蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)測(ce)定(ding)的(de)方(fang)法(fa)有(you)很(hen)多(duo),但(dan)每(mei)種(zhong)方(fang)法(fa)都(dou)有(you)其(qi)特(te)點(dian)和(he)局(ju)限(xian)性(xing),因(yin)而(er)需(xu)要(yao)在(zai)了(le)解(jie)各(ge)種(zhong)方(fang)法(fa)的(de)基(ji)礎(chu)上(shang)根(gen)據(ju)不(bu)同(tong)情(qing)況(kuang)選(xuan)用(yong)恰(qia)當(dang)的(de)方(fang)法(fa),以(yi)滿(man)足(zu)不同的要求。例如凱氏定氮法結果精確,但操作複雜,用於大批量樣品的測試則不太合適;Lowry法精確度較高,但是比較費時,且每步的時間要求相對嚴格;Bradford法靈敏簡便,但易受去垢劑的影響;BCA法以其試劑穩定,抗幹擾能力強,結果穩定,靈敏度高而受歡迎。
3. Lowry法:
原理:在堿性條件下,蛋白質中的肽鍵與銅結合生成複合物。folin―酚試劑中的磷鉬酸鹽―磷鎢酸鹽被蛋白質中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原,產生深蘭色(鉬蘭和鎢蘭的混合物)。在一定的條件下,蘭色深度與蛋白的量成正比。通過比色法測定溶液中蛋白質的含量。
適合於測定20mg/L-400mg/L含量的蛋白質溶液,可檢測的蛋白質量低達5mg,通常測定範圍是20~250mg。
優點:靈敏度高,可檢測低至1μg/mL的蛋白質;對於大部分蛋白質都有較好的線性關係。
缺點:
1.操作相對較複雜,需要多個步驟;
2.幹擾物比較多,不僅還原劑和去垢劑會產生幹擾,酚類、檸檬酸、硫酸銨、tris緩衝液、甘氨酸、糖類、甘油等均有幹擾作用。
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