01紫外吸收檢測器
紫外吸收(UV)檢測器是目前HPLC應用最廣泛的檢測器。其工作原理是朗伯-比(bi)爾(er)定(ding)律(lv)。這(zhe)種(zhong)檢(jian)測(ce)器(qi)靈(ling)敏(min)度(du)高(gao),線(xian)性(xing)範(fan)圍(wei)寬(kuan),對(dui)流(liu)速(su)和(he)溫(wen)度(du)變(bian)化(hua)不(bu)敏(min)感(gan),可(ke)用(yong)於(yu)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)分(fen)離(li)。紫(zi)外(wai)吸(xi)收(shou)檢(jian)測(ce)要(yao)求(qiu)被(bei)檢(jian)測(ce)樣(yang)品(pin)組(zu)分(fen)有(you)紫(zi)外(wai)-kejianguangxishou,ershiyongdeliudongxiangwuxishou,huozaibeicezufenxishoubochangchuwuxishou。yibanxuanzezaiyufenxiwuyouzuidaxishoudebochangchujinxingjiance,yihuodezuidalingminduhekangganraonengli。zaimeiyouzuidaxishoushi,kecaiyongmoduanxishou。jiancebochangdexuanzechuqujueyudaicewuzhidechengfenhefenzijiegouwai,haibixukaolvliudongxiangzucheng、gongcunzufenganraodengyinsu。tebieshigezhongrongjidouyouyidingdetouguobochangxiaxianzhi,chaoguozhegebochang,rongjidexishouhuibiandehenqiang,yizhiyubunenghenhaodicechudaicewuzhidexishouqiangdu。xiabiaoliechuleHPLC中一些常用的溶劑透過波長的下限。
02光電二極管陣列檢測器
光電二極管陣列檢測器(photodiode array detector,PDAD)又稱快速掃描紫外可見分光度計,是一種新型的光吸收檢測器。它采用光電二極管陣列作為檢測元件,形成多通道並行工作,同時它對光柵分離的所有波長的光信號進行檢測,然後將其入射到陣列接收機,然後快速掃描二極管陣列來采集數據,得到吸收值(A)是保留時間(tR)和波長(L)函(han)數(shu)的(de)三(san)維(wei)色(se)譜(pu)光(guang)譜(pu)圖(tu)。由(you)此(ci)可(ke)及(ji)時(shi)觀(guan)察(cha)與(yu)每(mei)一(yi)組(zu)分(fen)的(de)色(se)譜(pu)圖(tu)相(xiang)應(ying)的(de)光(guang)譜(pu)數(shu)據(ju),從(cong)而(er)迅(xun)速(su)決(jue)定(ding)具(ju)有(you)最(zui)佳(jia)選(xuan)擇(ze)性(xing)和(he)靈(ling)敏(min)度(du)的(de)波(bo)長(chang)。計(ji)算(suan)機(ji)化(hua)的(de)數(shu)據(ju)處(chu)理(li),還(hai)可(ke)進(jin)行(xing)色(se)譜(pu)峰(feng)光(guang)譜(pu)相(xiang)似(si)性(xing)比(bi)較(jiao)、峰純度檢測及利用譜圖庫對樣品進行檢索等,為定性、定量分析提供更豐富的信息。
單(dan)光(guang)束(shu)二(er)極(ji)管(guan)陣(zhen)列(lie)檢(jian)測(ce)器(qi),光(guang)源(yuan)發(fa)出(chu)的(de)光(guang)先(xian)通(tong)過(guo)檢(jian)測(ce)池(chi),透(tou)射(she)光(guang)由(you)全(quan)息(xi)光(guang)柵(zha)色(se)散(san)成(cheng)多(duo)色(se)光(guang),射(she)到(dao)陣(zhen)列(lie)元(yuan)件(jian)上(shang),使(shi)所(suo)有(you)波(bo)長(chang)的(de)光(guang)在(zai)接(jie)收(shou)器(qi)上(shang)同(tong)時(shi)被(bei)檢(jian)測(ce)。陣(zhen)列(lie)式(shi)接(jie)收(shou)器(qi)上(shang)的(de)光(guang)信(xin)號(hao)用(yong)電(dian)子(zi)學(xue)的(de)方(fang)法(fa)快(kuai)速(su)掃(sao)描(miao)提(ti)取(qu)出(chu)來(lai),每(mei)幅(fu)圖(tu)像(xiang)僅(jin)需(xu)要(yao)10ms,遠遠超過色譜流出峰的速度,因此可隨峰掃描。
03熒光檢測器
熒光檢測器(fluorescence detector, FD)是一種高靈敏度、youxuanzexingdejianceqi,kejiancenengchanshengyingguangdehuahewu。yingguangjianceqideyuanliyuyingguangfenxifaxiangtong,huahewushouziwaiguangjifahou,fashechubijifaguangbochanggengchangdeguang,chengweiyingguanghuofasheguang。xuduoyaowuheshengminghuoxingwuzhijuyoutianranyingguang,能直接檢測,某些不發熒光的物質可通過化學衍生化生成熒光衍生物,然後進行熒光檢測。其最小檢測濃度可達0.1ng/mL,適用於痕量分析。一般情況下,熒光檢測器的靈敏度比紫外檢測器約高2個ge數shu量liang級ji,但dan其qi線xian性xing範fan圍wei不bu如ru紫zi外wai檢jian測ce器qi寬kuan。近jin年nian來lai,采cai用yong激ji光guang作zuo為wei熒ying光guang檢jian測ce器qi的de光guang源yuan而er產chan生sheng的de激ji光guang誘you導dao熒ying光guang檢jian測ce器qi極ji大da地di增zeng強qiang了le熒ying光guang檢jian測ce的de信xin噪zao比bi,因yin而er具ju有you很hen高gao的de靈ling敏min度du,在zai痕hen量liang和he超chao痕hen量liang分fen析xi中zhong得de到dao廣guang泛fan應ying用yong。
04示差折光檢測器
示差折光檢測器(differential refractive Index detector, RID)是一種通用的濃度檢測器,對所有溶質都有響應。某些不能用選擇性檢測器檢測的組分,如高分子化合物、糖類、脂(zhi)肪(fang)烷(wan)烴(ting)等(deng),可(ke)用(yong)示(shi)差(cha)檢(jian)測(ce)器(qi)檢(jian)測(ce)。示(shi)差(cha)檢(jian)測(ce)器(qi)是(shi)基(ji)於(yu)連(lian)續(xu)測(ce)定(ding)樣(yang)品(pin)流(liu)路(lu)和(he)參(can)比(bi)流(liu)路(lu)之(zhi)間(jian)折(zhe)射(she)率(lv)的(de)變(bian)化(hua)來(lai)測(ce)定(ding)樣(yang)品(pin)含(han)量(liang)的(de)。光(guang)從(cong)一(yi)種(zhong)介(jie)質(zhi)進(jin)入(ru)另(ling)一(yi)種(zhong)介(jie)質(zhi)時(shi),由(you)於(yu)兩(liang)種(zhong)物(wu)質(zhi)的(de)折(zhe)射(she)率(lv)不(bu)同(tong)就(jiu)會(hui)產(chan)生(sheng)折(zhe)射(she)。隻(zhi)要(yao)樣(yang)品(pin)組(zu)分(fen)與(yu)流(liu)動(dong)相(xiang)的(de)折(zhe)光(guang)指(zhi)數(shu)不(bu)同(tong),就(jiu)可(ke)被(bei)檢(jian)測(ce),二(er)者(zhe)相(xiang)差(cha)愈(yu)大(da),靈(ling)敏(min)度(du)愈(yu)高(gao)。在(zai)一(yi)定(ding)濃(nong)度(du)範(fan)圍(wei)內(nei)檢(jian)測(ce)器(qi)的(de)輸(shu)出(chu)與(yu)溶(rong)質(zhi)濃(nong)度(du)成(cheng)正(zheng)比(bi)。
05電化學檢測器
電化學檢測器(electrochemical detector, ECD)屬選擇性檢測器,主要有電導檢測器、安培檢測器、介電常數檢測器和電位測定檢測器等,可檢測具有電活性的化合物。電導、電位等檢測器已在離子色譜中得到了廣泛應用;介電常數檢測器性能類似於示差折光檢測器;安培檢測器可檢測氧化性物質,適用範圍很寬。
電化學探測器的優點
01
靈敏度高,檢測量一般為ng級,可以達到pg級。
02
選擇性好,可測定大量非電活性物質中極痕量電活性物質;
03
線性範圍寬,通常為4~5個數量級;
04
設備簡單,成本較低;
05
易於自動操作。
06化學發光檢測器
化學發光檢測器(Chemiluminescence detector, CD)是近年來發展起來的一種快速、靈敏的新型檢測器,具有設備簡單、價格低廉、xianxingfanweikuandengyoudian。qiyuanlishijiyumouxiewuzhizaichangwenxiajinxinghuaxuefanying,shengchengchuyujifataishifanyingzhongjiantihuofanyingchanwu,dangtamencongjifataifanhuijitaishi,jiufashechuguangzi。youyuwuzhijifataidenengliangshilaizihuaxuefanying,gujiaozuohuaxuefaguang。dangfenlizufencongsepuzhuzhongxituochulaihou,lijiyushidangdehuaxuefaguangshijihunhe,yinqihuaxuefanying,daozhifaguangwuzhichanshengfushe,qiguangqiangduyugaiwuzhidenongduchengzhengbi。
這zhe種zhong檢jian測ce器qi不bu需xu要yao光guang源yuan,也ye不bu需xu要yao複fu雜za的de光guang學xue係xi統tong,隻zhi要yao有you恒heng流liu泵beng,將jiang化hua學xue發fa光guang試shi劑ji以yi一yi定ding的de流liu速su泵beng入ru混hun合he器qi中zhong,使shi之zhi與yu柱zhu流liu出chu物wu迅xun速su而er又you均jun勻yun地di混hun合he產chan生sheng化hua學xue發fa光guang,通tong過guo光guang電dian倍bei增zeng管guan將jiang光guang信xin號hao變bian成cheng電dian信xin號hao,就jiu可ke進jin行xing檢jian測ce。這zhe種zhong檢jian測ce器qi的de最zui小xiao檢jian出chu量liang可ke達da10~12g。
07蒸發光散射檢測器
蒸發光散射檢測器(evaporative light―scattering detector,ELSD)是20世紀90年代出現的新型通用型質量檢測器,它適用於檢測揮發性低於流動相的組分,主要用於檢測糖類、高級脂肪酸、磷脂、維生素、氨基酸、甘gan油you三san酯zhi及ji甾zai體ti等deng,並bing在zai沒mei有you標biao準zhun品pin和he化hua合he物wu結jie構gou參can數shu未wei知zhi的de情qing況kuang下xia檢jian測ce未wei知zhi化hua合he物wu。對dui各ge物wu質zhi有you幾ji乎hu相xiang同tong的de響xiang應ying,但dan是shi其qi靈ling敏min度du比bi較jiao低di,尤you其qi是shi有you紫zi外wai吸xi收shou的de組zu分fen。此ci外wai流liu動dong相xiang必bi須xu是shi揮hui發fa性xing的de,不bu能neng含han有you緩huan衝chong鹽yan等deng。它ta的de通tong用yong檢jian測ce原yuan理li克ke服fu了le常chang見jian於yuHPLC傳統檢測方法的不足,已越來越多地應用於HPLC、超臨界色譜和逆流色譜中。不同於紫外和熒光檢測器,ELSD的(de)響(xiang)應(ying)不(bu)依(yi)賴(lai)於(yu)樣(yang)品(pin)的(de)光(guang)學(xue)特(te)性(xing),任(ren)何(he)揮(hui)發(fa)性(xing)低(di)於(yu)流(liu)動(dong)相(xiang)的(de)樣(yang)品(pin)均(jun)能(neng)被(bei)檢(jian)測(ce),不(bu)受(shou)其(qi)官(guan)能(neng)團(tuan)的(de)影(ying)響(xiang)。靈(ling)敏(min)度(du)比(bi)示(shi)差(cha)折(zhe)光(guang)檢(jian)測(ce)器(qi)高(gao),對(dui)溫(wen)度(du)變(bian)化(hua)不(bu)敏(min)感(gan),基(ji)線(xian)穩(wen)定(ding),適(shi)合(he)與(yu)梯(ti)度(du)洗(xi)脫(tuo)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)聯(lian)用(yong)。
ELSD檢測原理
ELSD運行有三個過程:第一是霧化過程,用惰性氣體或淨化空氣將色譜柱流出物霧化;第二是蒸發過程,在一個加熱管(漂移管)中將流動相揮發;第三是檢測過程,測定留下來的樣品顆粒的光散射。所有商品ELSD都由一種或兩種模式完成這三個過程。模式A的操作是全部柱流出物(氣溶膠)都進入直的漂移管,讓流動相在其中蒸發,模式Bzhongshijiangqirongjiaotongguoyigewanguan,zaiciguanzhongdadekelichenjixialailiurufeiqiguan,qiyudexiaokelijinruluoxuanzhuangdepiaoyiguan,zaishangshuliangzhongmoshizhong,yangpinkelijunjinruguangguan,shijiguangfashengsansheerdeyijiance。
ELSD檢測的優點及缺點
優點:
①具有較好的通用性,任何揮發性低於流動相的樣品均能被檢測;
②在相同色譜條件下,物理性質相似的物質可給出一致的響應;
③能與梯度洗脫方式相容;
④靈敏度高於示差折光檢測器、紫外末端吸收檢測法。
⑤在ELSD上開發的實驗方法移植到質譜上則無需修改。
ELSD檢測的不足之處主要是:
①靈敏度不夠理想;
②流動相的選擇受限;
③某些樣品線性範圍較窄等。
影響ELSD檢測性能的基本因素
①操作模式選擇,選擇合適的操作模式可提高方法的靈敏度,操作模式的選擇取決於樣品的揮發性、流動相的組成及其流速。
②流動相組成及流速選擇,流動相的揮發性越好,方法的靈敏度越高。流動相的流速越低,相應的信號越強。
③漂移管溫度對基線水平和噪音的影響並無明顯規律性。最優溫度應為在流動相基本揮發基礎上,產生可接受噪音的最低溫度。
④載氣流速是影響檢測性能的一個很重要因素。最優載氣流速應是在可接受噪音的基礎上(例如0.5mV),產生最大檢測響應值時的最低流速。
ELSD檢測時的數據處理模式
ELSD檢測最常采用的數學模型是lgy=algx+b (y為響應值,x為進樣量或樣品濃度,a、b為回歸常數),也有采用二次曲線模型的(y=ax2+bx+c)。由於響應值(y)與進樣量(x)之間並非線性關係,故其數據處理不同於紫外檢測方法。ELSDcedingyizhiwuzhidehanliangshi,yibanyingyongsuixingbiaozhunquxianfaerfeiwaibiaofa,yinweixiaozhengxianxingfangchengdejiejubingbuweiling。xinyaojizhunpindejianli,chuleduizhaopinweilingwaiyizhonghanliangyizhi、結構相似的物質外,數據處理方式同上相似。ELSD測ce定ding物wu質zhi純chun度du時shi,由you於yu響xiang應ying值zhi與yu進jin樣yang量liang間jian並bing非fei線xian性xing關guan係xi,多duo通tong過guo繪hui製zhi其qi中zhong的de一yi種zhong或huo數shu種zhong物wu質zhi的de隨sui行xing標biao準zhun曲qu線xian來lai加jia以yi校xiao正zheng。多duo組zu分fen物wu質zhi的de分fen析xi,除chu了le隨sui行xing校xiao正zheng曲qu線xian的de線xian性xing範fan圍wei有you所suo區qu別bie外wai,數shu據ju處chu理li同tong上shang類lei似si。盡jin管guan存cun在zai一yi些xie不bu足zu之zhi處chu,但dan是shiELSDzuoweiyizhongxinxingdetongyongxingzhiliangjianceqi,juyouxuduodutedeyoushi,lirutadetongyongxing,xiangyingyinzideyizhixingyijiyutiduxituoxiangrongdeng,jiangzaiwutezhengziwaixishouwuzhidefenxifangmianfahuiyuelaiyuezhongyaodezuoyong。
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