現xian代dai高gao效xiao液ye相xiang色se譜pu分fen析xi中zhong,色se譜pu柱zhu的de選xuan擇ze直zhi接jie影ying響xiang了le分fen離li效xiao果guo的de好hao壞huai,選xuan擇ze合he適shi的de色se譜pu柱zhu可ke以yi縮suo短duan方fang法fa開kai發fa所suo需xu的de時shi間jian,並bing且qie使shi方fang法fa更geng具ju穩定性。但是現在市場上色譜柱種類繁多,不同類型的色譜柱分離對象不同,因此,要做合適的選擇,必須對此有一定的認識和了解。
色譜柱參數
物理性質:
柱長,內徑,如250*4.6mm。一般柱長在2―250mm,柱越長,分離度越高,但柱壓更高,分離所需時間更長;但分離度與理論塔板數的平方根成正比,所以一昧增加柱長並不是最有效的分離手段,一般情況下,150mm、5um的填料可以提供足夠的塔板數。
粒徑,影響色譜分離度。粒徑越小,分離越快,柱效越高,但柱壓力越高,柱容易被汙染,導致柱壽命降低。常見分析柱通常使用5um填料,複雜的多組分樣品分離一般使用3.5um粒(li)徑(jing),更(geng)大(da)內(nei)徑(jing)的(de)製(zhi)備(bei)色(se)譜(pu)柱(zhu)通(tong)常(chang)使(shi)用(yong)更(geng)大(da)的(de)粒(li)徑(jing)。如(ru)果(guo)固(gu)定(ding)相(xiang)選(xuan)擇(ze)是(shi)正(zheng)確(que),但(dan)是(shi)分(fen)離(li)度(du)不(bu)夠(gou),那(na)麼(me)選(xuan)用(yong)更(geng)小(xiao)的(de)粒(li)度(du)的(de)填(tian)料(liao)是(shi)很(hen)有(you)用(yong)的(de)。3.5um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而,3.5um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍,因此如何選擇填料粒徑需要根據現實情況而定。
孔徑,60A,120A,300A等。孔徑小,則含孔率高,比表麵積大,載碳量高;色se譜pu柱zhu填tian料liao孔kong徑jing大da小xiao需xu和he分fen子zi大da小xiao相xiang匹pi配pei,保bao證zheng分fen子zi自zi由you進jin出chu填tian料liao孔kong並bing與yu孔kong內nei表biao麵mian的de鍵jian合he相xiang進jin行xing分fen離li分fen配pei,通tong常chang要yao求qiu孔kong徑jing直zhi徑jing是shi分fen子zi直zhi徑jing的de3倍以上,一般小分子使用80―120A,大分子使用300A。
顆粒形狀,一般有球形和不規則形,當使用黏度較大的流動相時,球形顆粒可以降低柱壓,延長色譜柱壽命。
比表麵積,指的是每克填料的表麵積,如180m2/g―350m2/g,與粒度和含孔率有關;比表麵積大,會增加樣品與鍵合相之間的反應,增加保留和分離度;比表麵積小則可以縮短分析時間和平衡時間,並不是比表麵積大或者小就更好,需要選擇合適的比表麵積。
化學性質:
矽膠基質:最通用的基質,強度大,化學修飾容易,但使用的pH值範圍有限(一般為2―8,特殊修飾的可以達到1―12)。
聚合物基質:多為聚苯乙烯―二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂,化學穩定,應用pH範圍寬,具有更強的疏水性,對蛋白質等樣品分離效果較好;但強度較小,有機溶劑可能導致聚合物溶脹而受損,批次重複性較差,商品化色譜柱不多,一般價格較貴。
載碳量:基質表麵鍵合相的比例,載碳量高,則保留增加,適合分析非極性化合物。
鍵合相:鍵合試劑不同,對化合物的選擇性不同,一般長鏈的烷基鍵合相(C18 C8)比短鏈的(C4 C3)穩定;非極性的鍵合相比極性的鍵合相(-NH2)穩定。
封端:yongduanlianjiangluoludeguiqiangjijianhehoufengbiqilai,yijianshaocanliudeguichunji,jianqingdaicezufenyusuanxingguiqiangjifanyingeryinqidesepufengtuoweixianxiang。youqiduiyujixingyangpineryan,weifengduanchulidesepuzhufenlixiaoguojiaocha。
正相&反相色譜
目前市場上主要以反相色譜為主,約占80%的比例。
固定相極性
流動相極性
出峰順序
反相吸附色譜
非極性
強極性(水、甲醇、乙腈等)
強極性物質先出峰
正相吸附色譜
極性
弱極性(己烷、庚烷等)
弱極性物質先出峰
柱長及內徑的選擇:
長度的選擇:柱越長,總柱效越高(n值越大),柱越長,分析時間也越長。250―300mm是最普遍的柱長,實驗室一半以上的工作都是采用此規格柱子,一般用來分離l0到50個組份的中等至複雜混合物;500―600mm,要求較高分辨率的應用,―般用來分離大於50個組份或包含有難分離物質的複雜樣品程序升溫分析。
內徑:柱zhu效xiao率lv與yu柱zhu半ban徑jing平ping方fang成cheng反fan比bi,內nei徑jing越yue小xiao柱zhu效xiao越yue高gao,但dan內nei徑jing越yue大da,柱zhu容rong量liang也ye增zeng加jia,允yun許xu進jin樣yang量liang就jiu越yue多duo。當dang進jin樣yang量liang超chao過guo柱zhu容rong量liang時shi,則ze因yin柱zhu內nei每mei塊kuai理li論lun板ban內nei不bu能neng建jian立li真zhen正zheng的de平ping衡heng,將jiang會hui導dao致zhi色se譜pu蜂feng畸ji變bian,柱zhu分fen辨bian率lv降jiang低di,重zhong現xian性xing不bu好hao。因yin此ci對dui於yu複fu雜za樣yang品pin需xu要yao精jing確que分fen離li,必bi須xu使shi用yong小xiao內nei徑jing柱zhu子zi。另ling一yi方fang麵mian若ruo樣yang品pin中zhong存cun在zai具ju有you很hen不bu相xiang同tong濃nong度du組zu份fen化hua合he物wu,為wei了le增zeng加jia樣yang品pin容rong量liang就jiu必bi須xu使shi用yong內nei徑jing大da的de柱zhu子zi,目mu前qian實shi驗yan室shi使shi用yong最zui常chang見jian的de柱zhu子zi內nei徑jing一yi般ban是shi4.6mm。
一般選擇原則:分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱;對於高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱,以改善峰形,延長色譜柱使用壽命等。
現(xian)在(zai)商(shang)品(pin)化(hua)的(de)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)柱(zhu)琳(lin)琅(lang)滿(man)目(mu),根(gen)據(ju)色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)參(can)數(shu)可(ke)以(yi)給(gei)我(wo)們(men)提(ti)供(gong)一(yi)個(ge)初(chu)步(bu)的(de)選(xuan)擇(ze),但(dan)由(you)於(yu)各(ge)個(ge)儀(yi)器(qi)廠(chang)商(shang)的(de)填(tian)料(liao)技(ji)術(shu)和(he)鍵(jian)合(he)技(ji)術(shu)都(dou)有(you)差(cha)異(yi),即(ji)使(shi)都(dou)是(shi)C18柱,同一品牌不同係列都有不同的功能,有能耐受低pH值的、有耐高溫的、有you適shi合he堿jian性xing樣yang品pin的de等deng等deng。所suo以yi在zai選xuan擇ze色se譜pu柱zhu前qian要yao好hao好hao研yan究jiu色se譜pu柱zhu參can數shu,仔zai細xi閱yue讀du色se譜pu柱zhu說shuo明ming書shu,才cai能neng找zhao到dao合he適shi的de色se譜pu柱zhu和he適shi宜yi的de分fen離li方fang法fa。
文章(文字)來源:嘉裕檢測網
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