3.內標(Internal Control,IC)
neibiaoshizhizaitongyifanyingguanzhongyubaxuliegongtongkuozengdeyiduanfeibaxuliefenzi。neibiaoyouliangzhongxingshi,yizhongshishiyongtianranyangpinzhonghanyoudeneicanjiyinzuoweineibiao,lingyizhongshirengongtianjiadeneibiao。neibiaodezuidatedianshiyubaxuliegongtongkuozeng,erqitadeduizhaodoushidulikuozeng。
3.1 內參基因
通常它們在各組織和細胞中的表達相對恒定,在檢測基因的表達水平變化時常用它來做參照物。內參基因通常是持家基因(house-keeping gene)因為其表達水平受環境因素影響較小,而且在個體各個生長階段的幾乎全部組織中持續表達變化很小。常用的內參基因包括GAPDH、β-actin(BETA-actin)、18sRNA、B2M、HPRT和TBP等。
內(nei)參(can)基(ji)因(yin)的(de)優(you)點(dian)是(shi)與(yu)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)靶(ba)基(ji)因(yin)經(jing)曆(li)全(quan)相(xiang)同(tong)的(de)處(chu)理(li)程(cheng)序(xu),可(ke)以(yi)監(jian)控(kong)采(cai)樣(yang),運(yun)輸(shu),核(he)酸(suan)提(ti)取(qu)和(he)擴(kuo)增(zeng)的(de)全(quan)部(bu)過(guo)程(cheng)。缺(que)點(dian)是(shi)不(bu)同(tong)物(wu)種(zhong),不(bu)同(tong)生(sheng)理(li)狀(zhuang)態(tai)下(xia),不(bu)同(tong)組(zu)織(zhi)中(zhong)的(de)內(nei)參(can)基(ji)因(yin)存(cun)在(zai)一(yi)定(ding)的(de)差(cha)異(yi)。如(ru)果(guo)樣(yang)品(pin)類(lei)型(xing)是(shi)口(kou)腔(qiang)液(ye),咽(yan)拭(shi)子(zi)等(deng)樣(yang)品(pin),內(nei)參(can)基(ji)因(yin)的(de)量(liang)很(hen)低(di)可(ke)能(neng)導(dao)致(zhi)實(shi)驗(yan)不(bu)成(cheng)立(li)。如(ru)果(guo)檢(jian)測(ce)的(de)是(shi)環(huan)境(jing)樣(yang)品(pin)則(ze)內(nei)參(can)基(ji)因(yin)可(ke)能(neng)全(quan)失(shi)效(xiao)。
3.2人工內標
添tian加jia一yi種zhong不bu會hui幹gan擾rao靶ba序xu列lie擴kuo增zeng的de人ren工gong合he成cheng的de內nei標biao。現xian在zai國guo外wai的de診zhen斷duan試shi劑ji盒he大da部bu分fen都dou會hui將jiang內nei標biao直zhi接jie添tian加jia在zai反fan應ying液ye中zhong與yu模mo板ban一yi起qi擴kuo增zeng,但dan是shi這zhe樣yang的de內nei標biao不bu能neng監jian控kong采cai樣yang,運yun輸shu和he核he酸suan提ti取qu的de過guo程cheng。
還hai有you另ling一yi種zhong形xing式shi的de內nei標biao,使shi用yong人ren工gong合he成cheng的de假jia病bing毒du,在zai核he酸suan提ti取qu前qian在zai每mei一yi份fen樣yang品pin中zhong加jia入ru等deng量liang的de內nei標biao,這zhe樣yang就jiu可ke以yi監jian控kong樣yang品pin的de提ti取qu到dao擴kuo增zeng的de過guo程cheng。但dan是shi由you於yu是shi人ren工gong添tian加jia到dao樣yang品pin中zhong,仍reng然ran不bu能neng監jian控kong胞bao內nei細xi菌jun病bing毒du的de釋shi放fang情qing況kuang。
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