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在一般分光光度計的使用說明書上，要求儀器預熱時間約20分鍾；若是帶微處理器的分光光度計，開機後儀器自動進入自檢(初始化)狀態，約需10分鍾左右。
在分光光度計預熱這個環節上，很多使用者或多或少存在問題，如開機隻預熱電路係統 (不調節波長、打開吸收池暗箱蓋預熱等)或認為初始化過程就是預熱等。
對帶微處理器有自檢功能的分光光度計，開機後儀器自檢 (初始化)結束後，在測定窗口上，設置所需波長值， 用一個吸收池裝上純淨水置於光路上，調 “0000A”後，預熱儀器，當儀器顯示讀數不再變化後即可進行測定。
對於紫外可見分光光度計，由於有雙光源 (鎢燈與氘燈)，為了延長燈的使用壽命，開機自檢完成後可以關掉測定時不用的光源燈。
分光光度計在測定過程中，發現同一個溶液在不同時間裏其測定結果不同，即重複性不好，其原因是什麼?排除測定錯誤因素外，可能原因有：
(1)儀器預熱時間不夠或預熱方法不對所造成，應延長預熱時間或采用正確的預熱方法。
(2)光電轉換器 (如光電管)因長時間使用其光電轉換 效率發生了變化導致。這時標準溶液與待測溶液的吸光度都 同樣變低，在相對定量時對結果影響很小。但是對這類儀器，一般建議連續使用時間不應超過3h，若需長時間使用，最好間歇30min 。
樣品室的主要作用就是放置樣品，液體測試一般使用比色皿，比色皿分為石英和玻璃兩種，玻璃比色皿主要用於可見區（320nm-2500nm），在紫外區有吸收，不適用於紫外區，石英比色皿可以用於紫外可見近紅外區（190nm-2500nm），另外有些透明有機玻璃也可以用作吸收池。
（1）比色皿上方通常會有字母標識，各型號標識稍有差別，玻璃比色皿口沿處有“G”(Glass 玻璃) ，而石英比色皿口沿處有“Q”(Quartz 石英) 或者 “S”（Silicide石英玻璃）。
（2）使用紫外可見光分光光度計來鑒別玻璃、石英比色皿：現行國家檢定規程規定石英比色皿在250nm下吸光度應小於0.07abs，若吸光度大於0.07abs 則為玻璃比色皿。
使用需要配對的比色皿，在可適用的相同波長下，以空氣或者純水為介質，使用透光率T進行測量，將每組比色皿中的一隻透射率調為100%，然後測量另外一隻透光率，凡透射率之差不超過0.5%T，即可配對使用。
比bi色se皿min是shi分fen析xi過guo程cheng中zhong對dui結jie果guo有you很hen大da影ying響xiang的de一yi個ge因yin素su，比bi色se皿min汙wu染ran之zhi後hou對dui測ce試shi的de影ying響xiang更geng大da，會hui使shi測ce試shi不bu穩wen定ding甚shen至zhi結jie果guo不bu準zhun，因yin此ci完wan成cheng樣yang品pin測ce定ding之zhi後hou，必bi須xu徹che底di清qing洗xi比bi色se皿min，下xia列lie清qing洗xi流liu程cheng僅jin供gong參can考kao：蒸餾水清洗――乙醇清洗――幹燥。
如果比色皿被汙染，請按照如下流程清洗：在洗滌劑中浸泡約10min（30-50℃）――蒸餾水清洗――再加有少量雙氧水的稀硝酸中浸泡約30min――蒸餾水清洗――幹燥。
注：如果比色皿被有機物汙染，請先用如丙酮等有機溶劑將有機物洗去並用蒸餾水清洗。
值得注意的是：fenxishiyanchangyongdegesuanxiyebuyiyongyubiseminxidi，zheshiyinweidaishuidebiseminzaigaixiyezhongkenenghuichanshengreliang，zhishibiseminjiaojiemianliekaiersunhuai。tongshijingxiyexidihoudebiseminhaikenengcancunweiliangge(鉻在紫外區有吸收) ，因此會影響實驗的測定。
1、使用的吸收池必須潔淨，並注意配對使用。量瓶、移液吸管均應校正、洗淨後使用。
2、取吸收池時，手指應拿毛玻璃麵的兩側，裝盛樣品以池體的4/5weidu，shiyonghuifaxingrongyeshiyingjiagai，touguangmianyaoyongcajingzhiyoushangerxiacashiganjing，jianshiyingwurongjicanliu。xishouchifangruyangpinshishiyingzhuyifangxiangxiangtong。yonghouyongrongjihuoshuichongxiganjing，liangganfangchenbaocun。
3、供試品溶液濃度除各該品種已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之間為宜。
4、測定時除另有規定外，應以配製供試品溶液的同批溶劑為空白對照，采用1cm石英吸收池，在規定的吸收峰±2nm以yi內nei，測ce幾ji個ge點dian的de吸xi收shou度du或huo由you儀yi器qi在zai規gui定ding的de波bo長chang附fu近jin自zi動dong掃sao描miao測ce定ding，以yi核he對dui供gong試shi品pin的de吸xi收shou峰feng位wei置zhi是shi否fou正zheng確que，並bing以yi吸xi收shou度du最zui大da的de波bo長chang作zuo為wei測ce定ding波bo長chang，除chu另ling有you規gui定ding外wai吸xi收shou度du最zui大da波bo長chang應ying在zai該gai品pin種zhong項xiang下xia規gui定ding的de測ce定ding波bo長chang±2nm以內。
5、供試品應取2份，如為對照品比較法，對照品一般也應取2份。並進行平行操作，每份結果與平均值的偏差應在±0.5%以內。
6、選xuan用yong儀yi器qi的de狹xia縫feng寬kuan度du應ying小xiao於yu供gong試shi品pin吸xi收shou帶dai的de半ban寬kuan度du，否fou則ze測ce得de的de吸xi收shou度du值zhi會hui偏pian低di，狹xia縫feng寬kuan度du的de選xuan擇ze應ying以yi減jian少shao狹xia縫feng寬kuan度du時shi供gong試shi品pin的de吸xi收shou度du不bu再zai增zeng加jia為wei準zhun，對dui於yu大da部bu分fen被bei測ce品pin種zhong，可ke以yi使shi用yong2nm縫寬。
1、若實驗中需大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡後，重新校正“0”和“100%”點。然後再測量。
2、指針式儀器在未接通電源時，電表的指針必須位於零刻度上。若不是這種情況，需進行機械調零。
3、比色皿使用完畢後，請立即用蒸餾水衝洗幹淨，並用幹淨柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表麵光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
4、操作人員不應輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。
5、一般的分光光度計，由於其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點是放大倍數大，因而可以用於檢測微弱光 電信號，而不能用來檢測強光。否則容易產生信號漂移，靈敏度下降。針對其上述特點，在維修、使用此類儀器時應注意不讓光電倍增管長時間暴露於光下，因此在 預熱時，應打開比色皿蓋或使用擋光杆，避免長時間照射使其性能漂移而導致工作不穩。
6、放大器靈敏度換擋後，必須重新調零。
7、比色杯必須配套使用，否則將使測試結果失去意義。在進行每次測試前均應進行比較。具體方法如下：
分別向被測的兩隻杯子裏注入同樣的溶液，把儀器置於某一波長處。 將某一個池的透射比值調至100%，測量其它各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的範圍內則可以配套使用，若超出此範圍應考慮其對測試結果的影響。
