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優化ELISA的de重zhong點dian之zhi一yi在zai於yu洗xi滌di。洗xi滌di步bu驟zhou可ke降jiang低di未wei結jie合he抗kang體ti所suo引yin起qi的de背bei景jing信xin號hao，從cong而er增zeng加jia分fen析xi的de信xin噪zao比bi。每mei一yi步bu之zhi間jian的de洗xi滌di確que保bao隻zhi有you特te異yi的de結jie合he事shi件jian被bei保bao留liu，在zai最zui後hou一yi步bu產chan生sheng信xin號hao。不bu充chong分fen的de洗xi滌di會hui導dao致zhi差cha異yi和he高gao背bei景jing，從cong而er帶dai來lai不bu理li想xiang的de結jie果guo。在zai做zuoELISA實驗時，洗板操作合乎要求，能得到正確、可靠的結果。
ELISA試驗過程中洗板機洗板人為因素少，速度快，條件恒定，但是使用洗板機洗板時應注意以下三個關鍵點。
1.洗滌參數
zhuyaodecanshushixidiliang。zidongxibanjihuifenpeixidiye。ruguonizhiqianzaoyuguogaobeijing，namebuyaoyouyu，jiangxidiliangtiaoweigao，zuihaoshibibaobeitijigenggao。taishaodexidiyehuirangyibufenfenxibiaomianxidibudao，congermingxianzengjiabeijing。suoyoufanyingkongdexidiliangbixuxiangtong。
ELISA試劑盒的使用手冊中列出包被量。我們建議使用350µl洗滌液進行洗滌，以便清潔整個反應孔的壁。一般來說，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。
2.洗滌次數
影(ying)響(xiang)洗(xi)滌(di)效(xiao)果(guo)的(de)主(zhu)要(yao)參(can)數(shu)是(shi)洗(xi)滌(di)循(xun)環(huan)的(de)量(liang)。當(dang)然(ran)，洗(xi)滌(di)次(ci)數(shu)越(yue)多(duo)，背(bei)景(jing)越(yue)低(di)。然(ran)而(er)，太(tai)多(duo)次(ci)的(de)洗(xi)滌(di)會(hui)降(jiang)低(di)信(xin)號(hao)強(qiang)度(du)，使(shi)其(qi)難(nan)以(yi)測(ce)定(ding)。通(tong)常(chang)的(de)做(zuo)法(fa)是(shi)在(zai)每(mei)次(ci)抗(kang)體(ti)或(huo)抗(kang)原(yuan)孵(fu)育(yu)後(hou)重(zhong)複(fu)洗(xi)滌(di)三(san)次(ci)。不(bu)過(guo)，一(yi)般(ban)而(er)言(yan)，包(bao)被(bei)平(ping)板(ban)需(xu)要(yao)的(de)洗(xi)滌(di)次(ci)數(shu)比(bi)用(yong)戶(hu)包(bao)被(bei)的(de)平(ping)板(ban)要(yao)少(shao)。對(dui)於(yu)用(yong)戶(hu)包(bao)被(bei)的(de)ELISA板，必須優化洗滌次數。
控製洗滌量和洗滌次數的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說，96孔板的每個孔能容納330至460 µl。不過，有些自動化洗板機可設置程序，分配遠遠超出這個量的洗滌液，比如1 ml。它是如何做到的呢?其(qi)實(shi)很(hen)簡(jian)單(dan)，就(jiu)是(shi)在(zai)分(fen)液(ye)的(de)同(tong)時(shi)打(da)開(kai)吸(xi)液(ye)功(gong)能(neng)。換(huan)句(ju)話(hua)說(shuo)，隨(sui)著(zhe)分(fen)液(ye)器(qi)分(fen)配(pei)更(geng)多(duo)的(de)液(ye)體(ti)，抽(chou)吸(xi)器(qi)也(ye)將(jiang)液(ye)體(ti)吸(xi)出(chu)。這(zhe)種(zhong)技(ji)術(shu)能(neng)增(zeng)加(jia)洗(xi)滌(di)量(liang)，但(dan)不(bu)會(hui)溢(yi)出(chu)到(dao)其(qi)他(ta)孔(kong)中(zhong)。
3.抽吸
還有一些參數會影響洗滌步驟的效果。這些參數包括吸液高度和吸入位置，這兩者都能調整，以降低背景(殘留量)和差異。
殘留液體中包含未結合的抗原或抗體，它們會增加背景信號。殘留量越小，殘留液體越少，轉移到下一步的幹擾液體也就越少。
吸液高度會明顯影響殘留量;如(ru)果(guo)洗(xi)滌(di)吸(xi)頭(tou)與(yu)反(fan)應(ying)孔(kong)底(di)部(bu)的(de)距(ju)離(li)稍(shao)大(da)，那(na)就(jiu)會(hui)讓(rang)殘(can)留(liu)量(liang)急(ji)劇(ju)增(zeng)加(jia)。反(fan)之(zhi)，如(ru)果(guo)洗(xi)滌(di)吸(xi)頭(tou)壓(ya)著(zhe)反(fan)應(ying)孔(kong)底(di)部(bu)，那(na)麼(me)也(ye)會(hui)使(shi)吸(xi)液(ye)效(xiao)率(lv)降(jiang)低(di)，殘(can)留(liu)量(liang)增(zeng)加(jia)。
目前的洗板機一般使用兩種類型的洗頭：剛gang性xing和he浮fu動dong。浮fu動dong洗xi頭tou中zhong的de吸xi頭tou可ke在zai洗xi滌di過guo程cheng中zhong自zi由you上shang下xia移yi動dong，而er剛gang性xing洗xi頭tou則ze固gu定ding在zai適shi當dang的de位wei置zhi。使shi用yong剛gang性xing洗xi頭tou的de洗xi滌di操cao作zuo在zai優you化hua起qi來lai更geng為wei複fu雜za，因yin為wei你ni需xu要yao非fei常chang仔zai細xi地di調tiao整zheng吸xi液ye高gao度du。如ru果guo你ni們men實shi驗yan室shi使shi用yong幾ji種zhong不bu同tong的de板ban，那na可ke能neng會hui很hen耗hao時shi。在zai使shi用yong浮fu動dong洗xi頭tou時shi，吸xi頭tou會hui降jiang到dao反fan應ying孔kong的de底di部bu。調tiao整zheng高gao度du就jiu不bu是shi很hen重zhong要yao，因yin此ci洗xi頭tou會hui下xia降jiang到dao底di部bu。
抽吸的位置也對殘留量有著重要影響;如果每個孔隻使用一個抽吸點(這很常見，因為更快)，那na麼me抽chou吸xi的de位wei置zhi需xu要yao優you化hua。最zui佳jia的de位wei置zhi取qu決jue於yu洗xi頭tou的de性xing狀zhuang，但dan它ta幾ji乎hu不bu在zai反fan應ying孔kong的de中zhong間jian，即ji使shi這zhe是shi所suo有you洗xi頭tou最zui常chang見jian的de默mo認ren位wei置zhi。一yi般ban來lai說shuo，最zui佳jia位wei置zhi在zai孔kong中zhong間jian與yu孔kong壁bi之zhi間jian的de某mou處chu。
反應孔的形狀也會影響殘留量。C形底(平底圓角)的微孔板一般會比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。
