了解生化分析儀基本參數的原理，有利於儀器

、試劑的正確使用
，有助於正確分析和處理測定數據。但是，配套係統的原裝分析參數不宜更改；采用非儀器配套的試劑及校準品體係時，參數修改要慎重，對於不同儀器、不同類型的反應分析程序，所顯示的人機對話分析參數信息有所不同。

一、反應監測時間

對dui於yu終zhong點dian法fa來lai說shuo，讀du取qu反fan應ying達da到dao平ping衡heng時shi的de吸xi光guang度du計ji算suan樣yang品pin中zhong待dai測ce物wu的de濃nong度du。對dui於yu連lian續xu監jian測ce法fa來lai說shuo
，要yao注zhu意yi觀guan察cha反fan應ying進jin程cheng曲qu線xian，從cong而er確que定ding反fan應ying的de預yu孵fu育yu期qi
，延yan遲chi時shi間jian、連續監測的時段。對於一級或偽一級反應來說，連續監測的時間是一級反應的動態期的吸光度
；duiyujiyulingjifanyingdemeicuihuahuoxingnongdusulvfaceding，lianxujiancedeshilingjixianxingfanyingqidexiguangdu。duiyulianxujiancefalaishuo，dongtaifanyingqideshijianyuechang，yueshiyongyulinchuangyingyong，duiyuyimeiweigongjudedaixiewumeicudonglicedingfa，yaozengjiadongtaifanyingqi
，jiyanchangfanyingdadaopinghengdeshijian，kezaifanyingtixizhongjiarujingzhengxingyizhiji，zheyanghaikeyitigaocedingdexianxingfanwei，duiyumeicuihuahuoxingnongdulianxujiancefalaishuo，yidingyaozhuyixianxingfanyingshijian，youdemei，liru
，yiliudaidingxiandanjianweidiwudexueqingjiaxingdanjianzhimeisulvcedingfa，xianxingfanyingshijianzhiyou90秒。對於連續監測法來說，在監測期至少應讀4個點(3個△A)。

多數全自動生化分析儀可以在整個測定反應周期連續監測(如HITACHI 7170常規測定周期10分鍾、監測34點，OLYMPUS AU 600固定周期8分15秒
、監測27點)，但反應監測時間是指該時間內的測定讀數要用於結果計算。它的設置與加樣點、加試劑點(包括R1、R2……)、監測時間(讀數點)、讀數間隔時間及試劑樣品比例等有關，要結合方法學
，兼顧權衡。

1．反應時間(Reaction Time)  指(zhi)儀(yi)器(qi)的(de)一(yi)個(ge)分(fen)析(xi)周(zhou)期(qi)中(zhong)，試(shi)劑(ji)和(he)樣(yang)品(pin)混(hun)合(he)最(zui)末(mo)一(yi)點(dian)測(ce)定(ding)讀(du)數(shu)時(shi)間(jian)。它(ta)對(dui)終(zhong)點(dian)法(fa)尤(you)其(qi)重(zhong)要(yao)，是(shi)終(zhong)點(dian)法(fa)的(de)瓶(ping)頸(jing)。有(you)的(de)儀(yi)器(qi)多(duo)個(ge)反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)可(ke)選(xuan)L如Hl—TACHI 7170)，須預先選定。多數儀器10分鍾左右，這對試劑提出了較高要求。不少終點法試劑(尤其手工法試劑)反應時間常常也在lO分fen鍾zhong上shang下xia，測ce定ding時shi間jian沒mei有you餘yu地di
，當dang樣yang品pin濃nong度du高gao或huo試shi劑ji質zhi量liang下xia降jiang時shi

，均jun可ke致zhi測ce定ding結jie果guo偏pian低di。因yin此ci，終zhong點dian法fa不bu宜yi采cai用yong標biao明ming反fan應ying時shi間jian接jie近jin和he長chang於yu儀yi器qi最zui大da反fan應ying時shi間jian的de試shi劑ji盒he。否fou則ze，必bi須xu用yong接jie近jin測ce定ding範fan圍wei上shang限xian的de高gao濃nong度du質zhi控kong血xue清qing監jian測ce。

2．監測時間(讀數點)hedushujiangeshijiangeleixingyiqibujinyizhi。lixinshishenghuayidushujiangeshijianduan
，jianceshijianyeduan。liudongshishenghuayidushujiangeshijianyibanjiaochang。fenlishishenghuayiyibanjianceshijian10分鍾左右，間隔10-30秒讀數一次。有的儀器在整個測定反應周期全程讀數，有的隻讀取指定時間(點)的吸光度。   

3．加試劑點采用雙試劑時
，加R2點決定R1與樣品的反應時間，也決定R2與R1及樣品的反應時間。一般儀器各5分鍾左右。HITACHI 7170有4個加試劑點，若采用雙試劑，各5分鍾
，則加R2設在第3加試劑點。

4．反應監測時間還要考慮延遲時間的長短
、測定物質的濃度範圍及相關臨床價值和工作效率等因素。

二、延遲時間

延遲時間(Delay Time)指試劑與樣品混合後到監測開始之間的時間。一般用於兩點法和速率法，某些情況下也用於終點法。終點法應選擇反應趨於平衡的時間(穩定期或平衡期)zuoceding
，cedingdianqianjisuoweidefuyuqi。sulvfadexianxingfanyingqizhiqianjiyanchiqi。zhengquexuanzeyanchishijiandechangduan
，youliyuzhunqueceding
，jianshaoshiyanwucha。shezhiyibangenjushijihedeshuomingshu，haiyingkaolvbenshideyiqitedianhegongzuochengxu。

1．儀器特點  比如，半自動生化儀多為流動比色池，要考慮泵速、進樣管長短

、反應液黏稠度及混合情況
，以及室溫、反應液溫度同反應要求溫度間的溫差等。全自動生化儀的測定讀數設置方式不同

，直接以“秒”設置
，或以測定點設置、測定點間隔時間不一樣，需要靈活掌握。

2．試劑及方法學

(1)試劑組成在酶活性的連續監測法時，若試劑含工具酶數量多、偶聯反應多，則激活反應時間一般較長，延遲時間也較長
，如肌酸激酶(NAC法)延遲時間常設置120-180秒；若試劑中底物經待測酶催化，其產物可以直接測定的
，則延遲時間較短，如 -穀氨酰轉移酶(GGT)設定30-60秒。同一項目同一方法，但試劑配方不同，其反應快慢等特征也可能不同，如白蛋白測定。白蛋白與溴甲酚綠(BCG)為即時反應，10秒鍾內已完成
，其後球蛋白等也將與BCG發生反應，所以孵育時間不能延長。但在同一測定時間，BcG濃度


、緩衝液種類
、pH和表麵活性劑不J司的試劑，測定結果可能差異明顯。

(2)樣品異常成分幹擾有的試驗項目需要用工具酶將內源性代謝產物耗盡，比如丙氨酸氨基轉移酶活性測定試劑中須有足量的乳酸脫氫酶(LDH)。如果使用單試劑，正常血清樣品延遲時間60秒即可；但當內源性酮酸增多(如酮症酸中毒)時
，試劑內LDH常常不能在60秒內完全將其清除
，剩餘酮酸會進入監測期幹擾測定
，使測定結果偏高，所以延遲時間應增至90～120秒。采用雙試劑，則可在加入R1後即進入預孵育期。

(3)方法學要求比如肌酐(Jaffe法)測定的特異性不強，一般認為反應前20秒左右為乙酰乙酸等快反應幹擾物呈色
，後約80～100秒為蛋白質等慢反應假肌酐呈色
，20~60秒(miao)肌(ji)酐(gan)呈(cheng)色(se)反(fan)應(ying)占(zhan)主(zhu)導(dao)地(di)位(wei)。采(cai)用(yong)兩(liang)點(dian)法(fa)或(huo)速(su)率(lv)法(fa)可(ke)減(jian)少(shao)幹(gan)擾(rao)
，但(dan)具(ju)體(ti)取(qu)多(duo)長(chang)的(de)延(yan)遲(chi)時(shi)間(jian)
，應(ying)根(gen)據(ju)試(shi)劑(ji)和(he)儀(yi)器(qi)讀(du)數(shu)特(te)點(dian)，以(yi)幹(gan)擾(rao)試(shi)驗(yan)等(deng)方(fang)法(fa)來(lai)評(ping)價(jia)決(jue)定(ding)。

3.工作程序 要(yao)在(zai)保(bao)證(zheng)準(zhun)確(que)性(xing)的(de)前(qian)提(ti)下(xia)，合(he)理(li)設(she)置(zhi)參(can)數(shu)，提(ti)高(gao)工(gong)作(zuo)效(xiao)率(lv)。最(zui)突(tu)出(chu)的(de)例(li)子(zi)是(shi)半(ban)自(zi)動(dong)生(sheng)化(hua)儀(yi)上(shang)酶(mei)活(huo)性(xing)連(lian)續(xu)監(jian)測(ce)法(fa)的(de)延(yan)遲(chi)時(shi)間(jian)設(she)定(ding)。由(you)於(yu)隻(zhi)能(neng)單(dan)份(fen)樣(yang)品(pin)逐(zhu)一(yi)測(ce)定(ding)
，若(ruo)延(yan)遲(chi)時(shi)問(wen)全(quan)部(bu)設(she)置(zhi)在(zai)儀(yi)器(qi)內(nei)，每(mei)個(ge)延(yan)遲(chi)時(shi)間(jian)加(jia)監(jian)測(ce)時(shi)間(jian)至(zhi)少(shao)1分鍾以上，守候時間較長。工作量大時，可以根據儀器控溫、加樣及讀數和試劑特點，以及室溫情況
，將延遲時問挪一部分到機外
，套式操作，但要確保機內延遲時間不要進入線性反應期。

4．要(yao)兼(jian)顧(gu)延(yan)遲(chi)時(shi)間(jian)和(he)監(jian)測(ce)時(shi)間(jian)反(fan)應(ying)時(shi)間(jian)是(shi)有(you)限(xian)製(zhi)的(de)。在(zai)速(su)率(lv)法(fa)和(he)兩(liang)點(dian)法(fa)中(zhong)
，延(yan)長(chang)延(yan)遲(chi)時(shi)間(jian)必(bi)然(ran)縮(suo)短(duan)線(xian)性(xing)監(jian)測(ce)期(qi)，減(jian)少(shao)測(ce)定(ding)的(de)線(xian)性(xing)範(fan)圍(wei)
，也(ye)易(yi)發(fa)生(sheng)底(di)物(wu)耗(hao)盡(jin)。

三、樣品量、試劑量與稀釋量

有關參數包括樣品量
、試劑量、稀釋水量、最小反應體積和最大比色杯容量等。如HITACHI7170反應體積180~380µl
，最大體積570µ l。BT 224半自動生化儀流動比色池容積33µl
，吸液量200～990µl，最適體積500µl。

1．最小反應體積   在zai儀yi器qi光guang度du讀du數shu要yao用yong於yu結jie果guo計ji算suan時shi
，反fan應ying液ye液ye麵mian高gao度du不bu低di於yu光guang度du計ji光guang徑jing的de最zui小xiao體ti積ji。它ta保bao證zheng儀yi器qi的de正zheng確que讀du數shu和he計ji算suan，也ye是shi儀yi器qi測ce定ding精jing度du和he經jing濟ji性xing的de指zhi針zhen之zhi一yi。在zai有you的de儀yi器qi中zhong，它ta以yi反fan應ying體ti積ji的de下xia限xian表biao示shi，有you的de則ze專zhuan門men標biao明ming最zui小xiao反fan應ying體ti積ji。在zai單dan試shi劑ji測ce定ding中zhong，樣yang品pin與yu試shi劑ji的de總zong體ti積ji不bu得de少shao於yu此ci參can數shu。在zai雙shuang試shi劑ji測ce定ding中zhong，若ruoR1與樣品的反應讀數不納入結果計算。R1自勺加液量可不考慮此參數，如連續監測法
；否則應考慮它對結果的影響，如終點法在加R2之前讀數

，並以此來扣除試劑或樣品空白時。

在半自動生化儀中，最適吸人量相當於最少反應體積。它與進液管道長度
、流liu動dong比bi色se池chi容rong積ji
，吸xi液ye泵beng抽chou吸xi力li大da小xiao和he液ye體ti黏nian稠chou度du有you關guan，它ta要yao保bao證zheng光guang度du檢jian測ce不bu受shou空kong泡pao和he前qian後hou樣yang品pin攜xie帶dai汙wu染ran的de幹gan擾rao。因yin此ci，吸xi人ren體ti積ji不bu能neng任ren意yi降jiang低di
，必bi要yao時shi，應ying加jia大da反fan應ying液ye量liang和he吸xi人ren量liang。

2．最大比色杯容量   這zhe個ge參can數shu含han義yi明ming確que。在zai有you的de儀yi器qi中zhong，它ta以yi反fan應ying體ti積ji的de上shang限xian表biao示shi，有you的de則ze專zhuan門men標biao明ming最zui大da比bi色se杯bei容rong量liang。反fan應ying液ye超chao過guo此ci體ti積ji，將jiang致zhi液ye體ti外wai溢yi，儀yi器qi測ce定ding係xi統tong被bei汙wu損sun。

3．樣品試劑比例樣品與試劑的比例(SV：RV)，也可表示為樣品體積分數——樣品體積與反應液總體積的比值(SV／TV)
，是方法學基本參數。酶活力測定中，樣品在總體積中的比例應在10％以下。一般來說，待測物質在樣品中含量低的、生理波動範圍大的，樣品用量較大。如Trinder反應測定血清葡萄糖、膽固醇等，樣品試劑比例多為1：1OO，測定血尿酸或高密度脂蛋白膽固醇，常增加為1：50；ALT和AST的樣品試劑比例多為1：1O至1：20。方法靈敏、吸光度高的實驗方法，樣品試劑比例小,如白蛋白BCG法，樣品試劑比例常為1：200。肌酐Jaffe氏法監測時間短、吸光度值較低，樣品試劑比例多為1：10。一般應以試劑說明為準
，不宜輕易改動。

(1)改動樣品試劑比例
，影響一係列方法學參數。若比例增大
，則線性範圍縮小，線性反應時間縮短，樣品內源性幹擾、基質效應增加、旁路反應會增強，方法特異性也下降。若比例減少，檢測信號偏低

，信噪比(噪音／信號)增大，當儀器精度不高時
，會加大測量誤差。

(2)改動樣品試劑比例，對某些反應有影響。如堿性磷酸酶(AI_P)，有文獻報道：當樣品試劑比例從1：25降至1：50時，酶活力測定值增加，再低於1：50時不再增加。這一效應可能是較高稀釋度下AIJP多聚體解聚的結果。體液樣品稀釋也可能對測定結果產生影響：④大多數蛋白質在濃溶液中的分子構象比稀溶液中穩定
，樣品稀釋可影響酶的穩定性。(2)降(jiang)低(di)樣(yang)品(pin)中(zhong)內(nei)源(yuan)性(xing)抑(yi)製(zhi)劑(ji)或(huo)激(ji)動(dong)劑(ji)的(de)濃(nong)度(du)，如(ru)以(yi)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)稀(xi)釋(shi)血(xue)清(qing)
，可(ke)能(neng)因(yin)降(jiang)低(di)血(xue)清(qing)中(zhong)澱(dian)粉(fen)酶(mei)的(de)激(ji)動(dong)劑(ji)氯(lv)離(li)子(zi)的(de)濃(nong)度(du)，致(zhi)測(ce)定(ding)澱(dian)粉(fen)酶(mei)結(jie)果(guo)偏(pian)低(di)；隨血清稀釋倍數增加
，肌酸激酶測定活力增加，可能與降低樣品中AMt，、胱氨酸等內源性抑製劑有關。

(3)雙試劑時要兼顧R1、R2和樣品三者的比例

，尤其不宜改動試劑間的比例。R2要考慮儀器規定的加液最小體積，同一試劑瓶死體積下分液量小而浪費大的經濟問題等。

4．稀釋(水)量在加樣或加試劑時
，加入去離子水或可以指定的液體。它的主要用途有兩個。一是用於濃縮試劑的稀釋，或樣品
、校準品的稀釋。二是在樣品加量小的時候用來衝洗樣品探針

，減小攜帶誤差；但(dan)用(yong)量(liang)不(bu)宜(yi)太(tai)多(duo)，以(yi)免(mian)稀(xi)釋(shi)試(shi)劑(ji)影(ying)響(xiang)反(fan)應(ying)。要(yao)把(ba)稀(xi)釋(shi)水(shui)量(liang)納(na)入(ru)樣(yang)品(pin)試(shi)劑(ji)比(bi)例(li)和(he)反(fan)應(ying)液(ye)總(zong)體(ti)積(ji)考(kao)慮(lv)。必(bi)要(yao)時(shi)，幹(gan)粉(fen)試(shi)劑(ji)複(fu)溶(rong)也(ye)要(yao)考(kao)慮(lv)此(ci)因(yin)素(su)。

四
、試劑空白(Reagent blank)監測參數

無wu樣yang品pin或huo以yi水shui代dai替ti樣yang品pin在zai反fan應ying過guo程cheng中zhong觀guan察cha試shi劑ji空kong白bai值zhi或huo其qi變bian化hua情qing況kuang，主zhu要yao用yong於yu監jian測ce試shi劑ji質zhi量liang及ji儀yi器qi穩wen定ding性xing，利li用yong試shi劑ji空kong白bai對dui試shi劑ji本ben身shen或huo反fan應ying漂piao移yi引yin起qi的de誤wu差cha進jin行xing補bu償chang，用yong以yi校xiao正zheng△A或△A/min。它與測定波長、光徑大小、不同試劑及配方和樣品試劑比例等有關，不能盲目套用
，必要時宜實際測定。

1．shijixiguangdushangxianhexiaxiandingdianjianceshijidexiguangdu。tachangyongguidingbochangjiguangjingxiadexiguangduzhibiaoshi。yiqideshijikongbaijiancedianyinyiqihecedingfangfadebutongeryouchayi。zhongdianfachangzaiPO點(dian)讀(du)數(shu)

，連(lian)續(xu)監(jian)測(ce)法(fa)常(chang)以(yi)反(fan)應(ying)監(jian)測(ce)起(qi)始(shi)點(dian)來(lai)判(pan)讀(du)。儀(yi)器(qi)在(zai)試(shi)劑(ji)空(kong)白(bai)檢(jian)測(ce)及(ji)相(xiang)關(guan)的(de)校(xiao)準(zhun)測(ce)定(ding)時(shi)，若(ruo)監(jian)測(ce)到(dao)超(chao)過(guo)此(ci)參(can)數(shu)的(de)限(xian)值(zhi)，則(ze)提(ti)示(shi)試(shi)劑(ji)失(shi)效(xiao)或(huo)校(xiao)準(zhun)無(wu)效(xiao)。反(fan)應(ying)吸(xi)光(guang)度(du)向(xiang)上(shang)的(de)試(shi)驗(yan)取(qu)上(shang)限(xian)值(zhi)：如Trinder反應以酚或2-羥-3，5-二氯苯磺酸等和4-氨基安替比林作用，生成紅色色素，試劑有一定的自發氧化
，其試劑一般要求試劑吸光度上限≤0. 1-0. 4。以結合型硝基苯衍生物作為底物的ALP和GGT常要求≤0.6~0.8。反應吸光度向下的試驗取下限值：如以NADH或NADPH為輔酶的ALT和Urea(紫外法)等試驗，一般要求試劑吸光度下限≥1．0。

2．試shi劑ji空kong白bai速su率lv顧gu名ming思si義yi，它ta是shi在zai反fan應ying過guo程cheng中zhong對dui試shi劑ji空kong白bai的de變bian化hua速su率lv作zuo連lian續xu監jian測ce

，其qi數shu值zhi在zai樣yang品pin測ce定ding結jie果guo中zhong自zi動dong扣kou除chu。試shi劑ji中zhong可ke能neng混hun有you的de其qi他ta雜za酶mei或huo幹gan擾rao物wu對dui試shi劑ji空kong白bai速su率lv有you影ying響xiang。在zai酶mei促cu反fan應ying中zhong，試shi劑ji空kong白bai速su率lv也ye是shi試shi劑ji在zai監jian測ce過guo程cheng中zhong底di物wu自zi發fa降jiang解jie的de結jie果guo。底di物wu為wei還hai原yuan型xing輔fu酶mei者zhe，本ben身shen不bu穩wen定ding而er分fen解jie，多duo呈cheng下xia降jiang趨qu勢shi
；yixiaojibenfenhuobenandeyanshengwuzuodiwu，zaijianxinghuanjingzhongzifashuijiechengbeicewuzhi，duochengshangshengqushi。cicanshuzhuyaoyongyulianxujiancefa。yibanrenweimeihuoxingcedingdeshijikongbaisulv(△A/min)應≤0. 001~0.003。由於試劑空白速率與儀器檢測下限、正常參考範圍下限等指標有關
，有時也以濃度單位表示。要根據K值、儀器穩定性

、方法允許變異而定。例如，ALT或AST40U/L以下活力濃度的分析誤差應≤10％，其試劑空白速率應≤4．0U／L。一些儀器的程序參數中沒有此參數
，但我們應在試劑空白的測定資料中關注它，若資料波動大，須查找試劑或儀器原因。

3．試shi劑ji空kong白bai的de日ri常chang監jian測ce測ce定ding方fang法fa設she置zhi了le試shi劑ji空kong白bai的de項xiang目mu，都dou要yao先xian行xing作zuo試shi劑ji空kong白bai測ce定ding
，在zai樣yang品pin測ce定ding計ji算suan中zhong自zi動dong扣kou除chu。由you於yu試shi劑ji空kong白bai不bu是shi在zai每mei一yi個ge樣yang品pin測ce定ding中zhong實shi時shi測ce定ding並bing扣kou除chu，當dang樣yang品pin測ce定ding中zhong試shi劑ji的de變bian化hua在zai未wei達da到dao參can數shu設she置zhi限xian值zhi時shi不bu易yi發fa現xian
，試shi劑ji空kong白bai扣kou除chu會hui產chan生sheng誤wu差cha。所suo以yi

，應ying根gen據ju試shi劑ji的de穩wen定ding性xing確que定ding試shi劑ji空kong白bai及ji相xiang關guan的de校xiao準zhun的de測ce定ding頻pin率lv。連lian續xu監jian測ce法fa的de試shi劑ji應ying每mei天tian(尤其在換另瓶或另批號試劑時)常規測定此參數。對樣品的異常結果．也應及時對其測定吸光度資料(包括與試劑空白有關的資料
，例如PO點讀數)觀察分析。

4.有(you)的(de)半(ban)自(zi)動(dong)生(sheng)化(hua)儀(yi)沒(mei)有(you)試(shi)劑(ji)吸(xi)光(guang)度(du)上(shang)限(xian)和(he)下(xia)限(xian)設(she)定(ding)

，但(dan)一(yi)般(ban)在(zai)測(ce)定(ding)屏(ping)幕(mu)都(dou)顯(xian)示(shi)初(chu)始(shi)吸(xi)光(guang)度(du)值(zhi)
，應(ying)人(ren)工(gong)加(jia)以(yi)判(pan)斷(duan)。酶(mei)活(huo)力(li)測(ce)定(ding)結(jie)果(guo)呈(cheng)負(fu)值(zhi)，有(you)時(shi)可(ke)能(neng)與(yu)試(shi)劑(ji)空(kong)白(bai)錯(cuo)誤(wu)有(you)關(guan)。

5．shijixiguangdushangxianhexiaxianbushishijizhiliangdeweiyizhizhen。yinci，yidingdexiaozhunpinlvheshineizhikongshizhiliangbaozhengdebixushouduan。womenzaishijigongzuozhongjiuyudaomeihuolicedingdeshijikongbaishujuzaiguidingxianzhinei，danzhikongwucedingjieguolianxupiandi，bingrenjieguoyinmeitianbiaobenshaoernanyipanduan，zuihoufaxianshishijizhiliangxiajiang。

五、波長的選擇及測定模式

波長（Wave 1ength)的正確選擇有利於提高測定的靈敏度和減少測定誤差。光度學方法有單波長和雙波長之分
，有的儀器可用三波長、甚至多波長
，以及兩波長比率等。有的儀器可作導數光譜分析。單波長測定易受樣品溶血、黃疸
、脂(zhi)濁(zhuo)等(deng)因(yin)素(su)幹(gan)擾(rao)。雙(shuang)波(bo)長(chang)測(ce)定(ding)可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)副(fu)波(bo)長(chang)加(jia)以(yi)修(xiu)正(zheng)，減(jian)少(shao)甚(shen)至(zhi)消(xiao)除(chu)幹(gan)擾(rao)因(yin)素(su)，提(ti)高(gao)測(ce)定(ding)準(zhun)確(que)性(xing)。采(cai)用(yong)同(tong)光(guang)束(shu)雙(shuang)波(bo)長(chang)，亦(yi)有(you)利(li)於(yu)排(pai)除(chu)光(guang)源(yuan)強(qiang)度(du)變(bian)化(hua)對(dui)結(jie)果(guo)的(de)影(ying)響(xiang)。

1．測定波長選擇有三個主要條件：

(1)待測物質在該波長下的光吸收最大。

(2)其吸收峰宜較寬而鈍，而不是處於尖峰或陡肩，一般不選光譜中的末端吸收峰，換句話說，該吸收峰處的吸光度隨波長變化較小。

(3)常chang見jian幹gan擾rao物wu在zai該gai波bo長chang下xia的de光guang吸xi收shou最zui小xiao。試shi劑ji盒he說shuo明ming一yi般ban已yi提ti供gong波bo長chang參can數shu。實shi際ji波bo長chang選xuan擇ze需xu要yao了le解jie待dai測ce物wu質zhi和he幹gan擾rao組zu分fen對dui不bu同tong波bo長chang單dan色se光guang的de吸xi收shou程cheng度du，即ji以yi波bo長chang為wei橫heng坐zuo標biao


、吸光度為縱坐標作吸收光譜曲線(光吸收曲線)。

采用透射免疫比濁法
，免疫複合物大小約35~100mn之間，於波長290~410nm下有最大吸收峰，常取340nm
；如用膠乳增強免疫濁度法，理想的檢測波長可增至可見光區。

2．雙波長測定當待測物質與幹擾組分的吸收光譜互相重疊
、出現非特異光吸收
，或因反應液混濁出現光散射時，可以采用雙波長(或多波長)測定。雙波長測定的原則是根據幹擾組分和待測物質吸收光譜的峰形特征
，選擇兩個波長和 
，shiganraozufenzaizhelianggebochangchudexiguangxishuxiangdeng，ershidaicewuzhizailiangbochangchudexiguangxishuyouxianzhuchabie。yiliangbochangfenbiecedingfenxirongyedexiguangdu，yilianggexiguangduzhizhicha(△A)計算。雙波長選擇常見：血紅蛋白340nm和380nm波長吸光度相同，以NADH或NADPH作為測定底物或產物的試驗常采用340／380nm；有的也．采用340／405nm。ALP和GGT常使405/476nm
，Trinder反應多選取520／600nm或550/660nm．免疫比濁常選用340／700nm等。

連續監測法中
，要注意雙波長測定有兩種類型的機型：主波長全程監測副波長單點監測
，和雙波長全程監測。不僅因為後者的準確性優於前者，而且因為酶活性測定的K值計算與波長及摩爾吸光係數有關，更顯重要。

副波長單點監測：試劑和樣品混合後，雙波長隻測一點，此後隻用主波長連續監測；計算時，全部x主吸光度值均減去同一λ副吸光度值。K值計算代入主波長摩爾吸光係數即可。機型如Monarch 1000 
，Technicon RA 1000等。

雙波長全程監測：全程每～測定點均用雙波長同測，並各自用λ主吸光度值減去λ副吸光度值。因為所測指示酶或產物在λ副波長時也存在一定的吸光係數，K值計算代入的摩爾吸光係數值應采用ε主減去ε副。如NADH的ε 為6．22×10 ， 為1．33×10 ，ALP產物ε 為18.5x×10 ，ε 為0.2×10 很小
；GGT產物在副波長處無吸光係數。