一、熒光顯微鏡標本製作要求
1.載玻片
載玻片厚度應在0.8～1.2mm之zhi間jian，太tai厚hou的de坡po片pian，一yi方fang麵mian光guang吸xi收shou多duo，另ling一yi方fang麵mian不bu能neng使shi激ji發fa光guang在zai標biao本ben上shang聚ju集ji。載zai玻bo片pian必bi須xu光guang潔jie
，厚hou度du均jun勻yun
，無wu明ming顯xian自zi發fa熒ying光guang。有you時shi需xu用yong石shi英ying玻bo璃li載zai玻bo片pian。
2.蓋玻片
蓋玻片厚度在0.17mm左右，光潔。為了加強激發光，也可用幹澀蓋玻片，這是一種特製的表麵鍍有若幹層對不同波長的光起不同幹涉作用的物質（如氟化鎂）的蓋玻片
，它可以使熒光順利通過
，而反射激發光，這種反射的激發光可激發標本。
3.標本
組zu織zhi切qie片pian或huo其qi他ta標biao本ben不bu能neng太tai厚hou，如ru太tai厚hou激ji發fa光guang大da部bu分fen消xiao耗hao在zai標biao本ben下xia部bu，而er物wu鏡jing直zhi接jie觀guan察cha到dao的de上shang部bu不bu能neng被bei充chong分fen激ji發fa。另ling外wai，細xi胞bao重zhong疊die或huo雜za質zhi掩yan蓋gai
，影ying響xiang判pan斷duan。
4.封裱劑
封裱劑常用甘油，必須無自發熒光，無色透明

，熒光的亮度在PH8.5～9.5時較亮，不易很快褪去。所以，常用甘油和0.5mol/L PH9.0～9.5的碳酸鹽緩衝液的等量混合液作封裱劑。
5.鏡油
一yi般ban用yong暗an視shi野ye熒ying光guang顯xian微wei鏡jing和he油you鏡jing觀guan察cha標biao本ben時shi
，必bi須xu使shi用yong鏡jing油you。最zui好hao使shi用yong特te製zhi的de無wu熒ying光guang鏡jing油you，也ye可ke用yong上shang述shu甘gan油you代dai替ti，液ye體ti石shi蠟la也ye可ke用yong，隻zhi是shi折zhe光guang率lv較jiao低di，對dui圖tu像xiang質zhi量liang略lve有you影ying響xiang。
二
、熒光顯微鏡基本操作
1.關閉房間內的電燈，開啟顯微鏡汞燈
；
2.根據樣品標記的熒光素選擇相應的濾光片；
3.放好樣品
，找到合適的視野；
4.如需拍照
，請確認照相機內已裝好彩色膠卷（最好使用27定膠卷）
；
5.開啟自拍裝置，選擇手動檔
，通常拍攝速度在0.5-10秒內；
6.使用結束
，關閉所有電源並做好使用記錄。
三、熒光圖像的記錄方法
熒(ying)光(guang)顯(xian)微(wei)鏡(jing)所(suo)看(kan)到(dao)的(de)熒(ying)光(guang)圖(tu)像(xiang)
，一(yi)是(shi)具(ju)有(you)形(xing)態(tai)學(xue)特(te)征(zheng)
，二(er)是(shi)具(ju)有(you)熒(ying)光(guang)的(de)顏(yan)色(se)和(he)亮(liang)度(du)，在(zai)判(pan)斷(duan)結(jie)果(guo)時(shi)
，必(bi)須(xu)將(jiang)二(er)者(zhe)結(jie)合(he)起(qi)來(lai)綜(zong)合(he)判(pan)斷(duan)。結(jie)果(guo)記(ji)錄(lu)根(gen)據(ju)主(zhu)觀(guan)指(zhi)標(biao)

，即(ji)憑(ping)工(gong)作(zuo)者(zhe)目(mu)力(li)觀(guan)察(cha)。作(zuo)為(wei)一(yi)般(ban)定(ding)性(xing)觀(guan)察(cha)，基(ji)本(ben)上(shang)可(ke)靠(kao)的(de)。隨(sui)著(zhe)技(ji)術(shu)科(ke)學(xue)的(de)發(fa)展(zhan)，在(zai)不(bu)同(tong)程(cheng)度(du)上(shang)采(cai)用(yong)客(ke)觀(guan)指(zhi)標(biao)記(ji)錄(lu)判(pan)斷(duan)結(jie)果(guo)

，如(ru)用(yong)細(xi)胞(bao)分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)，圖(tu)像(xiang)分(fen)析(xi)儀(yi)等(deng)儀(yi)器(qi)。但(dan)這(zhe)些(xie)儀(yi)器(qi)記(ji)錄(lu)的(de)結(jie)果(guo)，也(ye)必(bi)須(xu)結(jie)合(he)主(zhu)觀(guan)的(de)判(pan)斷(duan)。
yingguangxianweijingsheyingjishuduiyujiluyingguangtuxiangshifenbiyao，youyuyingguanghenyituisejianruo，yaojishisheyingjilujieguo。fangfayuputongxianweisheyingjishujibenxiangtong。zhishixuyaocaiyonggaosuganguangjiaopianjike。yinziwaiguangduiyingguangcumiezuoyongda，ruFITC的標記物
，在紫外光下照射30s，熒光亮度降低50%。所以，曝光速度太慢
，就不能將熒光圖像拍攝下來。一般研究型熒光顯微鏡都有半自動或全自動顯微攝影係統裝置。
四、使用熒光顯微鏡的注意事項
1.嚴格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作，不要隨意改變程序。
2.應在暗室中進行檢查。進入暗室後，接上電源
，點燃超高壓汞燈5～15min，待光源發出強光穩定後
，眼睛完全適應暗室，再開始觀察標本。
3.防止紫外線對眼睛的損害，在調整光源時應戴上防護眼鏡。
4.檢查時間每次以1～2h為宜
，超過90min
，超高壓汞燈發光強度逐漸下降
，熒光減弱；標本受紫外線照射3～5min後
，熒光也明顯減弱；所以，最多不得超過2～3h。
5.yingguangxianweijingguangyuanshoumingyouxian，biaobenyingjizhongjianzha，yijieshengshijian，baohuguangyuan。tianreshi，yingjiadianshansanrejiangwen，xinhuandengpaoyingcongkaishijiujilushiyongshijian。dengximiehouyuzaiyongshi，xudaidengpaochongfenlengquehoucainengdianran。yitianzhongyingbimianshucidianranguangyuan。
6.標本染色後立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存
，可延緩熒光減弱時間，防止封裱劑蒸發。
7.熒光亮度的判斷標準：一般分為四級
，即“-”指無或可見微弱熒光。“+”指僅能見明確可見的熒光。“++”指可見有明亮的熒光。“+++”指可見耀眼的熒光。