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一、培養基的實驗室製備
正確製備培養基時微生物檢驗的最基礎步驟之一。使用脫水培養基和其他成分，尤其是含有有毒物質(如膽鹽或其他選擇劑)的成分時，應遵守良好實驗室規範和生產廠商提供的使用說明。培養基的不正確製備會導致培養基出現質量問題。
使用商品化脫水合成培養基製備培養基時，應嚴格按照廠商提供的使用說明配置。記錄所有相關數據，如質量/體積、pH、製備日期、滅菌條件和製備人員等。
使用各別成分製備培養基時，應按照配方準確配製，記錄所有細節信息，如：培養基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質含量、製造商、批號、pH、培養基體積(分裝體積)、無菌措施(包括實施的方式、溫度及時間)、配置日期、人員等，以便潮源。
1.水
除特定要求，實驗室用水的電導率在25℃下應不高於25uS/cm(相當於電阻率≥0.4MΩcm)。
微生物汙染應不超過103CFU/mL，最好低於102CFU/mL。應根GB/T 5750.12或其他有效方法，定期檢驗微生物的汙染。
2.稱量和複水
稱量所需量的脫水培養基(注意防止吸入粉末，尤其是含有有害物質的培養基粉末)，先加入少量水，充分混合(注意避免培養基結塊)後再加水至所需的量。
3.溶解和分裝
脫水培養基加水後適當加熱，並不攪拌使其快速溶解，必要時，重新溶解。含瓊脂的培養基在加熱溶解前應浸泡幾分鍾。
4.pH的測定和調整
用pH計測定pH，必要時在滅菌前調節pH，除特殊說明外，培養基滅菌後冷卻至25℃時，要求pH的變化不超過0.2pH單位。通常使用濃度約為40g/L( 約1 mol/ L)的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5g/L（約1mol/L)的鹽酸溶液調節pH。如果滅菌後調節pH，溶液需滅菌。
注:商品化培養基在高壓滅菌前後pH可能發生明顯變化,但使用蒸餾水或去離子水時,滅菌前無需調節pH。
5.分裝
將配置好的培養基分裝到適當的容器中，容器的體積至少為體積的1.2倍。
6.滅菌
①概述
培養基和試劑的滅菌通常采用濕熱滅菌或過濾滅菌。
有(you)些(xie)培(pei)養(yang)基(ji)無(wu)需(xu)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌(jun)，可(ke)煮(zhu)滅(mie)菌(jun)。如(ru)，含(han)亮(liang)綠(lv)的(de)腸(chang)道(dao)菌(jun)培(pei)養(yang)基(ji)對(dui)光(guang)和(he)熱(re)特(te)別(bie)敏(min)感(gan)，應(ying)在(zai)煮(zhu)沸(fei)後(hou)快(kuai)速(su)冷(leng)卻(que)，避(bi)光(guang)保(bao)存(cun)。同(tong)樣(yang)，一(yi)些(xie)試(shi)劑(ji)則(ze)不(bu)需(xu)要(yao)滅(mie)菌(jun)，直(zhi)接(jie)使(shi)用(yong)(參見相關標準或生產廠商的使用說明）。
②濕熱滅菌
濕熱滅菌在高壓鍋或培養基製備器中進行。高壓滅菌一般采用121℃±3℃滅菌15min。如果培養基的體積超過1000mL，要對滅菌條件進行適當的調整。所有操作均要按照標準和使用說明的規定進行。
注：大容量培養基（＞1000mL）滅菌時可能會造成過度加熱。
加熱後應采取適當的方式冷卻，防止沸溢。這對大容量培養基和敏感性培養基（如含亮綠的培養基）是非常重要的。
③過濾滅菌
過濾滅菌可以在真空負壓或正壓條件下進行。使用無菌設備和0.2um孔徑的濾膜。將過濾裝置的各個部分消毒滅菌,或使用預消毒設備。
一些濾膜上附著蛋白質或其他物質(如抗生素)。為達到有效過濾，應事先將濾膜用無菌水潤濕。
④監測
應對經濕熱或過濾滅菌的培養基進行監測，尤其要對pH、色澤、滅菌效果和均勻度等指標進行監測。
7.添加劑的製備
製備含有有毒物質(特別是抗生素）時(shi)應(ying)小(xiao)心(xin)操(cao)作(zuo)，避(bi)免(mian)因(yin)粉(fen)末(mo)的(de)擴(kuo)散(san)造(zao)成(cheng)實(shi)驗(yan)人(ren)員(yuan)過(guo)敏(min)或(huo)發(fa)生(sheng)其(qi)他(ta)不(bu)良(liang)反(fan)應(ying)。采(cai)用(yong)適(shi)當(dang)的(de)預(yu)防(fang)措(cuo)施(shi)並(bing)小(xiao)心(xin)按(an)照(zhao)產(chan)品(pin)使(shi)用(yong)說(shuo)明(ming)操(cao)作(zuo)。不(bu)要(yao)使(shi)用(yong)過(guo)期(qi)的(de)試(shi)劑(ji)；抗生素工作溶液現配現用；批量配置的抗生素溶液分裝後向冷凍保存，但解凍後的貯存溶液不可再次冷凍；廠商應提供冷凍對抗生素活性影響的相關資料，也可由使用者自行測定。
二、培養基的使用
1.瓊脂培養基的融化
將培養基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法(如高壓鍋中的蒸汽)融化。經過高壓滅菌的培養基盡量減少重新加熱的時間，避免過度加熱。培養基融化後立即移開,室溫靜置片刻(約2min），以免玻璃容器發生破裂。
融化後的培養基放入47℃~50℃恒溫水浴鍋中保溫，冷卻到47℃~50℃所需的時間取決於培養基的類型、體積和在水鍋裏的分裝量。融化後內培養基應盡快使用，放置時間一般不超過4h。剩餘的培養基凝固後不得再次融化使用。特別是靈敏性培養基，應根據相關標準，縮短融化後放置的時間。
將瓊脂培養基倒入類似檢測培養使用的獨立容器中，插入溫度計，記錄並保存瓊脂的融化溫度。
加入樣品的培養基應將溫度調節到44℃~47℃，或按照相關標準調節溫度。
2.培養基的脫氣
必要時，在使用前將培養基放到沸水浴或蒸汽浴中加熱15min，加熱時鬆開容器蓋子；加熱後蓋緊蓋子，並迅速冷卻至使用溫度。
3.添加成分的加入
對熱不穩定的添加成分應在培養基冷卻至47℃~50℃時shi加jia入ru，滅mie菌jun的de添tian加jia成cheng分fen加jia入ru前qian應ying冷leng卻que至zhi室shi溫wen，避bi免mian冷leng的de液ye體ti會hui造zao成cheng瓊qiong脂zhi凝ning膠jiao或huo形xing成cheng片pian狀zhuang物wu。將jiang添tian加jia成cheng分fen慢man加jia入ru培pei養yang基ji並bing充chong分fen混hun勻yun，盡jin快kuai分fen裝zhuang到dao待dai用yong的de容rong器qi中zhong。
4.培養基的棄置
所有汙染和未使用的培養基的棄置應采用安全的方式,並符合相關法律法規的規定。
三、平板的製備和儲存
傾注融化後的培養基到平皿中，使之在乎皿中形成一個至少3mm厚度的瓊脂層(直經90mm的平皿通常要加入18mL-20mL瓊脂培養基)，或根據相關標準要求製備平皿。將平皿蓋好皿蓋後放置在水平平麵使指冷卻凝固。如果平板要儲存、培養時間超過48h或培養溫度超過40℃，要增加培養基的傾注量。
注：在培養過程中,瓊脂培養基會損失水分，在某些環境條件下會影響微生物的生長。造成培養基水分損失的因素很多，如培養基的成分、平皿中培養基的量、培養箱的類型(如使用帶風扇的培養箱)、培養箱裏的空氣濕度、平皿在培養箱中放置的位置和數量以及培養溫度等。
凝固後的培養基應立即使用或存放在防止其成分發生變化的條件下，如存放於暗處和(或)5℃±3℃冰箱的密封袋中。在平板的底部或側麵做好標記，標記的內容包括培養基名稱、製備日期和(或)有效期，也可使用適宜的培養基編碼係統進行標記。
將(jiang)傾(qing)注(zhu)好(hao)的(de)平(ping)板(ban)放(fang)在(zai)密(mi)封(feng)袋(dai)中(zhong)冷(leng)蔵(蔵)可(ke)延(yan)長(chang)儲(chu)存(cun)期(qi)限(xian)。為(wei)了(le)避(bi)免(mian)冷(leng)凝(ning)水(shui)的(de)產(chan)生(sheng)，平(ping)板(ban)應(ying)冷(leng)卻(que)後(hou)再(zai)裝(zhuang)入(ru)密(mi)封(feng)袋(dai)中(zhong)。貯(zhu)存(cun)前(qian)不(bu)要(yao)對(dui)培(pei)養(yang)基(ji)表(biao)麵(mian)進(jin)行(xing)幹(gan)燥(zao)處(chu)理(li)。
