sheng的de抗kang體ti全quan部bu為weiIgM，不能產生其它類型的抗體。對體外免疫感興趣的朋友可以看看這篇文獻：《體外免疫法製備單克隆抗體的研究》(陸芹章
，1994)。(2)免疫形式。抗原通常需要與佐劑混合充分後才進行免疫
，也有改進不用佐劑的方法，比如可以將抗原跑SDS-PAGE膠，然後將膠進行磨碎充分即可進行免疫
，這樣可以將抗原(蛋白質類抗原)純化
，而且還可以延緩抗原的釋放。也有人將抗原從SDS-PAGE膠上轉移到NC膜上或者PVDFmoshangranhoujiangqimosuijinxingmianyi，haiyourenjiangkangyuanlianjiedaoqiongzhikelidengguxiangzaitishang，zheyangkeyizengjiakangyuandekelihuachengdu，yekeyizengdakangyuanyujitimianyiyingdaxitongdejiechu。(3)免疫劑量。免疫劑量根據被免疫的動物、免疫部位以及抗原的本身的特性相差很遠。如果用兔製備多抗，首次免疫(皮下)一般在200-1000ug之間，對於大鼠
，首次免疫(皮下)為100-500ug，對於小鼠， 首次免疫(皮下)一般在10-100ug之間，加強免疫一般為首次免疫劑量的20%-50%。尾靜脈或脾內方式加強則可減至幾微克至十微克。對於體型比較大的動物可酌量增加(不能按照體重比增加)
，具體的用量請大家參考文獻。 (4)免疫周期。首次免疫後，一般在10-15d左右抗體的產量會達到一個峰值，但是此時抗體親和力不夠
，大部分都是IGM，因此需要進行加強免疫，加強免疫一般在首次免疫後三至四周進行。第二次
、第三次加強免疫間隔可以縮短至2-3zhou。zhegeshijianbutainengchangyebunengtaiduan
，taiduanqibudaojiaqiangdexiaoguo，erqiehairongyiyinqimianyinaishou，ruguoxianggetaijiu，zeqianmiandemianyijiangshiquchubucijidexiaoguo。ruguoshicaiyongpineimianyi，zekeyizaiyidingchengxushangsuoduanmianyizhouqi。