培養基,又稱生長介質,是由人工配製,用於培養微生物、細胞、組織等,有利其生長繁殖或代謝物產生的的固態、半固態、液態混合營養基質或介質。培養基中含有提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質,如碳源、氮源、無機鹽、生長因子等,以及適宜的pH值和滲透壓。
培養基在生物學研究中扮演著非常重要的角色。它不僅為微生物提供生長環境,還可用於分離、純化、鑒定、計數微生物,以及進行藥物篩選、基因工程等研究。下麵,老司機將為你詳細介紹實驗室中常用的幾種培養基及其配製方法。
牛肉膏蛋白腖培養基(Nutrient Broth)
● 牛肉膏:3.0g
● 蛋白腖:10.0g
● NaCl:5.0g
● 瓊脂粉:15-20g(用於固體培養基)
● ddH2O:加至1L
LB培養基
● 胰蛋白腖:10g
● 酵母粉:5g
● NaCl:10g
● 瓊脂粉:15-20g(用於固體培養基)
● ddH2O:加至1L
LB培養基(含Amp)
● 胰蛋白腖:10g
● 酵母粉:5g
● NaCl:10g
● 瓊脂粉:15-20g(用於固體培養基)
● ddH2O:加至1L
馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)
● 馬鈴薯提取物:200 g(通常使用新鮮馬鈴薯)
● 葡萄糖:20 g
● 瓊脂粉:15-20 g(用於固體培養基)
● ddH2O:加至1L
配製方法:將新鮮馬鈴薯去皮切塊,加入配方所需量蒸餾水煮沸20分鍾,稍稍冷卻後用雙層紗布過濾,得到馬鈴薯浸出液。隨後將葡萄糖和瓊脂粉加入馬鈴薯浸出液中,加熱溶解。pH調至5.6左右, 將配製好的培養基分裝到三角瓶或試管中,121℃高壓滅菌15分鍾。
葡萄糖糖發酵管
● 蛋白腖:10g
● 酵母粉:5g
● 氯化鈉:5g
● 磷酸氫二鉀:2g
● 葡萄糖:10g
● 酚紅指示劑:0.02g
● 瓊脂:15g(用於半固體培養基)
● ddH2O:加至1L
SOB培養基
● 胰蛋白腖:20g
● 酵母粉:5g
● NaCl:0.5g
● ddH2O:加至1L
高氏1號培養基
● 可溶性澱粉:20g
● KNO₃:1g
● NaCl:0.5g
● K₂HPO₄・3H₂O:0.5g
● MgSO₄・7H₂O:0.5g
● FeSO₄・7H₂O:0.01g
● 瓊脂:15-20g
● ddH2O:加至1L
馬丁氏培養基
● 葡萄糖:10g
● 蛋白腖:5g
● KH₂PO₄:1g
● MgSO₄:0.5g
● 孟加拉紅:0.33g (抑製細菌和放線菌)
● 鏈黴素:30mg (抑製細菌和放線菌)
● 瓊脂:20g
● ddH2O:加至1L
明膠培養基
● 明膠:120g
● 牛肉膏:5g
● 蛋白腖:5g
● NaCl:5g
● ddH2O:加至1L
在(zai)學(xue)實(shi)驗(yan)中(zhong),我(wo)們(men)經(jing)常(chang)還(hai)需(xu)要(yao)需(xu)要(yao)在(zai)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)添(tian)加(jia)抗(kang)生(sheng)素(su),以(yi)篩(shai)選(xuan)含(han)有(you)特(te)定(ding)抗(kang)性(xing)基(ji)因(yin)的(de)細(xi)菌(jun)。例(li)如(ru),在(zai)克(ke)隆(long)實(shi)驗(yan)中(zhong),為(wei)了(le)篩(shai)選(xuan)含(han)有(you)重(zhong)組(zu)質(zhi)粒(li)的(de)細(xi)菌(jun),會(hui)在(zai)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)加(jia)入(ru)相(xiang)應(ying)的(de)抗(kang)生(sheng)素(su)。隻(zhi)有(you)含(han)有(you)抗(kang)性(xing)基(ji)因(yin)的(de)細(xi)菌(jun)才(cai)能(neng)在(zai)含(han)有(you)抗(kang)生(sheng)素(su)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)生(sheng)長(chang)。下(xia)麵(mian)我(wo)們(men)再(zai)來(lai)看(kan)看(kan)實(shi)驗(yan)室(shi)中(zhong)常(chang)用(yong)抗(kang)生(sheng)素(su)的(de)配(pei)方(fang):
氨苄青黴素(Ampicillin)
● 溶解性:易溶於水
● 母液濃度:100 mg/mL
● 工作濃度:50-100 μg/mL
配製方法:稱取1g氨苄青黴素,加入10mL無菌水,充分溶解。分裝成小份,-20℃保存。使用前,根據實驗需要稀釋至工作濃度。
卡那黴素(Kanamycin)
● 溶解性:易溶於水
● 母液濃度:50 mg/mL
● 工作濃度:25-50 μg/mL
配製方法:稱取0.5g卡那黴素,加入10mL無菌水,充分溶解。分裝成小份,-20℃保存。使用前,根據實驗需要稀釋至工作濃度。
氯黴素(Chloramphenicol)
● 溶解性:易溶於乙醇
● 母液濃度:34 mg/mL
● 工作濃度:25 μg/mL
配製方法:稱取0.34g氯黴素,加入10mL無菌乙醇,充分溶解。分裝成小份,-20℃避光保存。使用前,根據實驗需要稀釋至工作濃度。
四環素(Tetracycline)
● 溶解性:微溶於水,易溶於酸
● 母液濃度:12.5 mg/mL
● 工作濃度:10-50 μg/mL
配製方法:稱取0.125g四環素,加入10mL無菌水或稀鹽酸,充分溶解。分裝成小份,-20℃避光保存。使用前,根據實驗需要稀釋至工作濃度。
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