在細菌學診斷工作中,常需要從被檢材料中分離細菌,並獲得純培養(即單獨一種細菌的培養物)。因此,通常要用到離心機對樣品進行離心分離,細菌的離心機分離培養技術是細菌學診斷中的一項重要基本操作。
分離細菌的方法很多,常用的有以下幾種。
將(jiang)被(bei)檢(jian)材(cai)料(liao)接(jie)種(zhong)於(yu)適(shi)宜(yi)培(pei)養(yang)基(ji),再(zai)於(yu)固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)表(biao)麵(mian)生(sheng)長(chang)的(de)菌(jun)落(luo)中(zhong),選(xuan)樣(yang)欲(yu)分(fen)離(li)菌(jun)的(de)單(dan)個(ge)菌(jun)落(luo),移(yi)種(zhong)於(yu)另(ling)一(yi)適(shi)宜(yi)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)培(pei)養(yang)。因(yin)為(wei)一(yi)個(ge)菌(jun)落(luo)通(tong)常(chang)由(you)一(yi)個(ge)細(xi)菌(jun)生(sheng)長(chang)繁(fan)殖(zhi)所(suo)形(xing)成(cheng),故(gu)培(pei)養(yang)出(chu)的(de)細(xi)菌(jun)是(shi)單(dan)一(yi)的(de)種(zhong)類(lei),即(ji)純(chun)培(pei)養(yang)。
用特殊的培養環境(如厭氧、二氧化碳環境等)分離細菌。
將jiang被bei檢jian材cai料liao接jie種zhong子zi易yi感gan動dong物wu體ti內nei,使shi病bing原yuan菌jun在zai動dong物wu體ti內nei繁fan殖zhi,然ran後hou從cong動dong物wu體ti內nei取qu材cai料liao利li用yong離li心xin機ji進jin行xing離li心xin分fen離li出chu需xu要yao的de成cheng分fen後hou培pei養yang。利li用yong某mou些xie細xi菌jun對dui一yi些xie理li化hua因yin素su有you特te殊shu抵di抗kang力li,用yong理li化hua方fang法fa處chu理li接jie種zhong材cai料liao,殺sha死si其qi他ta微wei生sheng物wu而er保bao存cun需xu要yao的de細xi菌jun,再zai分fen離li培pei養yang。
一般情況下,被檢材料用前兩種方法分離培養即可。如披撿材料汙染嚴重,可先用後兩種方法處理,再用前兩種方法獲得純培養。
在分離培養操作中,嚴格遵守無菌操作。所有用具、培養基、試劑都要經過滅菌,而且不能長時間暴露於空氣中。禁止用手接觸或用口吹已滅菌的器皿內部。
根據被檢材料中可能存在的病原苗的特性,選擇適當的培養基和培養條件:(溫度、氣體環境等)。進行未知菌的初次分離,最好多用幾種培養基,如肉湯、鮮血瓊脂、麥康克瓊脂等,每種培養基接種數管,分別放在普通環境和厭氧環境中培養。一般經過24—78小時觀察結果,但也有一些病原菌,需要培養校長時間才能生長。
被檢材料一般不需要處理,直接按種於培養基上。當懷疑為有芽腦的病原苗時,可將被檢材料加生理鹽水磨碎,作成1:10乳劑(液體材料不必稀釋),置60-80℃水浴中20—30分鍾,以殺死無芽胞的雜菌,然後再接種於培養基中。
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