電(dian)穿(chuan)孔(kong)法(fa)常(chang)用(yong)來(lai)轉(zhuan)染(ran)如(ru)植(zhi)物(wu)原(yuan)生(sheng)質(zhi)體(ti)這(zhe)樣(yang)的(de)常(chang)規(gui)方(fang)法(fa)不(bu)容(rong)易(yi)轉(zhuan)染(ran)的(de)細(xi)胞(bao)。電(dian)穿(chuan)孔(kong)靠(kao)脈(mai)衝(chong)電(dian)流(liu)在(zai)細(xi)胞(bao)膜(mo)上(shang)打(da)孔(kong)而(er)將(jiang)核(he)酸(suan)導(dao)入(ru)細(xi)胞(bao)內(nei)。導(dao)入(ru)的(de)效(xiao)率(lv)與(yu)脈(mai)衝(chong)的(de)強(qiang)度(du)和(he)持(chi)續(xu)時(shi)間(jian)有(you)關(guan)係(xi),基(ji)因(yin)槍(qiang)依(yi)靠(kao)攜(xie)帶(dai)了(le)核(he)酸(suan)的(de)高(gao)速(su)粒(li)子(zi)而(er)將(jiang)核(he)酸(suan)導(dao)入(ru)細(xi)胞(bao)內(nei),這(zhe)種(zhong)方(fang)法(fa)適(shi)用(yong)於(yu)培(pei)養(yang)的(de)細(xi)胞(bao)核(he)在(zai)體(ti)的(de)細(xi)胞(bao).
DEAE葡聚糖是最早應用哺乳動物細胞(小鼠細胞、大鼠細胞各類傳代細胞等)轉染試劑之一,DEAE-葡聚糖是陽離子多聚物,它與帶負電的核酸結合後接近細胞膜而被攝取,用DEAE-葡聚糖轉染成功地用用於瞬時表達的研究,但用於穩定轉染卻不是十分可靠。
磷酸鈣共沉澱法因為試劑易取得、價格便宜而被廣泛用於瞬時轉染和穩定轉染的研究,先將DNA和CaCl2混合,然後加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸鈣沉澱,最後把含有沉澱的混懸液加到培養的細胞上,通過細胞胞膜的內吞作用攝入DNA。磷酸鈣似乎還通過抑製血清中和細胞內的核酸酶活性而保護外源DNA免受降解.
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磷酸鈣法 穩轉,瞬轉 不適用於原代細胞,操作簡便但重複性差,有些細胞不適用;
陽離子脂質體法 穩轉,瞬轉所有細胞 適用性廣,轉染效率高,重複性好,但轉染時需除血清。轉染效果隨細胞類型變化大;
電穿孔法 穩轉,瞬轉所有細胞 適用性廣但細胞致死率高,DNA和細胞用量大;
DEAE-右旋糖苷法 瞬轉 相對簡便、結果可重複,但對細胞有一定的毒副作用,轉染時需除血清;
病毒介導法 穩轉 可用於難轉染的細胞、原代細胞,體內細胞等;
腺病毒 瞬時轉染特定宿主 可用於難轉染的細胞需考慮安全因素;
Biolistic顆粒傳遞法瞬轉 可用於人的表皮細胞,纖維原細胞,淋巴細胞係以及原代細胞;
顯微注射法 穩轉,瞬轉 轉染細胞數有限,多用於工程改造或轉基因動物的胚胎細胞。
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