sepuzhudeshiyongshouming,chuleyusuofenxideyangpinheliudongxiangjishiyongpinlvyouguanxiwai,zuizhuyaodeshiyurichangdeweihuimiqiexiangguan。weiyanchangsepuzhudeshiyongshouming,weihunindeliyi,qingzaixiyueducibufen。
色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)使(shi)用(yong)壽(shou)命(ming)主(zhu)要(yao)是(shi)分(fen)局(ju)柱(zhu)效(xiao)和(he)柱(zhu)壓(ya)兩(liang)個(ge)指(zhi)標(biao)來(lai)衡(heng)量(liang),如(ru)果(guo)一(yi)支(zhi)色(se)譜(pu)柱(zhu)柱(zhu)效(xiao)太(tai)低(di)或(huo)柱(zhu)壓(ya)太(tai)高(gao),通(tong)常(chang)被(bei)認(ren)為(wei)該(gai)色(se)譜(pu)柱(zhu)已(yi)經(jing)結(jie)束(shu)。因(yin)此(ci),延(yan)長(chang)色(se)譜(pu)柱(zhu)使(shi)用(yong)壽(shou)命(ming)的(de)關(guan)鍵(jian)是(shi),消(xiao)除(chu)引(yin)起(qi)柱(zhu)效(xiao)下(xia)降(jiang)和(he)柱(zhu)壓(ya)升(sheng)高(gao)的(de)因(yin)素(su)。以(yi)下(xia)是(shi)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)日(ri)常(chang)維(wei)護(hu)方(fang)法(fa):
一、流動相的PH應在使用的範圍內
Welch公司的色譜柱除反相氰基柱PH1.5-9.0外,其反相色譜柱的PH範圍均為1.5-10,由於填料中存在Si-C和Si-O鍵,流動相超過其PH範圍將會導致矽膠基質流失和鍵合相碳鏈斷裂,使柱效下降,使用壽命變短。由於流動相的PH 控製不當而對色譜柱造成的損害,通常很難是色譜柱恢複,因此必須認真對待,嚴格控製流動相的PH值。
二、去除樣品和流動相中的固體顆粒
yangpinheliudongxiangzhonghanyoudegutikeliwuzhihuidusaisepuzhushaiban,shaibanbeiduzhubujinhuiyinqizhuyadeshenggao,erqieyehuiyinqizhuxiaoxiajiang,yinweishaibandedusaihuiyinqiyeliubujun,daozhisepufengxingtuowei、變寬,從而使柱效下降。因此,建議使用超純水和色譜純試劑,在分析樣品前對樣品進行針筒過濾,流動相過0.45μm濾膜。
三、使用保護柱或在線過濾器
樣品和流動相經過濾後並不能完全消除固體顆粒物質,因為泵的磨損、密封圈和管路的老化也會產生固體顆粒物質,這些固體顆粒被流動相帶入色譜柱,堵塞篩板,導致柱壓升高、柱(zhu)效(xiao)下(xia)降(jiang)。保(bao)護(hu)柱(zhu)和(he)在(zai)線(xian)過(guo)濾(lv)器(qi)上(shang)都(dou)有(you)篩(shai)板(ban),其(qi)孔(kong)徑(jing)與(yu)色(se)譜(pu)柱(zhu)孔(kong)徑(jing)相(xiang)同(tong),因(yin)此(ci)可(ke)以(yi)阻(zu)止(zhi)固(gu)體(ti)顆(ke)粒(li)物(wu)質(zhi)到(dao)達(da)色(se)譜(pu)柱(zhu),有(you)效(xiao)防(fang)止(zhi)色(se)譜(pu)柱(zhu)篩(shai)板(ban)的(de)堵(du)塞(sai)。由(you)於(yu)柱(zhu)壓(ya)升(sheng)高(gao)在(zai)分(fen)析(xi)故(gu)障(zhang)中(zhong)占(zhan)很(hen)大(da) 比例,因此,除對樣品和流動相進行過濾外,建議您在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器。
如果去人色譜柱柱壓升高是由於進樣端篩板被堵引起的,科選擇一下方式進行補救:
1、先在色譜柱前加上保護柱或在線過濾器,然後用甲醇、水=20/80ml/min反向衝色譜柱180min。
2、先在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器,然後反向使用。
四、正確使用緩衝鹽
緩huan衝chong鹽yan通tong常chang易yi溶rong於yu水shui,難nan溶rong於yu有you機ji溶rong劑ji,因yin此ci緩huan衝chong鹽yan使shi用yong不bu當dang會hui使shi其qi析xi出chu,堵du塞sai填tian料liao基ji質zhi上shang的de微wei孔kong和he顆ke粒li間jian的de空kong隙xi,使shi填tian料liao板ban結jie,柱zhu壓ya上shang升sheng;同tong時shi阻zu礙ai了le基ji質zhi上shang鍵jian合he的de碳tan鏈lian自zi由you舒shu展zhan,使shi色se譜pu柱zhu的de保bao留liu能neng力li下xia降jiang,柱zhu效xiao降jiang低di。緩huan衝chong鹽yan析xi出chu後hou,去qu除chu非fei常chang困kun難nan,因yin此ci,正zheng確que的de使shi用yong緩huan衝chong鹽yan對dui延yan長chang色se譜pu柱zhu使shi用yong壽shou命ming非fei常chang重zhong要yao。
正確使用緩衝鹽的目的是防止緩衝鹽析出,因此正確使用緩衝鹽的方法可歸結為一句話:使用前要過濾,使用後要衝洗。具體方法如下:
1、等度條件:使用緩衝鹽前和使用後需用過渡流動相以1.0ml/min流速衝洗60min;使用後去除緩衝鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速衝洗色譜柱過夜。
2、梯度條件:用含有緩衝鹽的流動相跑梯度之前,用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速衝洗60min,再用該過渡流動相以1.0ml/min衝洗色譜柱120min。含緩衝鹽流動相的梯度設定應盡量平緩,以避免梯度過程中緩衝鹽析出。
注意:過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同,區別隻是過渡流動相不含緩衝鹽。
3、緩衝鹽析出的補救方法:
1)方案1:用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35攝氏度條件下反向衝洗色譜柱120min
2)方案2:用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向衝洗色譜柱過夜。
五、防止強保留物質在色譜柱上存留
強保留物質和大分子化合物在色譜柱中累積,對樣品中的化合物產生額外的保留行為,不僅引起峰型變寬、拖(tuo)尾(wei),使(shi)柱(zhu)效(xiao)下(xia)降(jiang),同(tong)時(shi)也(ye)會(hui)引(yin)起(qi)保(bao)留(liu)時(shi)間(jian)的(de)變(bian)化(hua),累(lei)積(ji)到(dao)一(yi)定(ding)程(cheng)度(du)時(shi)還(hai)會(hui)導(dao)致(zhi)柱(zhu)壓(ya)升(sheng)高(gao)。由(you)於(yu)強(qiang)保(bao)留(liu)物(wu)質(zhi)和(he)大(da)分(fen)子(zi)化(hua)合(he)物(wu)對(dui)色(se)譜(pu)分(fen)離(li)的(de)影(ying)響(xiang)是(shi)一(yi)個(ge)累(lei)積(ji)效(xiao)應(ying),需(xu)要(yao)一(yi)定(ding)的(de)時(shi)間(jian)才(cai)會(hui)體(ti)現(xian)出(chu)來(lai),但(dan)對(dui)許(xu)多(duo)藥(yao)品(pin)特(te)別(bie)是(shi)複(fu)雜(za)樣(yang)品(pin)而(er)言(yan),很(hen)難(nan)判(pan)斷(duan)其(qi)是(shi)否(fou)是(shi)含(han)有(you)強(qiang)保(bao)留(liu)物(wu)質(zhi),因(yin)此(ci)要(yao)防(fang)止(zhi)強(qiang)保(bao)留(liu)物(wu)質(zhi)的(de)累(lei)積(ji),需(xu)要(yao)在(zai)每(mei)天(tian)的(de)日(ri)常(chang)維(wei)護(hu)中(zhong)用(yong)純(chun)甲(jia)醇(chun)或(huo)乙(yi)氰(qing)清(qing)洗(xi)色(se)譜(pu)柱(zhu)。
清洗方法:
1、未使用緩衝鹽:每天分析完成後,先用上述方法除去緩衝鹽,然後再用甲醇或乙氰反向衝洗色譜柱60min。
2、使用過緩衝鹽:分析完成後,先用上述方法除去緩衝鹽,然後在用純甲醇或乙氰反向衝洗色譜柱60min
3、補救方法:
水——乙氰——氯仿(或異丙醇)——乙氰——水
每一步以1.0ml/min流速反向衝洗色譜柱60min。
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