原 理

 

將血清脂蛋白用脂類染料(如蘇丹黑或油紅O等)進行預染。再將預染過的血清置於瓊脂糖凝膠板上進行電泳分離。通電後，脂蛋白向正極移動，並分離為幾個區帶。

 

操 作

 

1．預染血清：血清0.2ml加蘇丹黑染色液0.2ml於小試管中
，混合後置37℃水浴染色30分鍾，然後離心(2000轉/分，約5分鍾)。

 

2．製備瓊脂糖凝膠板：將已配製的0.45%瓊脂糖凝膠於沸水浴中加熱融化，用吸管吸取凝膠溶液澆注載玻片

，每片2.5ml，靜置約半小時後凝固(天熱時需延長，可放冰箱數分鍾加速凝固)。

 

3．點加血清：已凝固的瓊脂糖凝膠板的一端約2cmchu，yongqiekoudaopianchuizhiqieruningjiaohoulijiquchu，ranhouyongtongsixiaochijiangchangfangxiaotiaoningjiaoquchu。yixiaopianlvzhixiganxiaocaozhongshuifen
，yongxuesesuxiguanxiqujingguoyurandexueqingyue15μl

，注入凝膠板上的小槽內。

 

4．電泳：將(jiang)加(jia)過(guo)血(xue)清(qing)的(de)凝(ning)膠(jiao)板(ban)平(ping)行(xing)放(fang)入(ru)電(dian)泳(yong)槽(cao)中(zhong)，樣(yang)品(pin)應(ying)在(zai)陰(yin)極(ji)一(yi)端(duan)。兩(liang)塊(kuai)三(san)層(ceng)紗(sha)布(bu)於(yu)巴(ba)比(bi)妥(tuo)緩(huan)衝(chong)液(ye)中(zhong)浸(jin)潤(run)，然(ran)後(hou)輕(qing)輕(qing)緊(jin)密(mi)貼(tie)在(zai)凝(ning)膠(jiao)板(ban)兩(liang)端(duan)，紗(sha)布(bu)的(de)另(ling)一(yi)端(duan)浸(jin)於(yu)電(dian)泳(yong)槽(cao)內(nei)的(de)巴(ba)比(bi)妥(tuo)緩(huan)衝(chong)液(ye)(注意：此電極緩衝液不能用三羥甲烷緩衝液代替)。接通電源，電壓為120~130V，每片電流為3~4mA。約經電泳15至55分鍾，即可見分離之色帶。

 

結果及臨床意義

 

1．正常人血清脂蛋白可出現三條區帶
，從負極到正極依次為β-脂蛋白(最深)、前β-脂蛋白(最淺)
、α-脂蛋白(比前β-脂蛋白略深些)，在原點處應無乳糜微粒。

 

2．如果前β-脂蛋白比α-脂蛋白深，結合血清甘油三酯明顯升高和膽固醇正常或略高，可以定為Ⅳ型高脂蛋白血症。

 

3．如果β-脂蛋白區帶比正常血清明顯深染者，同時結合血清總膽固醇明顯增高、甘油三酯正常者為Ⅱa型；若結合血清總膽固醇增高而甘油三酯略高的前β略溶者為Ⅱb型。

 

4．結果β-和前β-兩區帶分離不開連在一起稱“寬β區帶”
，結合血清甘油三酯和膽固醇均有所增高，可定為Ⅲ型。

 

5．如果原點出現乳糜微粒，β，前β均正常或減低，結合血清甘油三酯明顯升高，可定為Ⅰ型。

 

注意事項

 

1．電泳樣品要求為新鮮的空腹血清。

 

2．每一塊凝膠上可平行挖兩條小槽，因而可加兩個樣品。

 

3．如(ru)果(guo)用(yong)一(yi)形(xing)狀(zhuang)大(da)小(xiao)和(he)小(xiao)槽(cao)一(yi)樣(yang)的(de)有(you)機(ji)玻(bo)璃(li)片(pian)
，在(zai)瓊(qiong)脂(zhi)糖(tang)膠(jiao)凝(ning)固(gu)前(qian)固(gu)定(ding)於(yu)適(shi)當(dang)位(wei)子(zi)上(shang)，當(dang)凝(ning)固(gu)後(hou)取(qu)出(chu)有(you)機(ji)玻(bo)璃(li)片(pian)，凝(ning)膠(jiao)板(ban)上(shang)留(liu)下(xia)小(xiao)槽(cao)可(ke)直(zhi)接(jie)加(jia)樣(yang)，不(bu)需(xu)挖(wa)槽(cao)。

 

4．如果需要保留電泳樣本
，可將電泳後之凝膠板(連同玻片)放於清水中浸泡脫鹽2小時，然後放烘箱(80℃左右)烘幹即可。

 

試劑與器材

 

1．巴比緩衝液(pH8.6，離子強度0.075)：為電極緩衝液

 

巴比妥鈉15.4g

，巴比妥2.76g，EDTA酸0.292g，加水溶解後加水至1000ml

 

2．三羥甲基氨基甲烷緩衝液(pH8.6)為凝膠緩衝液

 

三甲基氨基甲烷1.212g，EDTA酸0.29g，NaCl 15.85g加水溶解後加水至1000ml

 

3．瓊脂糖凝膠

 

瓊脂糖0.45g，三痙甲基氨基甲烷緩衝液50ml
，水50ml

 

加熱至沸，待瓊脂糖溶解後立即停止加熱。

 

4．挖槽工具製作

 

切口刀：刀口長15mm的刀片，中央夾一有機玻璃或木片
，用螺絲固定，使兩刀片相距1.5mm。挖槽小匙：用直徑1.5mm的銅絲約6cm長，一端錘成扁平，用砂紙磨光。

5．電泳槽和電泳儀：同血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳的儀器。